老年脑梗死后认知功能障碍患者血清骨钙素、G蛋白耦联雌激素受体30水平变化及其与预后的相关性研究

王志强，姬要可，李艳华，赵建，孙丽萍

1.平顶山市第二人民医院神经内科，河南 平顶山 467000；

2.河南省人民医院神经内科，河南 郑州 450000

脑梗死是危急脑血管的疾病，认知功能障碍是该疾病常见的遗留症状。相关数据统计结果显示，75%以上的脑梗死患者存在不同程度的认知功能丧失，其发生主要与神经细胞凋亡有关[1]。研究发现骨钙素与大脑认知功能有关，通过血脑屏障特异性结合神经元促进神经递质合成及信号传递，对认知功能发挥正性调节作用[2]。G蛋白耦联雌激素受体30(G protein coupled estrogen receptor，GPER 30)是非典型性雌激素膜性受体，于多种细胞中广泛表达，可独立介导雌激素的非基因组效应，发挥促神经元修复、抗神经炎症等作用，因此推测其可能为改善认知功能的潜在靶点，参与脑梗死后认知功能障碍发生、进展过程[3]。但现阶段上述指标在脑梗死后认知功能障碍方面的研究较少。本研究首次联合血清骨钙素、GPER 30水平分析与脑梗死患者认知功能障碍的相关性，以期为临床改善脑梗死患者认知预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究符合《赫尔辛基宣言》要求，征得平顶山市第二人民医院伦理委员会和患者家属签字同意，前瞻性选取2021 年1 月至2022 年10 月平顶山市第二人民医院收治的115例老年脑梗死患者作为研究对象。纳入标准：(1)经头颅CT、MRI影像学检查确诊；(2)年龄＞60 岁；(3)发病至就诊时间＜48 h；(4)自身免疫系统无明显异常；(5)近期无糖皮质激素等激素类用药史；(6)听力、视力正常，交流无障碍。排除标准：(1)伴有多发性神经系统退行性疾病；(2)短暂性脑缺血发作；(3)存在颅内创伤史；(4)合并脑血管畸形；(5)存在血液系统疾病、重要脏器病变；(6)伴有焦虑、抑郁等异常精神状态；(7)其他原因所致认知功能障碍。115 例患者中男性66 例，女性49 例；年龄61～78 岁，平均(68.94±3.82)岁；体质量指数18～27 kg/m2，平均(22.05±1.73) kg/m2；受教育年限3～16 年，平均(9.57±2.92)年。

1.2 研究方法

1.2.1 认知功能评估 采用蒙特利尔认知评估量表(MOCA)[4]评估，量表包括8个认知领域：语言(计3 分)、注意力(计6 分)、视空间与执行能力(计5 分)、延迟记忆(计5分)、瞬时记忆(不计分)、命名(计3分)、定向力(计6分)、抽象思维(计2分)，若受教育年限≤12年，则加1分，计分0～30分；认知功能分级：≥26分为无认知功能障碍，18～26 分为轻度障碍，10～17 分为中度障碍，＜10分为重度障碍(痴呆)。将MOCA评分＜26分计入障碍组，MOCA评分≥26分计入无障碍组。

1.2.2 血清骨钙素、GPER 30 水平检测 分别于脑梗死后第3天、3个月检测：采集5 mL晨空腹肘静脉血，离心10 min(5 000 r/min)分离血清，以酶联免疫吸附法测定血清骨钙素水平。从静脉血中提取外周血单个核细胞，检测GPER 30 mRNA 相对表达量：将外周血单个核细胞置于冰上，制备蛋白样品，采用Micro BCATM 蛋白检测试剂盒(美国贝克曼库尔特公司)测定蛋白浓度，进行蛋白电泳-转膜-封闭-抗体-显影，将显影图像上传至Image J软件，将特异条带灰度值数字化，获取GPER 30蛋白相对灰度值。采用Tranzolup试剂盒(北京全式金生物公司)提取细胞RNA，逆转录合成cDNA，行实时定量聚合酶链反应，提取10 μL扩增产物，电泳(1.5%琼脂糖凝胶)图像经图像分析系统扫描，β-actin作为内参，计算GPER 30 mRNA相对表达量。

