云南彝族感染性发热患者血液培养细菌菌谱及耐药性的研究

梅鲜艳

（楚雄医药高等专科学校 云南楚雄 675005）

近年来，现代医学的迅猛发展及广谱、超广谱抗生素的广泛使用，使细菌耐药性不断增强，细菌培养难度增加。自动化血液/体液培养仪广泛在临床中应用，为感染性疾病的快速、准确诊断提供了科学依据。抗菌药物的广泛应用导致细菌耐药性和耐药监测发生了很大变化，由于细菌耐药机制的多样变化，复杂化，体外药敏试验表现为敏感，临床治疗往往无效。因此研究云南省楚雄彝族自治州医院内临床分离病原菌的分布及药物敏感率，对指导临床用药减少耐药菌株产生具有重要价值。本文研究如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集云南省楚雄彝族自治州医院2019 年3 月1 日～2019 年9 月30 日和2020 年3 月1 日～2020年9 月30 日前后两个不同时期各病室送检的发热患者血样，前者作为对照组，后者作为观察组。对照组526 份血样，观察组408 份血样。分别对经血培养检出的病原菌进行了菌谱分布及耐药性分析，收集血培养细菌株阳性的细菌感染患者的相关病历资料，包括患者住院科室、性别、年龄、民族（彝族）、基础疾病、血培养阳性细菌株种类（同一患者多次分离到的相同的菌株不重复计入）及抗生素敏感性等资料。观察组和对照组均选择同一厂家的血培养瓶和培养分析系统及药敏卡。

1.2 方法

细菌培养、鉴定及药敏试验。

1.2.1 血培养瓶。一次性全封闭血培养瓶为BacT/Alert 系统专用瓶（法国生物梅里埃公司），分成人标准瓶，小儿培养瓶和中和抗生素瓶3 种。

1.2.2 培养分析系统。BacT/Alter 3D 120 型全自动血液培养仪（法国生物梅里埃公司）。细菌培养基（郑州安图绿生物有限公司）。

1.2.3 样本采集及处理。由专业人员严格按《全国临床检验操作规程》第5 版进行采集。一般情况下，应在患者发热高峰前1 小时或之后采集。原则上应在抗菌药物应用之前，对已用药而不能中止的患者，也应在下次用药之前经桡动脉、股静脉取血，局部严格消毒采集。成人8～10 毫升，儿童1～5 毫升，无菌注入血培养瓶中混匀（成人用标准瓶，小儿用小儿培养瓶），立即放入BacT/Alter 3D 120 型全自动血液培养仪内培养。

1.2.4 阳性培养瓶处理。血培养阳性结果十分重要，当系统报告为阳性瓶后立即结合患者近期样本的培养情况口头将阳性培养结果和革兰染色的形态及其他鉴定资料报告给患者的主治医生，如G+球菌可疑为葡萄球菌，这些结果对解释感染来源非常有利，报告的日期和时间以及接受报告人的姓名应记录在患者报告单上。另外，系统报告为阳性瓶时，及时转种血琼脂、巧克力琼脂和中国蓝平皿。将血琼脂、巧克力琼脂置5%～8%CO2环境培养，中国蓝琼脂置普通孵箱35℃培养，根据培养皿上菌落形态对阳性结果进行革兰染色，并上全自动微生物鉴定仪VitekII 对菌种进行判断后进行药敏实验。

1.2.5 阴性瓶处理。当系统指示有培养瓶已到预置的报告时间时（我院血培养时间设置为5 天），按常规步骤卸瓶，用无菌注射器或系统附带采样针取材转种血琼脂、中国蓝琼脂，必要时加巧克力琼脂，置35℃18～24 小时培养，若无细菌生长方可报告血液培养无菌生长。

1.2.6 细菌鉴定及药敏试验。使用法国梅里埃公司生产的VITEK2 全自动微生物分析仪和药敏分析仪进行分析，鉴定卡（ID—GNB，ID—GPC，ID—YST）及药敏卡鉴定药敏卡片为公司配套的，必要时使用K-B 法作为补充对照。按NCCLS2006 年版标准方法进行分析。

