八珍袋泡茶质量标准提升研究

韦开听，罗朝亮，蒋 莉，龙立活，邓秀芝，苏炼礽，吴芳芳，陈 路

（广西壮族自治区药用植物园 西南濒危药材资源开发国家工程实验室，广西 南宁 530023）

八珍袋泡茶原方出自明代医家薛己所著的《正体类要》，是由党参、炒白术、茯苓、甘草、当归、白芍、川芎、熟地黄八味中药材组成，都具有补气益血之功效[1]，适用于气血两虚，面色萎黄，四肢乏力等症状。其中当归补血活血，调经止痛，润肠通便；茯苓清利湿热，利胆退黄；甘草泻水逐饮，消肿散结；川芎活血行气，祛风止痛；白芍养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳，诸药合用具有补气益血之功效[1]，适用于气血两虚，面色萎黄，四肢乏力等症。茯苓、白芍、甘草中分别含茯苓多糖、芍药苷、甘草酸成分，均具有免疫调节作用[2-4]。当归、川芎为临床常用的养血活血药[5]，其有效成分藁本内酯对妇科疾病[6]、心血管系统[7]有较强药理活性，在治疗循环系统疾病过程中，能扩张血管、增加冠脉流量[8]。

1991年出版的《卫生部药品标准》收录八珍袋泡茶的质量标准，迄今逾三十多年仍在收录范围内，但其完善与提高的空间很大，目前有关八珍袋泡茶中的同时测定不同成分的含量和薄层色谱（TLC）定性鉴别相对较少，八珍袋泡茶方中药材多，单个药材成分的鉴定和含测较为复杂，本研究在现在有文献报道的基础上，结合《中国药典》2020版中当归、川芎、茯苓、甘草质量标准有关方法，采用TLC同时对当归和川芎，茯苓和甘草进行定性鉴，以高效液相法（HPLC）同时测定芍药苷和藁本内酯的含量，以期为质量标准提高提供实验数据，对保证其质量标准的完善和提高具有重要意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器

VARIAN 210型高效液相色谱仪（美国瓦里安公司）；MS 205 DU型十万分之一电子天平（瑞士Mettle-Toledo有限公司）；BSA124S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；SB-5200D型超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份公司，功率为200 W，频率为40 kHz）；UV-1240型紫外可见分光光度计（日本Shimadzu UV公司）；ZF-8型暗箱式四用紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）。

1.2 试药

当归对照药材（批号：120927-201617），川芎对照药材（批号：120918-201813），茯苓对照药材（批号：121117-201910），甘草对照药材（批号：120904-202021），芍药苷对照品（批号：110736-202044，含量以96.8 %计）均购自中国食品药品检定研究院；藁本内酯对照品（上海麦克林生化科技有限公司，批号：Z812557，含量≥99 %）；乙腈、磷酸为色谱级试剂，水为超纯水，其余试剂均为分析纯试剂；八珍袋泡茶共3批（广西药用植物园制药厂生产，批号分别为：210101，210102，210401，规格：2.4 g/袋）。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 当归、川芎的鉴别 取本品2袋，加入30 ml石油醚，超声处理30 min，取出，滤过，滤液挥干，残渣加1 ml环己烷使溶解，作为供试品溶液；取当归、川芎对照药材粉各1 g，分别同法制成对照药材溶液；按八珍袋泡茶处方取缺当归、川芎的其余药材按工艺制成缺当归、川芎阴性样品，同法制成阴性对照溶液。按2020年版《中国药典》（四部）通则0502 薄层色谱法[9]，吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板，以环己烷-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，饱和30 min，展开，取出，晾干后置于365 nm紫外光下检视。结果显示，在与对照药材色谱相应的位置上供试品色谱显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰，见图1A。

2.1.2 茯苓、甘草的鉴别 按2.1.1项下方法制备供试品溶液；取茯苓、甘草对照药材粉各1 g，加入30 ml石油醚，超声处理30 min，取出，滤过，滤液挥干，残渣加1 ml环己烷使溶解，分别制成对照药材溶液；按八珍袋泡茶处方取缺茯苓、甘草的其余药材按工艺制成缺茯苓、甘草阴性样品，同法制成阴性对照溶液。按2020年版《中国药典》（四部）通则0502 薄层色谱法[9]，吸取上述4种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板，以环己烷-氯仿-丙酮（10:2:0.7）为展开剂，饱和30 min，展开，取出，晾干后喷10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，放置10 min，紫外光（365 nm）下检视。结果显示，在与对照药材色谱相应的位置上供试品色谱显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰，见图1B。

图1 TLC色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1 %磷酸水溶液（B），梯度洗脱（程序见表1）。检测波长：0～15 min：230 nm（检测芍药苷），15～30 min：280 nm（检测藁本内酯）；流速：1.0 ml/min；柱温：30 °C；进样量：10 μl；理论塔板数以芍药苷峰、藁本内酯峰计算，都不低于4000。

