两种不同过滤方法对去白细胞混合浓缩血小板的影响分析

陈玉燕 陈惠民 连晓征

血小板由巨核细胞产生，其主要功能是参与人体的正常止血过程。当人体的器官或组织受损时，血小板首先分泌出具有收缩血管功能的物质，如：5-羟色胺、儿茶酚胺等，可加速血管收缩，第二是使血小板在损伤部位凝聚，从而产生血小板血栓，达到一定的止血效果。血小板可启动凝血机制，将纤维蛋白原转化为纤维蛋白，最后可形成纤维化的网络，加强血小板血栓。此外，血小板还能为毛细血管提供营养和支持，保持管壁的完整，血液中的血小板结构和功能被破坏会引起机体出血，主要表现为皮肤黏膜的出血，包括牙龈出血、鼻出血、皮肤出血点，严重者可出现颅内出血。骨髓造血功能衰竭性疾病引起的血小板数量严重减少，如再生障碍性贫血，并且有明显出血症状时，就需要输注血小板治疗。血液系统恶性肿瘤化疗后，血小板数量严重减少，如低于2万/mL，也需要输注血小板。弥散性血管内凝血时，由于血小板消耗性减少，如果血小板低于2万/mL，也需要输血小板治疗。长期以来，血小板在血液疾病和癌症患者中扮演着非常关键的角色。当前，可采用的机采血小板具有高纯度、低白细胞和低需供体，方便进行血小板配型等优势，每年的用量都在增长。血小板制品分单采血小板和浓缩血小板2种。其中，单采血小板因其浓度高、疗效好等优点在临床应用日趋广泛。近年来临床成分血的推广及全民医保政策的落实，血小板（platelet）的临床用量越来越大，但由于捐献单采血小板献血者含量必须符合标准，且单采血小板的采集时间长，不易被献血者接受，且受到相对有限的献血者献血频次与献血热情的影响，导致在单采血小板采集中存在较大困难，已越来越不能满足临床需求。同时随着血液分离技术的不断发展和过滤技术的不断完善，手工血小板因其显著的优势在临床上的应用越来越广泛。而单采血小板越来越无法满足临床需求[1-2]。手工制备的浓缩血小板作为单采血小板的补充，在临床应用上发挥了重要作用[3]，现阶段去除混合浓缩血小板中白细胞（white blood cell，WBC）的方法主要有白膜法分离血小板混合过滤法和血小板混合过滤法，这两种方法在去除WBC过程也会对血小板计数（platelet count，PLT）产生损耗，为探讨这两种方法对所制备的去白细胞混合浓缩血小板中WBC和PLT含量的影响，寻找一种比较合适的去白细胞方法，特对泉州市中心血站2021年6—12月用上面两种去白细胞方法制备的80袋去白细胞混合浓缩血小板中WBC和PLT含量计数分析，现如下。

1 材料与方法

1.1 材料

选择2021年6—12月泉州市中心血站符合文献[4]要求的献血者所献全血400 mL，只有血液采集流畅性及采集完成时间符合文献[5]要求，该袋血液采用白膜法手工分离制备成浓缩血小板[6]。每天对符合要求可生产成浓缩血小板的400 mL全血血袋按1、2、3等顺序编号，编号是奇数血液生产的浓缩血小板用白膜法分离血小板混合过滤法去除WBC，编号是偶数血液生产的浓缩血小板用血小板混合过滤法去除WBC。本研究通过了单位伦理委员会审查，并且获得患者知情同意。

1.2 方法

400 mL血液采集完成后立即放入电子生物冷链运输箱（上海向成生物科技有限公司XC-XXB35L）（22±2）℃保存不超过6 h，将（22±2）℃保存血液用Heraeus6000i离心机（美国ThermoFisher Scientific公司）离心15 min[1 160 g，（22±2℃）]，离心好的血液安放于Sepamatic-SL（Ⅲ）全自动全血成份血分离机（德国LMB公司）分离得到约90 mL白膜层与血浆混合液。依据文献参数[7]，将这些白膜层与血浆混合液放在离心杯内，于Heraeus6000i离心机内（22±2）℃静置2 h后再做下述操作。

