利胆化痰活血方对代谢综合征大鼠肥胖相关指标的药效学影响∗

阮 君，尚浩南，刘 雨，张 强，刘凯利，张 力，肖铁刚，王 兵△

1 上海中医药大学附属市中医医院，上海 200070；2 上海交通大学附属第六人民医院，上海 200233； 3 上海市第八人民医院，上海 200235

代谢综合征（metabolic syndrome，MS）是以肥胖、高血糖、血脂异常及高血压等聚集发病的临床症候群，严重影响机体健康［1］。单一对症的药物治疗模式对于MS 相关组分疾病的治疗作用明显，但体质量、腰围的下降不显著［2］。当下，国内外对于MS 的治疗已在单一对症药物治疗的基础上对MS 患者进行健康的生活方式干预［3-4］。中医学无“代谢综合征”一词，根据其临床表现可将其归于“消渴”“眩晕”“头痛”“湿阻”“肥满”等范畴。利胆化痰活血方具有清热利胆、化痰活血之功效，临床疗效显著。本研究从动物实验角度探讨利胆化痰活血方对MS 大鼠肥胖相关指标的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物42 只SPF 级雄性SD 大鼠，体质量（150±20）g，6～8 周龄，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物许可证号：SCXK（沪）2012-001。饲养于上海市第六人民医院动物房，SPF 级，饲养室温度22～26 ℃，湿度40%～70%，昼夜明暗交替（12 h/12 h），每笼4～5 只，自由活动，予充足饲料及饮用水。

1.2 饲料高脂高糖高盐饲料：繁殖鼠料47%，猪油18.9%，胆固醇1.3%，胆盐0.3%，蔗糖14%，酪蛋白8.7%，食盐5%，预混料1.8%，麦芽糊精3%；普通饲料：水分≤10%，粗蛋白质≥20.5%，粗脂肪≥4%，粗纤维≤5%，粗灰分≤8%，钙1.0%～1.8%，总磷0.6%～1.2%，赖氨酸≥1.32%，蛋氨酸+胱氨酸≥0.78%，购于中国科学院上海斯莱克实验动物有限公司。

1.3 实验药品利胆化痰活血方颗粒剂（玉米须30 g，虎杖15 g，制半夏6 g，陈皮9 g，丹参15 g）（四川新绿药业科技有限发展公司），购于上海中医药大学附属龙华医院。将利胆化痰活血方颗粒剂兑成每l mL 药液分别含生药1.25、2.5、5 g 的药液，并保存于4 ℃冰箱中备用。

1.4 实验方法

1.4.1 造模及分组 将42只SD大鼠随机分为普通饲料喂养的空白组（Control 组，9 只）和高脂高糖高盐饮食喂养的造模组（Model 组，33 只），喂养12 周建立代谢综合征大鼠模型。成模后将模型组分为代谢综合征组（MS 组，8 只）、利胆化痰活血方低剂量组（LHH-L 组，8 只）、利胆化痰活血方中剂量组（LHH-M 组，8 只）、利胆化痰活血方高剂量组（LHH-H组，9只）。

1.4.2 给药方法 Control 组和MS 组予生理盐水灌胃，LHH-L 组、LHH-M 组、LHH-H 组以相应浓度的中药液灌胃，每只5 mL/kg，灌胃干预时间为6周。Control组继续普通饲料喂养，MS组、LHH-L组、LHH-M组、LHH-H组均继续高脂高糖高盐饲料喂养。

1.5 观察指标

1.5.1 一般情况 每日观察大鼠的精神状态、体态、活动度、毛发、二便、饮水量。

1.5.2 肥胖指标测定 观察并测定大鼠体质量、腹围、体长、内脏脂肪，计算肝体比=肝湿质量／体质量×l00%；脂肪系数=内脏脂肪质量/体质 量×100%。Lee´s 肥 胖 指 数：Lee´s INDEX=

1.6 统计学方法采用SPSS 21.0 统计软件进行统计学分析。实验所得数据采用±s表示，符合正态分布即采用t检验或单因素方差分析。非正态分布、方差不齐则采用非参数检验；两两比较，正态分布，方差齐时采用LSD法和S-N-K法，正态分布、方差不齐时用Tamhane´s T2 法和Dunnett´s T3法。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况整个造模及治疗期间，Control组大鼠体态活泼、毛发平整光泽，饮食饮水正常，大便呈颗粒状；MS 组大鼠较治疗组大鼠肥胖少动，精神萎靡嗜睡，毛发粗糙发黄无光泽，粪便软黏，无明显腹泻。

