浅谈食品检测实验室的方法验证和方法确认

刘艳霞，梁文文，卢 仑，刘建洋

（山东标准检测技术有限公司，山东济南 250101）

食品检验检测机构的重点工作是保障实验室的正常运转，食品检测实验室的检验检测方法有标准方法和非标准方法（包含自制方法、改进方法等）[1]。食品检测实验室为了保证检验检测结果的准确可靠性[2]，通常会采用方法验证和方法确认两种评定方法。然而，由于部分食品检验检测机构管理水平差、技术能力低、检验检测知识不足，常采用单一的方法进行合格评定，甚至有少部分食品检验检测机构无法清楚地理解方法验证和方法确认的概念和区别，使得食品检验检测机构管理存在漏洞，检验检测结果存在不确定性。

为了提高食品检验检测机构实验室的数据准确性和可靠性，增强实验人员的技术能力，本文对方法验证和方法确认的定义、重要性、区别和参数进行阐述，供食品检验检测机构相关人员学习、理解。

1 方法验证和方法确认的定义及重要性

1.1 方法验证和方法确认的定义

方法验证是指实验室通过核查，能够提供客观、可靠、有效的证据，用以证明该实验室可以满足某一检测方法规定的所有条件[3]。目的是证明标准方法能够被实验室使用[4]。简单地说，方法验证是对标准方法在食品检测实验室的重现性、对特定方法的适应性的确认[5]，证明该实验室可以运用该方法。

方法确认是指实验室通过实验，能够提供客观的、足够的证据予以证明某一检测方法可以达到实验预期，目的是对自制的方法或者标准方法经过改进后的方法是否能够达到预期目的的证实过程。方法确认的完成，表明实验室有足够的技术能力重复已经确认的方法，并且能够达到一定的性能水平。

如果实验室要使用标准方法开展实验，则需要进行方法验证；如果实验室要使用非标准方法开展实验，则需要进行方法确认。实验室只有对将要使用的方法进行方法验证或者方法确认，并且符合《检验检测机构资质认定能力评价 检验检测机构通用要求》和《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》规定，才具有相应的实验能力。

1.2 方法验证和方法确认的重要性

1.2.1 方法验证和方法确认具有强制性

《检验检测机构资质认定能力评价 检验检测机构通用要求》规定，使用标准方法之前，实验室应该进行方法验证[6]；使用非标准方法（含自制方法、改进方法等）前，应进行方法确认[7]。实验室应该保证优先使用标准方法，并且保证使用的标准版本是有效的[8]。

1.2.2 方法验证和方法确认具有必要性

《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》规定，实验室使用标准方法之前，应该验证标准方法在该实验室现有的人员、仪器设备、试剂及环境状态等条件下是否能够获得符合规定条件的结果[3]。实验室应对非标准方法，如实验室自制方法、改进方法等制定确认程序[3]。

1.2.3 方法验证和方法确认对检测结果具有重要影响

实验室在使用某一方法进行实验时，如果没有经过方法验证或方法确认，可能导致数据发生偏离，甚至造成检测结果错误。所以，方法验证和方法确认不仅可以检测实验室的设施设备、人员、环境和方法的适用性，而且可以保证数据的可靠性和准确性。

2 方法验证和方法确认的区别

方法验证与方法确认有相似之处，即都需要提供客观、有效的证据以证明方法满足要求。又有不同之处，主要体现在以下几个方面。

2.1 方法验证和方法确认具有不同的目的

方法验证的目的是验证实验室是否有足够的能力按照标准方法开展实验[9]。方法确认的目的是证实实验室能否合理、合法地使用该非标准方法（包含自制方法、改进方法等）[10]。

2.2 方法验证和方法确认具有不同的使用对象

方法验证的对象是标准方法和经过确认的非标准方法。方法确认的对象非标准方法，包含修改的标准方法、实验室自制的方法和超出预定范围使用的标准方法[3]。

2.3 方法验证和方法确认具有不同的使用时机

方法验证的使用时机是实验室首次使用标准或者对标准方法有小幅改动，如更换不同厂家的试剂或同类仪器设备。方法确认的使用时机是实验室使用非标准方法之前或者使用标准方法但有较大改变，如仪器设备、使用试剂、环境条件等发生了改变。

3 方法验证和方法确认的参数

方法验证和方法确认的参数有检出限、定量限、正确度、测量不确定度、精密度、稳健度以及线性范围等，实验室应根据预期的用途，并且综合考虑成本、风险和技术可行性方面进行方法验证和方法确认。