1.3 预后判定标准[5]障碍组患者均给予常规对症治疗，包括营养脑神经、保护脑细胞、认知功能训练等，治疗3个月后评估疗效。疗效指数=(治疗后MOCA评分-治疗前MOCA 评分)/治疗前MOCA 评分。显效：疗效指数＞50%；有效：疗效指数20%～50%；无效：疗效指数＜20%。将无效计为预后不良，显效、有效计为预后良好。

1.4 观察指标 (1)比较障碍组和无障碍组患者的性别、年龄、体质量指数、受教育年限、基础疾病、神经功能缺损(NIHSS)评分、发病部位及血清骨钙素、GPER 30 水平；(2)分析影响老年脑梗死后认知功能障碍的因素；(3)比较障碍组中不同认知障碍程度患者和不同预后患者的血清骨钙素、GPER 30 水平；(4)分析血清骨钙素、GPER 30 水平与认知障碍程度和预后的相关性。

1.5 统计学方法 应用SPSS23.0 统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用独立样本t检验；计数资料比较采用χ2检验；采用多因素Logistic回归分析老年脑梗死后认知功能障碍的因素，采用Spearman分析血清骨钙素、GPER30 水平与认知障碍程度和预后间的相关性。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 障碍组和无障碍组患者的一般资料及血清骨钙素、GPER 30 水平比较 两组患者的性别、体质量指数、基础疾病、发病部位比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；但两组患者的年龄、NIHSS 评分、骨钙素、GPER 30 蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA 相对表达量比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 障碍组和无障碍组患者的一般资料及血清骨钙素、GPER 30水平比较[例(%)，±s]Table 1 Comparison of general information,serum osteocalcin,and GPER 30 levels between the impaired and unimpaired groups[n(%), ±s]

表1 障碍组和无障碍组患者的一般资料及血清骨钙素、GPER 30水平比较[例(%)，±s]Table 1 Comparison of general information,serum osteocalcin,and GPER 30 levels between the impaired and unimpaired groups[n(%), ±s]

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2.2 老年脑梗死后认知功能障碍的影响因素 以老年脑梗死患者是否发生认知功能障碍为因变量(未发生=0，发生=1)，以年龄(＜69 岁=1，≥69 岁=2)、NIHSS 评分(＜10.70 分=1，≥10.70 分=2)、骨钙素(＜11.70ng/mL=1，≥11.70 ng/mL=2)、GPER 30蛋白相对灰度值(＜0.56=1，≥0.56=2)、GPER 30 mRNA相对表达量(＜0.79=1，≥0.79=2)为自变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示，年龄、NIHSS评分、骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量是老年脑梗死患者认知功能障碍发生的影响因素(P＜0.05)，见表2。

表2 影响老年脑梗死后认知功能障碍因素的多因素Logistic回归分析Table 2 Multi-factor logistic regression analysis of factors influencing cognitive impairment after cerebral infarction in the elderly

2.3 障碍组不同认知障碍程度患者的血清骨钙素、GPER 30 水平比较 不同认知障碍程度患者的骨钙素、GPER 30 蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA 相对表达量比较，轻度＞中度＞重度，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 障碍组不同认知障碍程度患者的血清骨钙素、GPER 30水平比较(±s)Table 3 Comparison of serum osteocalcin and GPER 30 levels in patients with different levels of cognitive impairment in the impaired group(±s)

表3 障碍组不同认知障碍程度患者的血清骨钙素、GPER 30水平比较(±s)Table 3 Comparison of serum osteocalcin and GPER 30 levels in patients with different levels of cognitive impairment in the impaired group(±s)

注：轻度：18～26分，中度：10～17分，重度＜10分。Note:Mild:18 to 26 points;moderate:10 to 17 points;severe:＜10 points.

