hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测对乳腺癌的临床诊断价值

张旭明，尹伟明，高 婧

深圳市宝安区石岩人民医院检验科，广东深圳 518000

乳腺癌属于临床上较为常见的一种女性特发性生殖系统恶性肿瘤，其发病率在女性所有恶性肿瘤中位居首位，且部分患者最终会发生远处转移，预后不良[1]。早期准确诊断乳腺癌对临床治疗方案的实施及改善患者预后具有极其重要的意义。病理检查是迄今为止乳腺癌唯一的诊断“金标准”，但该检查方式具有有创性，且对患者的耐受性具有较高要求，临床应用有一定的局限性[2]。人乳腺珠蛋白(hMAM)是近年来发现的分泌糖蛋白之一，具有特异性较高的特点，仅在乳腺上皮细胞及乳腺癌组织中表达，在其他肿瘤组织中几乎不表达，具有成为乳腺癌特异性生物标志物的潜力[3-4]。乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)也有高度特异性，仅表达于乳腺及唾液腺组织中，可通过调控上皮间质转化信号通路影响乳腺癌细胞的侵袭、转移[5]。癌胚抗原相关细胞黏附分子19(CEACAM19)属于癌胚抗原家族重要成员之一，在肿瘤细胞中异常高表达，可能参与了肿瘤的发生、发展过程[6]。鉴于此，本研究探讨了hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测对乳腺癌患者的临床诊断价值，以期为该病的诊断提供一种有效的手段，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择本院2019年1月至2021年1月收治的73例乳腺癌患者作为乳腺癌组，另选取同期70例乳腺良性病变患者作为良性病变组，同期70例健康志愿者作为健康对照组。乳腺癌组年龄24～78岁，平均(56.32±10.36)岁；体质量指数(BMI)为19～32 kg/m2，平均(23.58±1.35)kg/m2；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期42例；有淋巴结转移37例，无淋巴结转移36例。良性病变组年龄26～77岁，平均(56.41±10.45)岁；BMI为19～32 kg/m2，平均(23.67±1.40)kg/m2；疾病种类：乳腺纤维腺瘤39例，乳腺囊性增生21例，浆细胞性乳腺炎10例。健康对照组年龄25～79岁，平均(56.52±10.61)岁；BMI为19～32 kg/m2，平均(23.71±1.45)kg/m2。各组年龄、BMI比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：(1)乳腺癌患者均经病理检查确诊；(2)年龄>18周岁；(3)入组前并未接受任何抗肿瘤治疗；(4)临床病历资料完整。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)神志异常或伴有精神疾病；(3)因故无法配合完成本研究。所有研究对象对本研究均知情同意，并签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会批准。

1.2仪器与试剂 Loghtcycler PCR热循环仪(Roche公司)，Trizol试剂盒(Gibco BRL公司)，SYBR Premix EX TaqTM试剂盒(TaKaRa公司)。

1.3方法 采集所有研究对象静脉血4 mL，用EDTA抗凝处理，再用生理盐水稀释2倍，借助淋巴细胞分离液分离获取淋巴细胞，最后采用Trizol试剂提取细胞总RNA。采用荧光定量PCR检测hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平，具体操作严格按照SYBR Premix EX TaqTM试剂盒说明书进行。反应体系：2 μL的cDNA模板，上下游引物各0.4 μL，SYBR Premix EX Taq染料10 μL，加水补全总体系至20 μL。于Loghtcycler PCR热循环仪上实施扩增及分析，反应条件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，94 ℃ 15 min，66 ℃ 60 s，共40个循环。hMAM上游引物：5′-CCGACAGCAGCAGCCTCAC-3′，下游引物：5′-TCCGTAGTTGGTTTCTCAC-3′；SBEM上游引物：5′-CTGCCAGAATCCGACAACAG-3′，下游引物：5′-AGCAGTGGTCGCAGTGGTTGC-3′；CEACAM19上游引物：5′-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAGGAAGAAGC-3′，下游引物：5′-GGGCCACTGTGGGCATCATGATTGG-3′。上述引物设计及合成由上海英骏生物技术有限公司完成。hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA相对表达水平以2-ΔΔCt表示。