2.2 大鼠肥胖指数6周后，与Control组相比，MS组体质量、肝湿质量、肝体比均增高（P＜0.01）。与MS 组比较，LHH-H 组大鼠体质量、肝湿质量、肝体比降低（P＜0.05）；LHH-L组、LHH-M组体质量、肝湿质量较MS组无统计学差异（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠体质量、肝湿质量及肝体比较（±s）

表1 各组大鼠体质量、肝湿质量及肝体比较（±s）

注：与Control比较，*表示P＜0.01；与MS组比较，Δ表示P＜0.01

肝体比（%）2.2±0.16 4.0±0.39*3.6±0.27Δ 3.9±0.40 3.5±0.33Δ组别Control组MS组LHH-L组LHH-M组LHH-H组鼠数98889体质量（g）525.5±41.02 583.6±41.47*556.6±41.18 543.5±39.51 539.3±35.68Δ肝湿质量（g）12.0±1.50 23.3±2.22*20.7±3.13 21.2±2.96 19.8±1.47Δ

2.3 大鼠体脂水平灌胃6周后，与Control组比较，MS组大鼠内脏脂肪质量，计算脂肪系数及Lee´s肥胖指数升高（P＜0.05）。与MS组比较，LHH-L组、LHH-M组内脏脂肪质量无明显变化（P＞0.05）；LHH-M组脂肪系数降低（P＜0.05）；LHH-H组内脏脂肪质量及脂肪系数降低明显（P＜0.01）；LHH-H 组、LHH-M 组lee´s 肥胖指数较MS 组降低（P＜0.05）。各组体长及腹围无明显变化（P＞0.05）。见表2。

表2 各组大鼠内脏脂肪质量、脂肪系数、腹围、体长及Lee´s肥胖指数比较（±s）

表2 各组大鼠内脏脂肪质量、脂肪系数、腹围、体长及Lee´s肥胖指数比较（±s）

注：与Control比较，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；与MS组比较，ΔΔ表示P＜0.01，Δ表示P＜0.01

组别Control组MS组LHH-L组LHH-M组LHH-H组鼠数Lee's肥胖指数2.87±0.07 3.00±0.05**2.96±0.10 2.91±0.08Δ 2.91±0.08Δ 98889肥胖指数内脏脂肪质量（g）1.43±0.24 1.73±0.35*1.68±0.24 1.56±0.25 1.27±0.17ΔΔ脂肪系数（%）0.26±0.02 0.34±0.08*0.31±0.05 0.26±0.06Δ 0.23±0.04ΔΔ腹围（cm）17.7±1.03 18.8±1.20*18.3±1.16 18.1±0.73 17.8±0.79体脂水平体长（cm）28.3±0.62 27.9±1.06 27.9±1.06 28.1±0.50 28.5±0.94

3 讨论

近年来，经济发展和生活方式的改变使MS 在全世界的患病率逐年上升。在中国，城市居住的人 口MS 患 病 率1990 年 是25.84%，2000 年 是35.39%，2014 年底则高达54.7%［5］。作为MS 的关键危险因素之一的肥胖，在过去的25 年里，73 个国家的儿童和成人的患病率增加了1 倍，至2015年，全球有6.037 亿肥胖成年人，根据LAURA 等［6］的说法，到2030 年，男性和女性的超重和肥胖率将分别达到89%和85%。肥胖是一个全球性的危机，MS也已成为世界性的公共卫生问题［7］。

