血清AT-Ⅲ、G6PD检测对新生儿败血症早期诊断及预后评估的价值分析

陈明娟，冯 琳

新生儿败血症是一种感染性疾病，病情较为严重且凶险，主要是因为新生儿免疫系统未成熟，免疫功能较低，容易受到病原体的感染。新生儿败血症的主要病原体是葡萄球菌、革兰阴性菌等，病原体侵入新生儿血液后就会迅速生长，造成婴儿全身性炎症反应，是新生儿死亡及残疾的重要原因之一[1-3]。新生儿败血症发病率较高，1976-2016年间，每10万儿童中约有70例严重败血症患儿，病死率11%～19%[4]。现今医疗条件及生活环境得到了很大的提升，但新生儿败血症仍会对新生儿生命造成一定的危害，对新生儿败血症的早期诊断及预后评估仍是研究重点。凝血功能紊乱及纤溶系统紊乱与新生儿败血症密切相关，当感染因素侵入患儿体内后会引发机体产生大量炎症因子，对组织、器官造成损害的同时会激活机体凝血系统，引起大量凝血因子消耗、微血栓形成等，造成机体纤溶系统紊乱。抗凝血酶-Ⅲ(antithrombin-Ⅲ，AT-Ⅲ)是由肝脏合成的一类丝氨酸蛋白酶抑制剂，是体内平衡凝血过程、维持纤溶系统稳定的重要物质，与新生儿败血症密切相关[5]。6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)缺乏会导致新生儿患溶血性贫血，研究表明G6PD缺乏时，红细胞膜的非酶糖基化产物对于机体来说是异物，能够刺激机体产生大量抗体，引发巨噬细胞对红细胞的吞噬功能，造成大量红细胞被破坏，使机体发生溶血现象，造成患儿免疫功能低下，更易受到外界环境的感染，进而引发败血症[6]。本研究通过对新生儿败血症患儿血清中AT-Ⅲ、G6PD表达水平进行检测和分析，为新生儿败血症的早期诊断及预后评估提供依据。现作报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年1月至2020年1月在我院确诊的新生儿败血症患儿77例为败血症组，胎龄30～45周，平均胎龄(36.6±4.5)周；日龄5～19 d；男39例，女38例。其中血培养阳性确诊为败血症26例，为金黄色葡萄球菌5例，大肠埃希菌7例，表皮葡萄球菌3例，缓症链球菌1例，溶血葡萄球菌2例，鲍曼不动杆菌4例，肺炎克雷伯菌4例；血培养阴性51例，均符合新生儿败血症临床诊断标准。同时选取我院确诊的细菌感染非败血症患儿50例为感染组，胎龄30～46周，平均胎龄(36.9±6.1)周；日龄4～17 d；男27例，女23例；原发疾病为皮肤感染6例，肺炎15例，感染性腹泻9例，脐炎9例，尿路感染11例。同时选取本院健康新生儿100例为对照组，胎龄32～46周，平均胎龄(37.1±3.8)周；日龄6～20 d；男52例，女48例。3组研究对象胎龄、日龄、性别等一般资料均具有可比性。败血症组患儿均入院治疗及观察，以住院第1天开始，根据4个月内生存及死亡情况再分为生存组和病死组。

纳入标准：(1)新生儿败血症的诊断标准参考《新生儿败血症诊断及治疗专家共识》[7]；(2)感染组为肺炎、脐炎等所致的细菌感染；(3)各组新生儿临床资料完整。排除标准：(1)有肝脏疾病、恶性肿瘤、糖尿病及先天性疾病；(2)先天性畸形；(3)具有遗传性代谢类疾病。本研究经医院道德伦理委员会批准通过，所有样品采集均取得患儿家属知情同意并签字，符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

1.2 主要试剂与仪器 全自动生化分析仪，购自美国Bio-Rad公司；AT-Ⅲ及G6PD测定试剂盒，均购自于美国Invitrogen公司。

1.3 方法

1.3.1 血液样品预处理 败血症组在发生临床可疑败血症症状、体征时，感染组在入院4 h时，对照组空腹状态，采集所有受试者空腹静脉血3～5 mL，置于特定离心管中，枸缘酸钠抗凝，室温静置20 min，3 000 g 4 ℃离心10 min，收集血清装至特定离心管中，于-80 ℃冰箱保存备用，用于后续相应指标的测定。发色底物法检测血清AT-Ⅲ的表达水平，简易比色法检测血清中G6PD的表达水平。

1.3.2 临床指标测定 采用全自动生化分析仪测定被试者血清中降钙素原(procalcitonin，PCT)、白细胞计数(white blood cell，WBC)，并记录新生儿疾病危重评分(neonatal critical illness score，NCIS)。

1.4 统计学方法 采用t检验、χ2检验、方差分析和q检验，ROC法分析血清AT-Ⅲ、G6PD对新生儿败血症及患儿不良预后的诊断价值，新生儿败血症不良预后的影响因素采用logistic回归分析。

2 结果

2.1 3组新生儿血清AT-Ⅲ、G6PD水平的比较 与对照组相比，感染组、败血症组血清AT-Ⅲ、G6PD表达水平均显著降低，且败血症组血清AT-Ⅲ、G6PD表达水平低于感染组，差异均有统计学意义(P<0.01)(见表1)。

