在艾滋病检验中人类免疫缺陷病毒抗体酶联免疫吸附法筛查结果的研究及临床价值分析

段艳鸽

开封市第二中医院检验科，河南 开封 475000

艾滋病（AIDS）是人体感染人类免疫缺陷病毒（HIV）后导致的具有极强传染性的感染性疾病，患者感染后表现为盗汗、虚弱、全身淋巴结肿大、持续性发热等症状，且随着疾病发展到晚期，能诱发严重感染和恶性肿瘤，无法治愈［1-2］。研究发现，HIV 能直接攻击人体免疫系统，损害淋巴细胞，致使免疫功能减弱甚至丧失，出现反复感染，是社会和医学高度关注的严重公共卫生问题［3］。AIDS 具有潜伏期长和高死亡率、危害范围广、高传播性等特点，可经血液或是血制品、性接触、母婴传播，人群普遍易感，受居民性生活提前、生活方式及性生活思想转变等因素影响，AIDS 的发病率逐年上升，对患者生命安全危害极大［4-5］。临床当前针对AIDS的治疗缺乏特效和有效疗法，因此，及时有效、准确且快速筛查HIV抗体阳性，早发现、早监测并及早开展科学诊治为临床控制AIDS 病情发展和防控HIV 病毒广泛传播的关键，在改善AIDS 患者生活质量中意义重大，对提升患者预后存在重要作用。蛋白印迹法为临床筛查和确诊AIDS“金标准”，能帮助医师准确判断和评估AIDS病情，但检测的操作步骤相对复杂，且检测价格较为高昂，获得结果所需时间较长，不适用于基层医院筛查高危群体。酶联免疫吸附法（ELISA）及胶体金法作为筛查HIV 抗体阳性的常用手段，在临床检测中得到较好的应用，有助于及时检出HIV感染，为指导干预提供依据［6-7］。鉴于此，本研究应用ELISA法及胶体金法筛查AIDS中HIV抗体，旨在探究其临床应用价值，为临床合理选择筛查方法和早期诊治提供依据，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择开封市第二中医院2018年1月—2020年5月收治的130 例疑似HIV感染者作为研究对象，本研究获医院医学伦理委员会批准。其中男75 例，女55 例；年龄24～67岁，平均年龄（45.53±3.71）岁；体重52～64 kg，平均体重（56.81±2.94）kg；文化程度：初中及以下者69 例，高中/中专者38例，大专及以上者23例。纳入标准：（1）病例资料完整；（2）入组前2～4周内产生腹痛/腹泻、恶心呕吐、皮疹、疲乏、头痛等相关症状表现，且有HIV感染相关高危行为；（3）HIV感染高危人群；（4）认知正常，能正常交流；（5）均接受蛋白印迹法、ELISA法及胶体金法筛查；（6）所有患者及家属均对本研究知情，签署同意书。排除标准：（1）存在脑部器质性病变；（2）伴有其他系统恶性肿瘤、凝血功能筛查显示异常；（3）肝、肾、心、肺功能不全；（4）原发性疾病；（5）严重机体感染；（6）有其他免疫疾病者，或是正在接受免疫治疗；（7）精神疾病，无法配合完成本次研究。

1.2 方法

采集所有疑似HIV 感染者空腹6 mL 肘静脉血，以3 500 r/min 速度离心处理10 min，离心半径为10 cm，留取上层血清，于低温环境下保存待检。仪器采用酶标仪（奥地利TICAN公司生产的，型号为sunrise）、洗板机（郑州安图生物工程有限公司生产，型号为安图iwo-960）、微量加样器（上海求精生化试剂公司），蛋白印迹法检测试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供，胶体金法试剂由广州万孚生物公司提供，ELISA试剂由珠海丽珠试剂公司提供。分别采用蛋白印迹法、胶体金法及ELISA检测HIV抗体，检测期间所有医护人员均须保证血样及仪器性能的良好性，均行有效校准，所有操作均严格遵循试剂盒要求进行。

1.3 观察指标

（1）统计并对比分析蛋白印迹检测法、胶体金法和ELISA法对HIV抗体阳性的检出率。（2）以蛋白印迹检测法结果视作HIV 抗体阳性诊断的“金标准”，分析胶体金法、ELISA法在HIV阳性中的诊断价值，另分析两种方法与蛋白印迹检测法在HIV 抗体阳性诊断中的一致性。以n表示总例数，a 表示真阳性，b 表示假阳性，c 表示假阴性，d 表示真阴性。灵敏度=a/（a+c）×100%，特异度=d/（b+d）×100%，准确度=（a+d）/n×100%，阳性预测值=a/（a+b）×100%，阴性预测值=d/（c+d）×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。胶体金法与ELISA法诊断HIV抗体阳性与蛋白印迹检测法结果的一致性使用kappa检验，kappa值≥0.75表示一致性良好，0.4～0.74 表示一致性尚可，＜0.4 表示一致性不佳。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果