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2.4 血清骨钙素、GPER 30水平与认知障碍程度的相关性 经Spearman 分析结果显示，血清骨钙素、GPER 30 蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量与老年脑梗死后认知障碍程度(赋值方式：MOCA评分0～9 分=1，MOCA 评分10～20 分=2，MOCA 评分21～26分=3)呈正相关(r=0.784、0.715、0.673，P＜0.05)。

2.5 障碍组不同预后患者的血清骨钙素、GPER 30 水平比较 障碍组预后良好患者的血清骨钙素、GPER 30 蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量水平高于预后不良组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表4。

表4 障碍组不同预后患者的血清骨钙素、GPER 30水平比较(±s)Table 4 Comparison of serum osteocalcin and GPER 30 levels in patients with different prognosis in the impaired group(±s)

表4 障碍组不同预后患者的血清骨钙素、GPER 30水平比较(±s)Table 4 Comparison of serum osteocalcin and GPER 30 levels in patients with different prognosis in the impaired group(±s)

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2.6 血清骨钙素、GPER 30 水平与预后的相关性 经Spearman分析结果显示，血清骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量与老年脑梗死后认知障碍预后(赋值方式：预后良好=0，预后不良=1)呈负相关(r=-0.675、-0.663、-0.584，P＜0.05)。

3 讨论

本研究采用MoCA 量表评估老年脑梗死患者认知功能，该量表有较高敏感性、特异性，可高效快速筛查是否存在认知功能障碍，已成为国际公认的血管性认知损害评估量表。本研究发现，与MoCA评估无障碍组比较，障碍组骨钙素、GPER 30 蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA 相对表达量均有降低。多因素相关分析结果显示，年龄、NIHSS 评分与上述指标均为老年脑梗死患者认知功能障碍发生的影响因素。已有证据表明年龄、NIHSS评分与脑梗死认知功能障碍之间有明确联系[6-7]。刘娜等[8]研究表明，血清骨钙素与帕金森病发病有关，参与患者认知障碍的发病过程。本研究重度认知功能障碍患者血清骨钙素最低，其次为中度、轻度，参与脑梗死患者认知障碍进展过程。骨钙素是成骨细胞分泌的特异性表达蛋白，不仅可调节骨质矿化过程，还能进入血液循环，作为内分泌激素沉淀积蓄于丘脑、脑干、下丘脑中，影响神经递质信号传导[9-11]。杨倩等[12]研究指出骨钙素参与糖脂代谢，其水平与2型糖尿病合并认知功能障碍患者糖化血红蛋白、简易精神状态检查量表评分有关，表明机体糖代谢可能是骨钙素脑梗死认知障碍进展之间的潜在通路。骨钙素可刺激脑源性神经营养因子，以海马CA3 神经元区域的G蛋白偶联受体为介导，传递对海马依赖性记忆调节的信号[13]。

有研究显示，外周血GPER 30表达水平与脑小血管病所致认知功能障碍有关[14]。GPER 30一方面可参与免疫反应、炎症反应、妇科恶性肿瘤等多种雌激素依赖性疾病，在雌激素非基因组效应中扮演重要角色；另一方面在脑血管疾病中发挥神经功能保护的作用[15-16]。本研究发现，不同认知障碍程度患者GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量比较，轻度＞中度＞重度，综合国内外研究进行分析：GPER 30可介导神经甾体17β雌二醇参与抗氧化神经保护效应，激活下游信号通路，进而达到神经保护效果；GPER 30作为星形胶质细胞，可通过p38 MAPK信号通路调控动脉粥样硬化，以保护神经功能；GPER 30 激活可调节ERK、AKT促生存信号通路，缓解神经炎症损伤，保护神经元，抑制神经细胞凋亡、认知功能障碍[17-19]。此外，本研究进一步分析相关性，障碍组血清骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量与老年脑梗死后认知障碍程度呈正相关，与预后呈负相关关系，可作为老年脑梗死后认知障碍早期干预的参考指标，对临床改善患者认知功能预后具有指导意义。

综上所述，老年脑梗死患者认知功能障碍发生受骨钙素、GPER 30 蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量影响，其水平变化与认知障碍严重程度及预后均相关。