代谢综合征的作用机制尚不明确，1988 年，REAVEN［8］首先提出胰岛素抵抗是MS 的发病基础，目前多认为MS 是遗传和环境因素之间相互作用的慢性低等级炎症的状态，胰岛素抵抗、内脏脂肪过多、免疫和炎症是造成MS 的几个主要因素［9］。而肥胖与MS 更是密切相关，其相互作用机理有二：一是脂肪酸理论。因膳食结构及生活方式的改变，现代人能量摄入过多，多余的能量储存为脂肪，导致脂肪堆积，促进激素敏感的脂肪酶活性和脂肪细胞的甘油三酯大量分解，特别是腹部脂肪组织，过量释放游离脂肪酸［10］，使肝糖原代谢紊乱，胰岛β细胞功能减退［11-12］，致血糖升高；游离脂肪酸过量刺激肝脏极低密度脂蛋白的输出，导致高甘油三酯血症。由游离脂肪酸介导产生活性氧导致内皮细胞功能障碍，高胰岛素诱发交感神经系统激活和抑制一氧化氮的合成酶，均可致高血压［13］。二是脂肪细胞因子的分泌。脂肪组织会释放出多种细胞因子，包括瘦素、抵抗素、内酯素、脂联素、炎性细胞因子、抗炎素、黏蛋白素、纤溶酶原激活物抑制剂1 和血管紧张素等，是新兴的代谢危险因素。有保护性因子预防糖尿病和心血管疾病；危险因子导致代谢疾病或心血管疾病。已经有广泛的研究讨论了不同的脂类物质如何影响系统代谢［14］。瘦素可以抑制能量摄入［15］，瘦素基因缺陷的人胃口大，并且严重肥胖［16-17］，在正常情况下，当脂肪组织扩张时，瘦素的释放会增强［18］减少了代谢危险因素［19］。另一种保护性脂肪因子就是脂联素，其水平与代谢危险因素成反比［20］，能控制脂肪代谢和胰岛素敏感性，加速骨骼肌脂肪酸氧化，减少脂质堆积，改善胰岛素抵抗。

体质量的改变可以改善糖尿病、高血压、血脂紊乱状态。最新结果显示，体质量减轻15 kg 的患者，2 型糖尿病的缓解率达到86%，体质量减轻10 kg 的患者，2 型糖尿病的缓解率达到46%［21］。研究表明，体质量降低4.5 kg，可使收缩压下降10 mm Hg（1 mm Hg≈0.133 kPa），舒 张 压 下 降5 mm Hg［22］。研究显示，体质量减轻10 kg，心血管事件的发生率减少40%，体质量指数≥24 的人群甘油三酯异常检出率为正常人群的2.5 倍，高密度脂蛋白降低检出率为正常人群的1.8 倍，而BMI≥28 人群甘油三酯异常检出率为正常人群的3 倍，高密度脂蛋白降低检出率为正常人群的2.1倍。

人体内脏脂肪包括白色脂肪和棕色脂肪两种脂肪组织。白色脂肪组织主要以甘油三酯的形式储存能量，而棕色脂肪组织能特异性表达线粒体脱偶连蛋白1 抗体，通过产热参与能量消耗。通过棕色脂肪组织消耗能量能够减少白色脂肪组织中脂肪的存储量［23-24］。在棕色脂肪组织中，胆汁酸激活膜受体G蛋白偶联胆汁酸受体5，诱导腺苷环磷酸依赖的2 型甲状腺激素脱碘酶活性增加，甲状腺素4 转化为三碘甲状腺原氨酸，产生更多热量，耗能增加，减轻体质量［25］。玉米须为利胆化痰活血方的君药，多项研究证明玉米须醇提取物可抑制脂肪合成相关基因的表达，促进脂肪分解和脂肪氧化相关基因的表达，玉米须类黄酮可通过激活Caspase 级联反应和改善线粒体功能障碍诱导3T3-L1 前脂肪细胞凋亡，最终导致脂肪组织质量降低［26］。余渊等［27］认为，玉米须总皂苷可以使肥胖引起的增大脂肪细胞缩小，对内脏脂肪湿质量、体脂比、血糖、血脂均有很好的调控作用，增加脂肪甘油三酯脂肪酶表达，进而促进肥胖大鼠脂肪分解，最终降低大鼠体质量。同时其可以较好地改善棕色脂肪细胞病理学，明显升高能量代谢蛋白UCP1 和白色脂肪细胞转化为棕色脂肪细胞，调节蛋白PRDM16 的表达，进而达到降低体质量的目的［28］。实验研究证明，虎杖可抑制胰脂肪酶和脂肪生成，减少脂肪堆积从而达到降脂目的。证据提示橘皮素、川陈皮素同时具有预防肥胖、降血脂和保护肝脏的效果。

综上所述，高剂量利胆化痰活血方可减轻内脏脂肪质量及脂肪系数，其机制可能与胆汁酸代谢及棕色脂肪组织调节代谢能力有关。