经蛋白印迹检测法检测共检出HIV 抗体阳性患者62例，阴性68 例，阳性检出率为47.69%（62/130）；胶体金法检出HIV 抗体阳性共54 例，阴性76 例，阳性检出率为41.54%（54/130）；ELISA 法检出HIV 抗体阳性共61 例，阴性69 例，阳性检出率为46.92%（61/130）。三种方法在HIV 抗体阳性检出率比较，差异无统计学意义（χ2=1.179，P＞0.05）。

2.2 诊断价值

ELISA 法在HIV 抗体阳性检出中灵敏度、准确度及阴性预测值均高于胶体金法，差异有统计学意义（P＜0.05）；两种方法在特异度及阳性预测值比较中，差异无统计学意义（P＞0.05）；kappa检验显示：ELISA法与蛋白印迹检测法结果的一致性良好（kappa 值=0.954，P＜0.001）；胶体金法与蛋白印迹检测法的一致性尚可（kappa值=0.752，P＜0.001），见表1、表2。

表1 ELISA法与胶体金法在HIV抗体阳性中的检出结果 例

表2 ELISA法与胶体金法在HIV抗体阳性中的诊断价值 例（%）

3 讨论

目前，临床对于HIV病毒的检测方法较多，包括蛋白印迹检测法、ELISA法和胶体金法等，其中蛋白印迹检测法为临床确诊HIV病毒感染金标准，诊断准确性高，常用于临床确诊试验，但存在操作复杂和结果等待时间相对较长、价格昂贵、不适用于基层医院广泛筛查等局限［12-14］。胶体金法在HIV 抗体检测中应用频率较高，具有操作简单、检测迅速、便于携带等多种优势［15］。利用层析免疫技术，将胶体金作为标记物，检测时无需其他仪器的辅助，能够快速获得检测结果［16］。但胶体金法对于HIV抗体阳性检出率不高，且对HIV 抗体灵敏度和准确性较差。ELISA法能在抗体结合酶后，不会造成抗体免疫性反应发生特异性改变，且对酶的活性无显著不良影响，在补充底物后可引起基质水解呈色，还可促使还原性氢体颜色发生改变，再经呈色发现酶，于细胞水平上发现抗体部位，筛查敏感性与特异性较高［17-18］。本研究结果显示，经蛋白印迹检测法检测HIV抗体阳性检出率为47.69%，胶体金法HIV抗体阳性检出率为41.54%，ELISA 法HIV 抗体阳性检出率为46.92%；ELISA法在HIV抗体阳性检出中灵敏度、准确度及阴性预测值均高于胶体金法，kappa 检验显示：ELISA法与蛋白印迹检测法结果的一致性良好；胶体金法与蛋白印迹检测法的一致性尚可。表明与胶体金法相比，ELISA法在AIDS 患者HIV 抗体阳性诊断中应用价值更高，能够有效提高HIV抗体阳性检出率，并与蛋白印迹检测法一致性较强，可为临床提供可靠的诊断依据。ELISA法能够对HIV抗体进行直接检测，不受脂血或是溶血等其他因素影响，于室温环境下即可开展检测操作，不需借助其他特殊设备，且一次能对多个样本进行检测，具有操作简单、窗口期短等优势，可早期检测出血液及组织标本中微量HIV抗体，使HIV抗体检出率进一步提高，灵敏度、特异度均较高，便于临床广泛筛查。但因ELISA检测需其他设备支持，检测时间较长，适用于大批量的样本检测。HIV抗原与其他反转录病毒间存在交叉反应，临床应用ELISA法检测时若出现假阳性，可采用复核的方式以降低假阳性率。同时，在运用ELISA法测定HIV抗体时，应注意血液标本为临床检测主体，若标本出现异常，可对检测结果可靠性及准确性造成严重影响，出现假阳性或是假阴性，故需确保血液标本不受污染；其次，需合理选择试剂，在检测前需对所用试剂开展全面且安全的预处理；再者，标本质量对检测结果存在重要影响，分离血清时需确保彻底分离，预防纤维蛋白混入检测血清样本等状况发生，避免假阳性发生，而在保存血清时需选择冷冻保存，防止反复冻融而破坏蛋白分子，避免假阴性结果出现，且所有检测操作均需严格依据相关规范流程开展。

综上所述，采用ELISA法筛查HIV抗体具有较高的临床应用价值，可将其作为AIDS 初始筛选的方法，灵敏度、特异度均较高。