TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值

薛 桐,陈奎生,韦 娜,孙淼淼

郑州大学第一附属医院病理科 郑州 450052

宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一[1]。宫颈鳞状上皮内病变是宫颈癌的癌前病变,分为低级别鳞状上皮内病变及高级别鳞状上皮内病变,其中大多数低级别病变可自然消退[2],而有5%～12%的高级别病变可进展为宫颈癌[1]。早期筛查能够显著降低宫颈癌的发病率。2020年美国阴道镜和子宫颈病理学会提出现阶段宫颈癌初筛采用的方法是人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)检测联合液基薄层细胞学检查(thin-prep cytology test,TCT)[3]。TCT具有较高的特异度,但是其敏感度易受切片制备方法、染色水平及医师阅片水平影响。我国目前仍以细胞学作为宫颈癌主要的筛查手段,但是总体筛查水平不满意[4]。此外,许多HPV感染大多是一过性的,肿瘤转化较罕见,所以HPV DNA筛查的假阳性率较高[5-6]。本研究探讨TCT联合p16/Ki-67双染、HPV mRNA E6/E7检测对宫颈鳞状上皮内病变的诊断价值,以期寻找更为精确地发现宫颈鳞状上皮内病变的方法。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2019年1月至2021年12月在郑州大学第一附属医院病理科行细胞学筛查并在1个月内行宫颈病理组织学检查的女性患者624例,年龄18～81岁。纳入标准:①进行TCT、p16/Ki-67双染和HPV E6/E7 mRNA检测,并在随后1个月内行宫颈活检。②病理组织学确诊存在宫颈鳞状上皮内病变或慢性炎症。排除标准:①有宫颈癌病史。②有子宫切除史。③存在阴道毛滴虫等病原体感染。④哺乳及妊娠期。经病理组织学诊断,慢性炎症183例,低级别鳞状上皮内病变176例,高级别鳞状上皮内病变227例,鳞状细胞癌38例。

1.2 TCT采用新柏一次性宫颈采样拭子于宫颈鳞柱交界处沿同一方向旋转,取出后置于新柏氏细胞保存液。离心后使用THINPREP 2000系统制成薄层细胞涂片并进行巴氏染色。采用文献[7]的方法将TCT结果分为阴性和阳性。

1.3 p16/Ki-67双染使用p16/Ki-67检测试剂盒(瑞士罗氏公司)检测。取新柏细胞保存液中的宫颈脱落细胞进行程序化处理:制片、染色、封固,加盖玻片,读片。结果判定标准:以同一个细胞同时出现细胞质棕染和细胞核红染者为p16/Ki-67双染阳性[6]。

1.4 HPV E6/E7 mRNA检测取宫颈脱落细胞,采用定量检测试剂盒(科蒂亚)检测 HPV E6/E7 mRNA。结果参考文献[8]进行阳性和阴性判定。

1.5 统计学处理采用SPSS 26.0分析。采用Kappa值比较不同方法单独或联合检测宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。一种或两种方法联合检查时,一种结果为阳性即判读为阳性;3种及以上方法联合检查时,有两种或两种以上结果为阳性时,判读为阳性。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 TCT、p16/Ki-67双染和HPV E6/E7 mRNA单独及联合检测与病理学检测结果比较见表1。

表1 TCT、p16/Ki-67双染和HPV E6/E7 mRNA单独及联合检测与病理学检测结果比较 例

2.2 各联合检测方法对宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能见表2。以病理组织学检测结果为金标准,计算各检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。两种方法联合检测具有较高的敏感度,但是特异度较低;3项联合检测的特异度较高。

表2 各联合检测方法对宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能 %

3 讨论

多种方法联合检测在宫颈鳞状上皮内病变的诊断中具有较高的特异度和敏感度[8]。临床近几年常用的方法有TCT、p16/Ki-67双染检测、HPV E6/E7 mRNA检测和HPV DNA检测等。p16和Ki-67在病理组织学中应用广泛。p16作为一种细胞周期调节蛋白,能够诱导细胞周期停滞,可作为持续性HPV感染的替代标记物。Ki-67是一种增殖指数。生理情况下,两者在同一宫颈细胞中不能共表达,p16/Ki-67双染检测可以用来筛查宫颈鳞状上皮内病变[9]。Yu 等[10]研究表明,p16/Ki-67双染与HPV基因和组织类型无关,进行p16/Ki-67双染有助于减少HPV阴性患者的漏诊。金红等[11]也证实p16/Ki-67双染检测对TCT阴性的高危型HPV感染子宫颈病变具有较高的敏感度和特异度,能够弥补细胞学检查敏感度不足的缺点,减少漏诊。HPV持续感染在宫颈癌发生发展的过程中起着重要的作用。研究[12]证实,HPV 早期编码区E6、E7基因是病毒癌基因,而E6/E7 mRNA是癌基因 E6 和E7 的转录产物,HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测相比,具有更好的特异度和阳性预测值,并且可以有效避免HPV一次性感染。

本研究结果显示在病理组织学确诊者的高级别鳞状上皮内病变中,很少有3项检查均阴的情况,提示3项检查有很好的互补性。联合检测具有较好的特异度及敏感度。作者认为对于HPV感染阴性或HPV危险度低的患者或者HPV感染危险度与细胞学筛查结果不符的患者,可以适当多选取几种筛查方法。

不同检测假阴性结果可能的原因有:①临床医师在标本采集时采集的细胞量过少或遭受杂质影响。②对于p16/Ki-67双染结果的判读有很强的个人主观性。③患者存在放疗或药物治疗时会出现假阳性的结果。④p16/Ki-67双染在细胞质稀少的细胞中或在p16染色背景较弱的样本中可能会出现假阴性的结果[13]。⑤由于某些特殊类型的宫颈癌的发生发展与HPV无相关性,所以p16/Ki-67双染及HPV E6/E7 mRNA很难检测到相关变化。

综上所述,TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测可有效提高宫颈鳞状上皮内病变的敏感度及特异度,对宫颈鳞状上皮内病变的筛查有较好的预测价值。