激光散射测定甲苯磺酸拉帕替尼粒度方法的建立和验证

刘亚方，张治云，郭新艳，王 静，王 帆，杨 琪

（山东省药学科学院 山东省皮肤与黏膜给药工程技术研究中心，山东 济南 250101）

甲苯磺酸拉帕替尼是由葛兰素史克公司开发的一种小分子的可逆性酪氨酸激酶抑制剂（TKI），于2007年在美国率先上市，用于联合用药：合用卡培他滨治疗过度表达2型人表皮受体（HER2）的晚期或转移性乳腺癌，合用来曲唑治疗过度表达HER2、激素受体阳性的转移性乳腺癌绝经期患者[1-3]。药物颗粒的大小及其粒度分布情况对药物的安全性、有效性和稳定性具有重要影响[3]。甲苯磺酸拉帕替尼在水中几乎不溶，其粒度直接影响到制剂的溶出速度，从而影响药物制剂的质量和疗效，因此粒度为其质量控制的重要指标之一。有效的粒度检测方法对于粒度控制分析尤为关键，故对其粒度进行方法筛选及验证。

目前，在国内尚未见有甲苯磺酸拉帕替尼原料药粒度测定方法的文献报道。根据中国药典2020年版四部通则0982粒度和粒度分布测定法[4]的规定，本文采用第三法光散射法，运用激光散射原理[5-6]，采用湿法测定甲苯磺酸拉帕替尼原料药的粒度，该方法重复性好，易于操作，数值真实性强。原料药粒度测定方法的建立，有助于在处方筛选前筛选出合理的原料药粒径，可在一定程度上简化处方筛选过程，进一步完善了原料药粒径的研究，为生产出批间差异小、质量稳定的产品增加了保障。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Malvern Mastersizer 2000型激光粒度分析仪，Hydro 2000MU型湿法进样器（英国Malvern公司）。

1.2 试药

甲苯磺酸拉帕替尼（自制，测定前过60目筛，批号：20190901，20191008，20191103；含量：99.87 %，99.83 %，99.80 %）；十二烷基硫酸钠（SDS，分析纯，天津市大茂化学试剂厂，批号：20181201）；曲拉通X-100（化学纯，国药集团，批号：20180119）；六偏磷酸钠（化学纯，国药集团，批号：20180506）；水（纯化水）。

2 方法与结果

2.1 参数的选择及优化

甲苯磺酸拉帕替尼在水中几乎不溶，故首选湿法测定。以水为分散介质时样品不能很好地分散，故选择增加合适的分散剂将供试品制成稳定的混悬液后，加入含900 ml水的测量杯中进行测定。仪器参数初步设定为：样品折射率1.5；样品吸收率1；分散介质折射率1.33；遮光比8 %～20 %；超声50 s；循环速度2000 r/min；测量次数5。在此基础上，对各参数进行优化及确定。

2.1.1 分散剂的选择 粒径分布测定过程中分别尝试将六偏磷酸钠、SDS、曲拉通配制成一定浓度的溶液作为分散剂，经试验发现2 %六偏磷酸钠溶液作为分散剂时，甲苯磺酸拉帕替尼漂浮在上层，无法均匀分散；采用2 %曲拉通和2 % SDS作为分散剂时，两者均可将甲苯磺酸拉帕替尼分散，采用2 %曲拉通作为分散剂，样品在测定过程中发生团聚现象，遮光度显著下降，而采用2%SDS时，样品分散均匀，体系较稳定，故最终选择2%SDS作为分散剂。

2.1.2 分散剂的制备及用量考察 取SDS 2 g，加水100 ml，超声溶解，摇匀， 0.45 μm滤膜过滤。称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，共3份，分别加入2 % SDS 1，2，4 ml，充分搅拌后，加入含900 ml水的湿法进样器中，按2.1项下参数分别测定，不同用量分散剂的粒度分布测定结果见表1。

表1 不同用量分散剂的考察结果（n=5）

结果表明，当分散剂用量为1 ml时仍有部分颗粒团聚，导致测定结果偏大；当分散剂用量为2 ml时，分散效果较好，5 次测试RSD值最小；当分散剂用量为4 ml时，分散效果较好，但可能由于产生的气泡较多，遮光度不稳定，5 次测试RSD变大，导致测量误差增大。综合比较，选择分散剂用量为2 ml。

2.1.3 光学参数的考察 根据激光散射粒度分析仪的测定原理，在测定方法建立时，需设置3个光学参数，分别为分散介质折射率、样品吸收率和样品折射率[7]。分散介质采用2 % SDS水溶液，折射率为1.33；甲苯磺酸拉帕替尼为亮黄色结晶性粉末，吸收率设定为1，折射率为1.5。称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，共6份，各加入2 % SDS 2 ml，充分搅拌后作为供试品溶液，加入含900 ml水的湿法进样器中，吸收率分别设定为0.01，0.1，1，或将折射率分别设定为1.45，1.5，1.55，其他参数不变，粒度测定结果见表2。