表1 3组受试者血清AT-Ⅲ、G6PD表达水平比较

2.2 血清AT-Ⅲ、G6PD表达水平对新生儿败血症的早期诊断价值 ROC曲线结果表明，血清AT-Ⅲ表达水平早期诊断新生儿败血症曲线下面积(AUC)为0.811(95%CI：0.748～0.874)，敏感度为75.0%，特异性为81.8%，截断值为51.35%；血清G6PD表达水平早期诊断新生儿败血症的AUC为0.847(95%CI：0.788～0.905)，敏感度为86.0%，特异性为79.2%，截断值为16.54 U/g Hb(见图1)。

2.3 新生儿败血症生存组与病死组间指标比较 败血症患儿中病死10例，生存67例，病死率12.98%，生存组与病死组性别、胎龄、日龄、出生体质量之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)；与生存组相比，病死组新生儿血清中PCT、WBC水平均升高(P<0.05)，NCIS评分、AT-Ⅲ及G6PD表达水平均降低，差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01)(见表2)。

2.4 logistic回归分析新生儿败血症病死的危险因素 将是否发生新生儿败血症病死作为因变量，以血清中PCT、WBC、AT-Ⅲ、G6PD表达水平作为自变量进行多因素logistic回归分析，结果显示AT-Ⅲ和G6PD表达水平降低是新生儿败血症病死的危险因素(P<0.05)，血清中PCT、WBC新生儿败血症患儿预后不良无相关性(P>0.05)(见表3)。

表2 生存组与病死组新生儿败血症患儿间指标比较

分组nWBC/(×109/L) NCIS评分/分AT-Ⅲ/%G6PD/(U/g Hb)生存组6712.57±3.8687.01±11.0546.29±9.3015.87±4.69病死组1024.63±5.9657.96±10.1239.97±8.468.73±2.02t—8.547.832.034.73P—<0.01<0.01<0.05<0.01

表3 新生儿败血症病死发生的logistic回归分析

2.5 血清AT-Ⅲ、G6PD对新生儿败血症病死的诊断价值 血清AT-Ⅲ水平诊断新生儿败血症病死AUC为0.791(95%CI:0.671～0.911)，敏感度为75.0%，特异性为78.3%，截断值为39.11%；血清G6PD表达水平诊断新生儿败血症病死的AUC为0.800(95%CI:0.678～0.922)，敏感度为81.3%，特异性为73.9%，截断值为13.37 U/g Hb(见图2)。

3 讨论

新生儿是一类特殊人群，其免疫器官未发育成熟，对外界病菌的抵抗能力较弱，易受到外界细菌、病毒等的感染，进而引起全身的炎症反应，甚至导致死亡。新生儿败血症是新生儿常见的危重病之一，常因早产、抗菌药物使用不当、新生儿脐带等处理不恰当引起。致病菌侵入新生儿血液后，常会导致新生儿全身感染，引发脑膜炎、感染性休克等，严重时可引起死亡。目前关于新生儿败血症的诊断多为血培养，用抗生素进行治疗，随着新生儿败血症的发病率、致残率及死亡率的升高，对其进行早期诊断及良好预后评估仍是研究的热点[8-10]。

新生儿败血症与患儿体内的凝血系统密切相关，易引发弥散性血管内凝血[11]，随着病原体引起患儿全身炎症反应的不断恶化，患儿体内的凝血系统发生紊乱，引起血管内微血栓的形成、纤溶系统紊乱、血管内凝血，进而损伤患儿的器官及组织，威胁患儿生命健康[12]。AT-Ⅲ在人体内起着重要的抗凝调节作用，对凝血系统的平衡起到重要的作用，可反映人体凝血纤溶系统的状态，苏畅等[12]研究发现真菌感染性败血症患儿的AT-Ⅲ低于健康新生儿，并认为与患儿的凝血纤溶系统紊乱密切相关。G6PD与人体溶血功能密切相关，G6PD缺乏时，会造成患儿红细胞大量坏死，引发急性溶血[13]，资料显示新生儿溶血症常并发败血症，患有溶血症的新生儿因其红细胞损坏而引起免疫功能的障碍，加上新生儿各器官尚未发育成熟，使新生儿更易受到细菌及病毒的感染，进而引起败血症[14]。本研究中新生儿感染组与败血症组血清AT-Ⅲ、G6PD表达水平均显著低于对照组，其中败血症组血清AT-Ⅲ、G6PD表达水平亦低于感染组，此结果与苏畅等[12]研究结果一致。WBC是新生儿败血症诊断标准中的非特异性检查指标之一，对于新生儿败血症的诊断及预后评估具有一定辅助价值[7]；当机体受到严重感染时，血液中PCT含量会迅速升高[15]，而NCIS评分对于评估新生儿败血症危重程度具有一定的帮助[16]。本研究中77例新生儿败血症患儿病死10例，预后不良率为12.98%，与生存组相比，病死组新生儿血清中PCT、WBC水平均显著升高，NCIS评分、血清中AT-Ⅲ及G6PD表达水平均显著降低，提示血清AT-Ⅲ及G6PD水平亦与新生儿败血症患儿的预后有关。ROC曲线及多因素logistic回归分析结果表明，AT-Ⅲ和G6PD表达水平是新生儿败血症病死的保护因素，诊断新生儿败血症预后不良的灵敏度及特异性较高，当新生儿患儿AT-Ⅲ表达<39.11%、血清G6PD表达<13.37 U/g Hb时，患儿发生不良预后的可能较大，需尽早采取措施预防不良事件的发生。