LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性研究

伍 玲，杨勇波

卵巢癌是一种发生率较高的妇科恶性肿瘤疾病，其中上皮性卵巢癌是常见类型，占卵巢癌的50%～70%，具有易扩散、远处脏器组织转移及预后差等生物学特性[1]。上皮性卵巢癌病人在疾病早期阶段缺乏典型的临床症状及体征，多数病人就诊时已有腹腔内肿瘤细胞种植现象，致死率较高[2]。近些年尽管针对上皮性卵巢癌的综合治疗措施得到明显的提高，但术后及化疗后的复发率仍较高，其中化疗药物耐药是重要的原因[3-4]。因此积极探讨上皮性卵巢癌的化疗耐药作用机制对于改善病人预后具有重要的意义。长链非编码RNA(long chain non-coding RNA,LncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的内源性单链RNA，在肿瘤疾病发生发展中发挥着重要的调控作用[5]。LncRNA癌易感性候选基因2(cancer susceptibility candidate 2,CASC2)首先在子宫内膜癌组织中被发现，目前在卵巢癌等较多恶性肿瘤组织中均有所表达[6-7]。此外国内研究[8]证实，CASC2与微小RNA(microRNA)-155-5p之间存在结合位点，经双荧光素酶报告实验证实两者存在靶向关系。因此本研究拟探究LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性。现作报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 87例卵巢癌组织标本均为重庆市开州区中医院及重庆市开州区人民医院2012年1月至2015年8月期间行外科手术切除治疗的病人，术后经组织病理学检查确诊为上皮性卵巢癌；平均年龄为(53.2±7.9)岁；肿瘤大小(2.7±1.2) cm；高、中分化42例，低分化45例；浆液性40例，黏液性47例；有腹腔转移33例，无腹腔转移54例；FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ60例；有淋巴结转移36例，无淋巴结转移51例；有腹水52例，无腹水35例。所有病人均行肿瘤细胞减灭术，术后均予以铂类药物为主的化疗药物联合治疗，根据病人术后化疗是否出现继发耐药分为化疗耐药组(n=32例)和化疗敏感组(n=55例)，继发耐药定义为经肿瘤组织减灭术和含铂类化疗药物治疗获得临床完全缓解状态，停药后半年内出现复发[9]。同时选择72例卵巢良性肿瘤病人的卵巢病灶组织作为对照组。本研究方案已通过医院伦理委员会批准。

1.2 方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测上皮性卵巢癌组及对照组LncRNA CASC2、miR-155-5p的相对表达量，首先根据Trizol试剂盒说明书步骤提取总RNA，然后根据反转录酶试剂盒说明书步骤将RNA反转录合成cDNA，最后根据Real Master Mix试剂盒说明书步骤，同时采用SYBR Green Ⅰ染料检测CASC2、miR-155-5p的表达水平，以U6为内参基因，CASC2上游引物序列：5′-TAC AGG ACA GTC AGT GGT GGT A-3′，下游引物序列：5′-ACA TCT AGC TTA GGA ATG TGG C-3′；miR-155-5p上游引物序列：5′-GGG GTT AAT GCT AAT CGT GA-3′，下游引物序列5′-CAG TGC GTG TCG TGG AGT-3′；U6上游引物序列：5′-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3′，下游引物序列：5′-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3′。PCR结果采用2-ΔΔct方法进行计算。

1.3 随访 所有病人术后化疗结束后均接受5年的随访，随访形式为电话询问、医院门诊复诊等，详细记录所有病人总体生存率及中位生存时间等指标。

1.4 统计学方法 采用t检验、χ2检验，采用Pearson法分析上皮性卵巢癌组织中LncRNA CASC2与miR-155-5p的相关性关系，采用Kaplan-Meier法分析两者与上皮性卵巢癌病人的5年生存情况的关系。

2 结果

2.1 2组病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平比较 上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2表达水平低于对照组，而miR-155-5p表达水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)(见表1)。

2.2 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与临床病理特征的相关性关系 根据LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平(以平均数为界值)分为高表达组与低表达组，上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与腹腔转移、FIGO分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05～P<0.01)，而与年龄、肿瘤大小、腹水及组织学类型无关(P>0.05)(见表2)。