1.2.1 白膜法分离血小板混合过滤法

将编号为偶数且ABO血型相同，传染病检测结果为阴性每6袋血液所制备的白膜层与血浆混合液轻轻混匀后于无菌接管机（902880/compodock），将这6袋白膜层与血浆混合液汇聚成1袋，再与混合浓缩血小板专用去白细胞滤器（南京双威生物医学科技有限公司）相联接进行过滤去除WBC后于Heraeus6000i离心机（22±2）℃离心10 min[215 g，（22±2℃）]制成1袋去白细胞混合浓缩血小板，共制备40袋。

1.2.2 血小板混合过滤法

编号为奇数的400 mL血液所制备的白膜层与血浆混合液轻轻混匀后于Heraeus6000i离心机（22±2）℃离心10 min（215 g，22±2℃）制成浓缩血小板约60 mL，将ABO血型相同，传染病检测结果为阴性每6袋浓缩血小板于无菌接管机（902880/compodock）汇聚成一袋，再与混合浓缩血小板专用去白细胞滤器（南京双威生物医学科技有限公司）相联接进行过滤去除WBC制备成1袋去白细胞混合浓缩血小板，共制40袋。

1.3 白细胞和血小板含量计数法

将制备好的去白细胞混合浓缩血小板放置在美国Helmer血小板振荡保存仪内保存24 h后从交叉血辫内留取样本约1 mL到试管中作待测样本，从待测样本吸取50 μL加入到另一试管中，再加入450 μL结晶紫染液（北京瑞尔达生物科技有限公司）染色10 min后在大容量Nageotte计数板上于显微镜上进行残留WBC计数，剩下样本用Sysmex-XT1800iV全自动血细胞计数仪测量血小板含量血小板计数。按文献[8]标准，当残留WBC计数小于5.0×106个/袋，即WBC计数合格，PLT计数大于等于2.5×1011个/袋，即PLT计数合格。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板的WBC和PLT含量

两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板对WBC和PLT含量影响见表1。40袋白膜法分离血小板混合过滤法和40袋血小板混合过滤法去除WBC，其残余WBC平均值分别为（4.01±1.33）×105/袋和（1.63±0.91）×105/袋，前者WBC残余值是后者的2倍多，且差异有统计学意义（t=9.34，P＜0.05）。两种过滤去WBC方法的PLT含量平均值分别为（3.47±1.49）×1011/袋和（2.94±1.03）×1011/袋，白膜法分离血小板混合过滤法PLT含量较高，但差异无统计学意义（t=1.85，P＞ 0.05）。

表1 两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板的WBC和PLT含量（个/袋，）

表1 两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板的WBC和PLT含量（个/袋，）

过滤方法 袋 WBC含量 PLT含量白膜法分离血小板混合过滤法 40 （4.01±1.33）×105 （3.47±1.49）×1011血小板混合过滤法 40 （1.63±0.91）×105 （2.94±1.03）×1011 t值 - 9.34 1.85 P值 - ＜ 0.01 0.07

2.2 两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板对WBC和PLT计数合格情况

两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板对WBC和PLT计数合格情况影响见表2。白膜法分离血小板混合过滤法去白细胞后WBC残余合格率分别为80.0%，而血小板混合过滤法去白细胞后WBC残余合格率97.5%，合格率明显较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。两种去白细胞方法的PLT含量合格率分别为85.0%和75.0%，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 两种不同去白细胞过滤方法制备混合浓缩血小板对WBC和PLT计数合格情况比较[袋（%）]