3.1 检出限

检出限分为仪器检出限与方法检出限[11]。用仪器将特定分析物的信号从背景中识别出来，此时分析物最低的量为仪器检出限。用某一方法将该分析物的被测定信号从基质中识别出来，此时分析物最低的量为方法检出限。确定检出限的方法很多，较为常用的方法有目视评价法评估检出限、空白标准偏差法评估检出限、校准方程的适用范围评估检出限和信噪比法评估检出限。

（1）目视评价法评估检出限。在样品空白中加入事先已知量的某分析物，实验室能够在设定条件下准确检测出该分析物最低量的方法。

（2）空白标准偏差法评估检出限。实验室通过实验的方法，加入最低量的样品空白或分析大量的样品空白确定检出限。定量检测中检出限的一般表示方法见表1。

表1 定量检测中检出限的一般表示方法

（3）校准方程的适用范围评估检出限。如果实验室在检出限附近的样品数据无法取得时，可以利用校准方程的参数这一特性，评估仪器的检出限。

（4）信噪比法评估检出限。对于定量而言，使用已知某分析物含量的样品的测量信号与空白样品的测量信号进行比较，确定实验室可以检出的该分析物的最低量。常用的信噪比为3 ∶1 或2 ∶1[3]。对于定性而言，可以在空白样品中依次分别加入已知量的不同浓度的标准溶液，绘制样品的检出率对添加浓度的曲线。

3.2 定量限

定量限通常分为仪器定量限与方法定量限。仪器能够准确检出并且被精准定量的分析物的最低浓度或最低量称为仪器检出限。特定基质中、一定可信度内，某方法能够准确检出并且被定量的分析物的最低浓度或最低量称为方法检出限。一般将空白值加上10 倍的重复性标准偏差或3 倍的检出限或者高于方法确认中使用最低加标量的50%作为定量限。

3.3 正确度

正确度是指实验室通过无穷多次重复性实验，参考值和实验结果的平均值之间的接近程度，常用偏倚表示，而偏倚又可以通过回收试验计算回收率进行评估，并且回收率的偏差要在规定的范围内。

3.4 精密度

某条件下，对同一被测样品或相似被测样品多次重复测量所得数据或测得的数据之间的一致程度即为精密度，通常用标准方法、方差或者概率分布函数表示。精密度一般分为重复性精密度与再现性精密度[12]，重复性精密度体现的是测量结果的短期偏离程度，也常用于评估某一批次实验中多次重复实验可能存在的差异；再现性精密度体现的是测量结果的长期复现性，即便是在不同的实验室，不同的实验人员使用不同的实验仪器，使用同一实验方法对同一样品进行实验时，实验结果具有复现性。

3.5 稳健度

稳健度是指实验室某一条件发生变化时，对分析方法产生的影响程度，可以由实验室预先设计好某些微小的、可能的变化因素，并且逐一引入、逐一分析其影响而得出。实验室应根据自身实验室情况对可能影响实验结果的因素进行实验，这些因素包含但不局限实验室温湿度、试剂来源、试剂和样品的保存方法、样品的提取等。实验室对其分析出的可能影响实验结果的因素作逐一改变，进行稳健度试验。如果发现某一因素对实验结果有显著影响，实验室应该再次实验，确定影响因素对测定结果影响的允许极限。

3.6 线性范围

用线性计算模型定义仪器响应与浓度的关系，该计算模型的应用范围称为线性范围。校准用的校准点应均匀地分布在关注的浓度范围内，并且能够覆盖该范围，浓度范围通常覆盖关注浓度的0%～150%。采用标准曲线法做定量实验时，应至少包括6 个校准点，并且线性回归方程的相关系数不低于0.99。

3.7 测量不确定度

影响不确定度的因素有很多，如标准物质、试剂的纯度、样品的体积和质量、样品的预处理、试剂的加入等。测量不确定度重要的是明确指出被测量与对测量不确定度有贡献的分量之间的关系、分量的分组和分解、评估测量不确定度的数学模型。通过测量不确定度进行方法验证和方法确认已经得到了广泛的认同。

4 结语

为了保证食品检测实验室检测数据的准确可靠性，实验室应及时开展方法验证和方法确认，这也是开展日常检测工作的基本要求和必要前提。食品检验检测机构应该把方法验证和方法确认归入质量管理体系，用文件进行规范，形成程序。通过方法验证，实验室能够证明有能力用标准方法进行实验；通过方法确认，实验室能够证明有能力用非标准方法进行实验。食品检测实验室应尽可能地完善方法验证和方法确认的程序和参数，确保实验室所提供数据的可靠性、有效性和公正性。