表1 2组病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平比较

表2 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与临床病理特征的相关性分析

2.3 LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与化疗敏感性的关系 化疗敏感组miR-155-5p表达水平低于化疗耐药组，而LncRNA CASC2表达水平高于化疗耐药组，差异均有统计学意义(P<0.01)(见表3)。

2.4 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2与miR-155-5p的相关性关系 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2与miR-155-5p呈负相关关系(r=-0.637，P<0.05)。

2.5 LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人5年生存情况的关系 本研究中上皮性卵巢癌病人均获得随访，随访时间为5年，miR-155-5p高表达者5年内总生存率及中位生存时间均低于miR-155-5p低表达者(34.0% VS 73.5%，20.0个月VS 28.0个月，P<0.05)，而LncRNA CASC2高表达者5年内总生存率及中位生存时间均高于LncRNA CASC2低表达者(80.0% VS 22.8%，27.0个月VS 18.0个月，P<0.05)(见图1、2)。

3 讨论

肿瘤细胞减灭术是初次治疗上皮性卵巢癌病人的标准方法，随后再采用以铂类化疗药物为主的综合治疗方案，尽管此方案积极有效，但疾病复发率仍较高，且5年生存情况不佳[10]。因此迫切需要寻找预测上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的实验室指标。较多研究[11-12]证实，卵巢癌组织中miRNA表达水平呈升高或下降表现，进而起到癌基因或抑癌基因的类似作用，也有研究[13-14]发现LncRNA在卵巢癌细胞相关基因表达调控方面发挥作用，多数为LncRNA靶向调控处于下游部位的miRNA表达。

表3 LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与化疗敏感性的关系

miR-150-5p属于miRNA的重要成员，定位于染色体19q13.33。近年研究[15]证实，其可通过某些特定信号转导通路参与各种肿瘤疾病的发生发展过程。国内研究人员抑制鼻咽癌细胞miR-150-5p表达水平后，癌细胞侵袭周围正常组织的能力也显著性下降，抑制多发性骨髓瘤细胞miR-150-5p表达水平后，癌细胞凋亡率明显升高，增殖能力则显著性减弱[16-17]。国外研究[12]也发现，miR-150-5p在胃癌组织及胃癌细胞株中均呈高表达水平。LncRNA CASC2在较多肿瘤疾病中均发挥抑癌基因的生物学功能，但其作用机制存在较大的差异性，如宫颈癌组织中CASC2表达水平明显下降，可通过结合miR-21而上调PTEN的表达水平，同时还可明显增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性[7]。还有研究[18]发现，CASC2可通过失活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路，从而起到抑制胃癌细胞增殖、侵袭周围正常组织和血管形成的作用。本研究显示，上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2表达水平明显低于对照组，而miR-155-5p表达水平明显高于对照组，结果提示上皮性卵巢癌组织LncRNA CASC2低表达，miR-155-5p高表达，与上述研究相符。分析上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与临床病理特征的相关关系，发现上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与腹腔转移、FIGO分期、分化程度及淋巴结转移有关，提示LncRNA CASC2、miR-155-5p两者均在上皮性卵巢癌增殖、侵袭、转移等方面发挥着重要作用。分析上皮性卵巢癌组织中LncRNA CASC2与miR-155-5p的相关性则发现，两者表达水平呈负相关关系，提示LncRNA CASC2可能通过某些信号转导通过负性调控上皮性卵巢癌组织中的miR-155-5p表达水平，进而在上皮性卵巢癌发生发展过程中发挥作用。

此外，本研究还发现化疗敏感组miR-155-5p表达水平明显低于化疗耐药组，而LncRNA CASC2表达水平明显高于化疗耐药组，miR-155-5p高表达者5年内总生存率及中位生存时间均明显低于miR-155-5p低表达者，而LncRNA CASC2高表达者5年内总生存率及中位生存时间均明显高于LncRNA CASC2低表达者，提示LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后存在密切相关性，可作为有效的预测指标。本研究还存在一些不足之处，如两者通过何种信号传导通路调控上皮性卵巢癌的发生发展还需以后的细胞、动物实验研究予以证实。