改良肌氨酸氧化酶法肌酐试剂抗高IgM干扰分析

顾 刚 欧维正 陶铜芳 董江义

（贵阳市公共卫生救治中心检验科，贵州 贵阳 550003）

血清肌酐（serum creatinine，SCr）是临床判断患者肾功能的重要参考指标，其检测方法的抗干扰性尤其重要。湿化学酶法具有特异性好、干扰小、线性范围宽等优点，适用于全自动生化分析仪，是目前SCr检测的首选方法。近几年有学者指出，采用湿化学酶法检测华氏巨球蛋白血症患者SCr会受到血清中IgM干扰而出现假阳性，而碱性苦味酸法（Jaffe法）不会受到干扰[1-2]。近日，贵阳市公共卫生救治中心收治了1例华氏巨球蛋白血症患者，其血清IgM>47.9 g/L，尿素正常，SCr结果异常增高，查看肌酐反应曲线，检测受到严重干扰。厂商针对IgM干扰改良了肌氨酸氧化酶法肌酐检测试剂。本研究拟探讨改良肌氨酸氧化酶法肌酐试剂（简称改良肌酐试剂）抗IgM干扰的原理，并以不受IgM干扰的Jaffe法作为参照，对比改良肌酐试剂和原肌氨酸氧化酶法肌酐检测试剂（简称原肌酐试剂）SCr检测结果的差异。

1 材料和方法

1.1 样本来源

收集1例华氏巨球蛋白血症患者和88例普通门诊患者的血清样本。

1.2 仪器与试剂

AU5800全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特公司）。肌酐检测的反应过程：在0点开始向反应杯加入试剂R1，加入血清，搅拌混匀，在第10点（180 s）加入试剂R2搅拌混匀。反应过程从0点开始，仪器每隔18 s记录1次吸光度（A）值，记录到第27点时终止，连接所有记录点即为反应曲线。原肌酐试剂（编号H105，批号210111101）、改良肌酐试剂（编号H105T，批号210423101）和校准品均购自宁波美康公司，方法学均为肌氨酸氧化物酶法。Jaffe法试剂（货号100020170，批号200751）和校准品均购自北京中生北控公司。室内质控品（批号：26471、26472）购自美国伯乐公司。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量资料以x±s表示，2个组之间比较采用配对样本t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 原肌酐试剂、改良肌酐试剂和Jaffe法检测华氏巨球蛋白血症患者SCr水平比较

采用原肌酐试剂、改良肌酐试剂和Jaffe法检测华氏巨球蛋白血症患者SCr水平，结果分别为625.5、59.7、62.6 μmol/L。3种试剂的反应曲线见图1、图2。

图1 原肌酐试剂、改良肌酐试剂和Jaffe法反应曲线

图2 原肌酐试剂、改良肌酐试剂和Jaffe法主波长反应曲线汇总

2.2 原肌酐试剂和改良肌酐试剂检测88例患者SCr水平比较

采用原肌酐试剂和改良肌酐试剂同时检测88例患者样本，SCr分别为（79.5±37.4）、（79.6±37.3）μmol/L。2种试剂检测结果差异无统计学意义（t=0.175，P>0.05）。88例患者2种试剂SCr检测结果的散点图见图3。

图3 原肌酐试剂和改良肌酐试剂检测88例患者SCr的比较

3 讨论

反应曲线是生化反应发生过程的完整记录。检验工作人员通过观察反应曲线的变化可以判断检测过程中存在的异常情况，更快地查找原因，作出正确判断[3-4]。肌酐检测采用双波长，副波长的作用是消除噪音干扰、减少杂散光影响和样本本身光吸收干扰，结果以主波长与副波长A值的差来计算。肌酐肌氨酸氧化酶法采用双试剂，参与反应的主要是R2试剂。从原肌酐试剂反应曲线[图1（a）]可看出，在第10点加入R2试剂后，主波长和副波长反应曲线在短时间内迅速升高，且升高幅度很大，提示有某种物质生成，造成A值大幅变化。从图1（b）和图1（c）可以看出，改良肌酐试剂与Jaffe法反应曲线相对平滑，符合肌酐生化反应特征。图2 3种试剂主波长反应曲线更直观地显示出原肌酐试剂受到的干扰，以及改良肌酐试剂和Jaffe法试剂反应过程相似。

本研究结果显示，原肌酐试剂和改良肌酐试剂检测88例患者SCr水平差异无统计学意义（P>0.05），提示改良肌酐试剂不会对其他患者的SCr检测造成影响。由此可见，改良肌酐试剂中参与反应的成分与原肌酐试剂一致。分析华氏巨球蛋白血症患者肌酐水平异常升高的原因，在排除参与反应的试剂成分因素后，考虑可能是试剂的其他组分对IgM产生了影响，如缓冲液、防腐剂等均有可能使反应溶液的性质发生变化，导致蛋白的大分子发生沉淀反应，影响A值，造成干扰。我们把华氏巨球蛋白血症患者的血清分别用纯水和0.9%NaCl溶液稀释5倍，结果显示加入纯水的血清会变混浊，而加入0.9%NaCl溶液的血清则无变化。华氏巨球蛋白血症是以血液中出现大量单克隆巨球蛋白（IgM）为特征的B淋巴细胞恶性增生性疾病[5]，其IgM为五聚体，是相对分子质量最大的免疫球蛋白。当加入0.9%NaCl溶液稀释时，氯离子和钠离子围绕在IgM周围，使其不能聚集；而当用纯水稀释时，由于溶液中离子浓度降低，pH值和渗透压的改变导致大量IgM交联聚集，进而产生混浊。由此可以判断，在采用原肌酐试剂检测华氏巨球蛋白血症患者血清样本的过程中，加入R2试剂使反应溶液中的pH值、渗透压等因素发生了改变，导致大量IgM发生聚集，产生混浊，造成A值急剧升高，干扰了肌酐的检测。

综上所述，由于华氏巨球蛋白血症患者血清中存在大量IgM，且IgM具有相对分子质量大的特点，因此易受各种因素影响而发生交联聚集。改良肌酐试剂优化了试剂组分，使得反应溶液中IgM的性质稳定，未触发IgM产生聚集，从而得到真实的检测结果。在临床工作中，如遇到肌酐异常高值，且与临床不相符的情况，建议立即查看反应曲线，用合适的方法确定其真实值，以防止临床误诊。