表2 光学参数考察结果（n=5）

结果表明，综合d(0.1)、d(0.5)、d(0.9)值的RSD及平均残差，当折射率为1.5，吸收率为1 时，d(0.1)、d(0.5)、d(0.9)值的RSD及平均残差最小，故折射率选定为1.5，吸收率选定为1。

2.1.4 超声参数的考察 称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，共3份，各加入2% SDS 2 ml，充分搅拌后加入含900 ml水的湿法进样器中，以超声频率2000 Hz分别超声45，50，55 s后进行测定，其他参数不变，每份样品连续测定5次，测定数据见表3。

表3 超声参数的考察结果（n=5）

结果显示，超声时间在45～55 s内样品粒度测定的结果及RSD无明显差异，本文选择超声时间50 s。

2.1.5 搅拌器循环速度的考察 称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，共3份，各加入2% SDS 2 ml，充分搅拌后加入含900 ml水的湿法进样器中，分别以循环速度1800，2000，2200 r/min平衡3 min，其他参数不变，分别进行测定，每份样品连续测定5次，测定数据见表4。

表4 不同循环速度的考察结果（n=5）

结果显示，不同循环速度测定的结果及RSD基本一致，为保证搅拌速度以使物质不产生沉降，同时又避免搅动过大产生气泡干扰测定结果，选择2000 r/min的循环速度。

2.2 测定方法的确定

称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，加分散剂（2% SDS） 2 ml，充分搅拌后作为供试品溶液，加入含900 ml水的湿法进样器中，设定样品折射率为1.5，样品吸收率为1，分散介质折射率为1.33，以循环速度2000 r/min平衡3 min，以超声频率2000 Hz超声50 s后进行测定，要求遮光比8 %～20 %，连续测定5次。粒度分布见图1。

图1 甲苯磺酸拉帕替尼原料药的粒度分布

2.3 方法学验证

2.3.1 重复性试验 称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，加分散剂（2% SDS）2 ml，充分搅拌后作为供试品溶液，平行操作6份，每份依法连续测定5次，记录粒度分布曲线和测定结果，计算其平均值及RSD，结果见表5。

表5 重复性试验结果

结果表明，6份样品粒度测定d(0.1)，d(0.5)和d(0.9)值的RSD均符合要求，说明该方法的重复性良好。

2.3.2 中间精密度试验 不同日期，不同分析人员参考2.3.1重复性试验项下方法对同批次样品进行测定，记录粒度分布曲线和测定结果，计算12份样品平均值及RSD，结果见表6。

表6 中间精密度试验结果

结果表明，12份样品d(0.1)，d(0.5)和d(0.9)测定结果的RSD均符合要求，说明该方法的中间精密度良好。

2.3.3 溶液稳定性试验 称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.3 g，加分散剂（2% SDS）2 ml，充分搅拌后作为供试品溶液，将供试品溶液于室温下放置，分别于0，15，30，45，60，120 min依法测定，记录粒度分布曲线和测定结果，计算其平均值及RSD。d(0.1)平均值为2.287 μm，RSD为2.89 %；d(0.5)平均值为13.568 μm，RSD为1.18 %；d(0.9)平均值为50.447 μm，RSD为1.36 %。结果表明，供试品溶液配制后，在室温下放置120 min内稳定性良好。

2.3.4 耐用性试验 称取甲苯磺酸拉帕替尼约0.24，0.3，0.36 g，分别加分散剂（2% SDS）2 ml，充分搅拌后作为供试品溶液，依法测定，记录粒度分布曲线和测定结果，计算其平均值及RSD，结果见表7。

表7 耐用性试验的考察结果（n=5）

结果表明，当样品称样量在0.24～0.36 g范围内，改变样品加入量，粒度分布结果基本一致，表明本方法具有良好的耐用性。

2.4 甲苯磺酸拉帕替尼粒度测定

取3批甲苯磺酸拉帕替尼原料药，依法测定，记录粒度分布曲线和测定结果，结果见表8。

表8 粒径测定结果

3 讨论

本研究经一系列试验，建立了湿法激光散射测定甲苯磺酸拉帕替尼原料药粒径的方法。

3.1 分散剂的筛选

方法的建立过程中，分散剂的种类和用量是关键。研究中筛选了六偏磷酸钠、SDS、曲拉通3种分散剂，发现SDS的分散效果最佳。用分散剂辅助样品分散的过程中，选择合适浓度的SDS能均匀分散样品颗粒，但应避免测定过程中产生气泡影响测定结果。

3.2 超声时间确定

水中易团聚漂浮的粒子，需通过超声辅助颗粒分散[8]。本品在粒度测定过程中发现，合适的超声时间可使聚集状态的粒子达到最佳分散状态，超声时间过长，粒子会重新发生团聚，所以最终确定超声时间为50 s。

经过对分散剂（SDS）的浓度、搅拌器的循环速度、超声时间、样品折射率及吸收率等参数的研究及方法学验证，最终建立此测定方法。该方法重复性好、精密度高、易于操作，可准确测定甲苯磺酸拉帕替尼原料药的粒度。