1.4观察指标 比较3组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平；分析乳腺癌患者临床分期及淋巴结转移情况与hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平的关系；评估hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平对乳腺癌的诊断价值。

2 结 果

2.13组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平比较 乳腺癌组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于良性病变组及健康对照组，且良性病变组上述指标表达水平均高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 3组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平比较

2.2不同临床分期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平比较 Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床分期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平比较

2.3有无淋巴结转移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平比较 有淋巴结转移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 有无淋巴结转移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平比较

2.4hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA单独及联合检测诊断乳腺癌的效能 ROC曲线分析显示，hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测诊断乳腺癌的灵敏度为89.52%，特异度为65.12%，曲线下面积(AUC)为0.874，高于各项指标单独检测(P<0.05)，见表4、图1。

表4 hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA单独及联合检测诊断乳腺癌的效能

图1 hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA单独及联合检测诊断乳腺癌的ROC曲线

3 讨 论

随着人们生活方式的日益转变及生活压力的不断增加，乳腺癌的发病率呈现逐年攀升趋势，严重威胁女性的身心健康[7-8]。目前，关于该病的具体病因及发病机制尚未彻底阐明，普遍认为可能和基因突变、遗传等因素有关[9-10]。由于乳腺癌发病早期具有极强的隐匿性，绝大部分患者首次就诊便已处于进展期，丧失了手术根治的最佳时机，放化疗及免疫治疗虽可有效杀灭肿瘤细胞，但患者亦有较高的转移风险，患者治疗后的复发率及病死率均较高[11-12]。目前，寻找一种可靠易行的乳腺癌诊断方法是临床亟待解决的问题。随着近年来相关研究的日益深入，越来越多的学者开始关注血清肿瘤标志物应用于乳腺癌诊断中的价值。相较于穿刺活检等侵入性检查，外周血标本检测具有操作简单、创伤小、患者依从性高及可重复操作等优势，在乳腺癌早期诊断中具有一定的应用前景[13-14]。

本研究发现，乳腺癌组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于良性病变组及健康对照组(P<0.05)，且良性病变组上述指标表达水平均高于健康对照组(P<0.05)，这提示乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19均存在异常高表达。究其原因，hMAM属于分泌差异性表达蛋白之一，其氨基酸序列和子宫珠蛋白超家族同源，具有乳腺组织特异性，在乳腺上皮细胞及乳腺癌组织中均存在异常表达[15-16]。SBEM是由90个氨基酸组成的一种唾液酸糖蛋白，其具有1条分泌肽链及3条8肽前后序列重复的疏水核心，也具有乳腺组织特异性，在乳腺癌组织中异常高表达[17-18]。国外研究指出，CEACAM19属于癌胚抗原家族重要亚群之一，其介导了细胞黏附、增殖及肿瘤抑制等过程[19-20]。本研究ROC曲线分析发现，hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测诊断乳腺癌的AUC高于各项指标单独检测，提示hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测诊断乳腺癌的效能较高。分析原因，可能是联合检测上述3项指标表达水平可为医生的诊断提供较为全面的依据，进一步提高诊断效能。另外，本研究发现，Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于Ⅰ～Ⅱ期，提示上述3项指标可能与乳腺癌的发展有关。分析原因，可能是随着临床分期的进展，乳腺癌细胞分化、增殖加剧，继而使得上述3项指标表达水平升高。本研究中，有淋巴结转移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于无淋巴结转移的患者，提示随着上述3项指标表达水平的升高，患者淋巴结转移风险增加，分析其原因：乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19异常表达，继而影响NF-κB、PI3K/Akt及Wnt/β-catenin等肿瘤经典信号通路，最终促进肿瘤细胞的淋巴结转移。然而，关于其具体作用机制有待进一步研究，这也是今后研究的重要方向。

综上所述，hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测用于诊断乳腺癌具有较理想的效果，且上述3项指标表达水平的检测有助于临床医生评估患者病情严重程度及淋巴结转移情况。