1.2.7 质控菌株。用标准菌株大肠埃希氏菌ATCC 25922，金黄色葡萄球菌ATCC 29213，铜绿假单胞菌ATCC 27853 进行鉴定和药敏试验。判断标准参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准。

1.3 数据统计分析

采用临床医学版v:4.09 软件系统进行数据统计分析，相对数用率、构成比表示以及采用SPSS16.0 软件进行数据处理，组间差异比较运用χ2检验，以P＜0.05 为组间差异，具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组细菌感染性发热患者血培养阳性细菌构成比

两时段送检的408 份和526 份血培养样本中各有80 和40 份细菌培养阳性，阳性检出率分别为19.6%和7.6%。血培养都是以G-菌感染居多，具体病原菌检出结果见表1。

表1 两组细菌血培养阳性率比较

2.2 病原菌耐药性的检测

2020 年3 月1 日～2020 年9 月30 日时间段分离出的主要病原菌大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感率和耐药率以及两时间段耐药率的比较分别见表2～表4。

表2 观察组大肠埃希菌对抗菌药物的敏感率和耐药率

表4 两组细菌耐药率比较

由表1 可见，2020 年3 月1 日～2020 年9 月30日和2019 年3 月1 日～2019 年9 月30 日两时段送检的408、526 份血培养样本中各有80、40 份培养阳性，阳性率分别为19.6%、7.6%。两时间段血培养都以G-性菌感染居多。观察组结果显示引起败血症的病原菌种类增多，由14 种增加到17 种，以G-菌为主，占68.75%，G+球菌次之，占22.50%。G-杆菌以肠杆菌科细菌最为多见，占62.50%。肠杆菌科细菌中大肠埃希菌检出率高，占38.75%；G+球菌以葡萄球菌属多见，占16.25%，葡萄球菌属中的金黄色葡萄球菌检出率也较高，占13.75%。由表1 数据显示观察组的总检出率（19.6%）和各种细菌检出率显著大于对照组的总检出率（7.6%）和各种细菌检出率，P＜0.05 有统计学意义。血培养阳性检出率明显增高。

由表2 可以看出，氨苄西林对大肠埃希菌的耐药情况非常严重，高达93.7%.其次对大肠埃希菌有较弱耐药性的为头孢唑肟，耐药率为20%左右。从表3 可以看出青霉素G 对金黄色葡萄球菌的耐药情况非常严重，高达96.1%，其次对金黄色葡萄球菌有较弱耐药性的为苯唑西林、氨苄西林/舒巴坦，亚胺培南，耐药率为20%左右。由表4 数据显示观察组的G+性菌，金黄色葡萄球菌，G-性菌，大肠埃希菌耐药率显著大于对照组，P＜0.05 有统计学意义。金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的耐药性越来越严重。

表3 观察组金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感率和耐药率

3 讨论

血培养检测病原菌是诊断感染性疾病的实用方法。特别是细菌性感染者，常常需要进行血培养检测为临床治疗提供参考依据。血液感染是非常严重的感染病，主要表现为败血症，尤其是耐药株的增加，使其诊断和治疗也很棘手。快速准确的病原菌鉴定和药敏结果是败血症明确诊断和治疗最有效的手段。

通过分析本次观察组血培养结果，从表2 可见，G-细菌对氨苄西林的耐药率最高，其次为头孢唑林。对亚胺培南、庆大霉素的耐药率较低＜1.0%，可作为临床经验用药的一线药物；对喹诺酮类（氧氟沙星）的耐药率为50.4%～55.2%；对氨基糖苷类（庆大霉素）的耐药率为0.95%。上述G-细菌多有多重耐药趋势。从表3 可见G+细菌对青霉素的耐药率最高，其次为克林霉素和红霉素。金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率＞90%，对万古霉素敏感，耐药率为零。因此，加强监测，分析阶段性细菌株种类及耐药情况，对医疗机构合理选用抗菌药物具有重要意义。