表1 梯度洗脱程序

2.2.2 对照品溶液制备 精密称取芍药苷对照品、藁本内酯对照品适量，加70 %乙醇制成芍药苷浓度为0.1588 mg/ml、藁本内酯浓度为0.1400 mg/ml的混合对照品储备液，精密量取上液5 ml，置10 ml棕色量瓶中，即得混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 精密称取八珍袋泡茶样品1 g，置50 ml具塞瓶中，精密加入70 %乙醇25 ml，称重并浸泡1 h，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足减失重量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性样品溶液制备 按八珍袋泡茶处方比例，取缺白芍、当归、川芎的其余药材，按工艺制成缺白芍、当归、川芎阴性样品，并按2.2.3项下方法制备阴性样品溶液，即得。

2.2.5 专属性试验 分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，按2.2.1项下色谱条件注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2。结果显示，供试品中芍药苷、藁本内酯与混合对照品在相同的保留时间处有相应的色谱峰，峰形良好，与其他色谱峰分离度大于1.5，且阴性对照无干扰，表明方法具有良好的专属性。

图2 高效液相色谱图（0～15 min：230 nm；15～30 min：280 nm）

2.2.6 线性关系考察 分别精密量取2.2.2项下混合对照品溶液储备液1，2，3，4，5，6，7，8 ml，分别置于10 ml量瓶中，加入70 %乙醇定容到刻度，摇匀。按2.2.1项下色谱条件测定，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X，μg）为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，得芍药苷、藁本内酯回归方程分别为：Y=33.7046X+35.8124，r=0.9998；Y=6.5671X+4.8128，r=0.9996。结果表明，芍药苷、藁本内酯浓度分别在15.9～127.1 μg/ml、14.0～112.0 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 取混合对照品溶液适量，按2.2.1项下色谱条件连续重复进样测定6次，记录峰面积并计算RSD值，考察芍药苷、藁本内酯混合对照品峰面积的变化情况。结果表明，芍药苷、藁本内酯峰面积RSD分别为0.71 %，0.82 %，表明该仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 精密称取八珍袋泡茶（批号：210101）样品1 g，按2.2.3项下方法制备样品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，分别在0，1，2，4，8，12，24 h进样测定，记录峰面积并计算RSD值，考察八珍袋泡茶供试品溶液室温下放置不同时间峰面积变化情况。结果表明，供试品溶液中芍药苷、藁本内酯峰面积RSD分别为1.18 %，1.55 %，表明该供试品溶液在24 h内相对稳定。

2.2.9 重复性试验 精密称取八珍袋泡茶（批号：210101）样品1 g，共6份，按2.2.3项下方法制备样品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录6份芍药苷、藁本内酯的峰面积以计算含量。结果表明，芍药苷、藁本内酯平均含量分别为1.9076，1.1873 mg/g，RSD分别为0.94 %，1.09 %。说明方法重复性良好。

2.2.10 加样回收试验 精密称取芍药苷对照品0.0130 g、藁本内酯对照品0.0078 g，置25 ml量瓶中，加70 %乙醇溶解并稀释至刻度，配成含芍药苷0.5034 mg/ml、藁本内酯0.3120 mg/ml的混合对照品溶液；精密称取八珍袋泡茶（芍药苷含量为1.9076 mg/g，藁本内酯含量为1.1873 mg/g）样品0.5 g，共9份，依次精密加入混合对照品溶液（芍药苷浓度 0.5034 mg/ml，藁本内酯浓度0.3120 mg/ml）1，2，3 ml，各3份，按2.2.3项下方法制备样品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果芍药苷、藁本内酯平均回收率分别为98.64 %，98.34 %，其RSD分别为1.36 %，1.64 %，结果见表2。

表2 加样回收试验（n=9）

2.2.11 样品含量测定 精密称取八珍袋泡茶3批不同批号的样品，每批各1 g，按2.2.3项下方法制备样品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录芍药苷、藁本内酯峰面积并计算含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

八珍袋泡茶方中药材种类较多，为了更有效地控制其质量，本研究对处方中的药材开展薄层鉴别，采用HPLC对有效成分进行定量测定。根据《中国药典》2020年版一部药材项下的相关方法并结合近年发表的研究成果[10-12]，采用薄层色谱法分别同时对当归和川芎进行鉴别，对茯苓和甘草进行鉴别，相较于现有的单个药材鉴别方法，该方法更加高效且可行。藁本内酯是当归、川芎的主要活性成分之一[13-14]，在以HPLC测定芍药苷含量的基础上，通过不断考察不同流动相梯度洗脱方法[15-17]，最终以乙腈-0.1 %磷酸为梯度洗脱流动相，建立了同时测定藁本内酯和芍药苷含量的测定方法。

八珍袋泡茶疗效明显，临床应用广泛，但其质量标准不够完善，现有的标准仅对单个药材进行定性和定量分析，不能很好地控制产品质量。本研究提升了八珍袋泡茶的质量标准，对现有较为复杂的研究方法进行了优化，节约了检测成本。此外，通过标准的提升，进一步保证了用药安全。研究结果表明，建立的检测方法简便可行，对批量生产的成品检测具有指导意义。