3 讨论

随着输血技术的发展，成分输血的优势日益得到认可，一袋血液可以分离多种血液成分，并根据其不同血液成分的保存条件进行储存，不仅可以最大限度地保存每个血液成分的有效性，满足患者各种需求，还可以节约血液资源，同时在保存悬浮红细胞的过程中，它还能减少白细胞—血小板微聚物的形成，降低受血者发生血管栓塞的风险，并减少非溶血性输血反应的发生。其中血小板输注是治疗多种原因引起的血小板减少症（综合征）、提高患者血小板数量的有效手段和措施，使得临床的血小板消耗量日益增加，供不应求。目前国内血站供应临床的血小板制剂包括有机采血小板和手工血小板，前者从单个无偿献血者采集（制备），其来源相对困难；后者1个治疗量从多名献血者捐献的全血中分离出来，以制备多个小袋，可供多位临床患者（尤其是婴幼患儿）使用[9]，可有效地节省宝贵的血液资源。在美欧和其他发达国家，手工血小板的临床应用始终占血小板用量的一半以上。相反，一方面在中国临床，机采血小板用量占据绝对主导地位，但却越来越难以满足逐年增长的需求，另一方面手工血小板的临床用量（比例）仍在继续被人为压低，使得血站从献血者全血分离血小板的浪费（丢弃）日益增加。实际上，尽管普遍认为机采血小板质量优于手工血小板，特别是具有高纯（浓）度、单一供体的优点，但固有的缺点也不可忽视：由于与一次性塑料血小板分离管道剪切循环，机采血小板体外活化度高于手工血小板，并且在输入患者体内后，它不能更好地发挥功能[10]。

目前，我国几乎所有临床用成分血都存在供应短缺的问题，其中尤以血小板的缺口最大——因储存期短、储存条件较苛刻，以及“互助献血”的叫停等造成。各地用血医院如果能够充分利用血站从无偿献血者全血中分离制备的手工血小板，不但可以节约和充分利用宝贵的血液资源（到目前为止，作为从全血中提取红细胞的“副产品”，手工血小板不能用于临床便多半都被丢弃），更重要的是缓解目前临床血小板的供需矛盾，治疗更多的患者。

临床上很多疾病要输注血小板，血小板制剂中含有大量WBC，并且证实大部分属于淋巴细胞，因此如果反复输注非去白细胞血小板，较易产生人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体，有30%～70%的患者会发生同种免疫反应，导致血小板输注后治疗效果极差[11]。单采血小板的采集时间长，采集过程要输入一定剂量的抗凝药物和生理盐水，且采集后献血者的活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）时间变长，血液中Ⅷ因子及血纤维蛋白（Fibrin，FIb）含量下降等因素，影响单采血小板的采集[12]。

依据原国家卫生计生委（中华人民共和国卫生健康委员会官网）文件关于提高手工分离血小板利用率的要求[13]。手工分离浓缩血小板成为临床供应重要力量。但白膜法手工制备的浓缩血小板含有大量WBC，且一袋浓缩血小板的血小板数量无法满足临床治疗需要，因此需要将多袋浓缩血小板混合制备成混合浓缩血小板并尽可能去除WBC来满足临床之需。混合浓缩血小板在去WBC过滤时除了去除WBC外还会对PLT造成损耗，如何在这两个指标寻找平衡？本研究中40袋白膜法分离血小板混合过滤法和40袋血小板混合过滤法去除WBC，其残余WBC 平均值分别为（4.01±1.33）×105/袋和（1.63±0.91）×105/袋，前者WBC残余值是后者的2倍多，且差异有统计学意义（t=9.34，P＜0.05），说明白膜法分离血小板混合过滤法WBC残余量较多。两种过滤去WBC方法的PLT含量平均值分别为（3.47±1.49）×1011/袋和（2.94±1.03）×1011/袋，白膜法分离血小板混合过滤法PLT含理较高，但差异无统计学意义（t=1.85，P＞0.05）。根据文献要求[11]，去白细胞混合浓缩血小板的WBC和PLT计数需符合文献要求才算合格，两种过滤方法去白细胞后WBC合格率分别为80.0%和97.5%，血小板混合过滤法WBC合格率97.5%，合格率明显较高，差异有统计学意义（P＜0.05），两种去白细胞方法的PLT含量合格率分别为85.0%和75.0%，虽然白膜法分离血小板混合过滤法的合格率为85.0%，比较高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

综上所述，白膜法分离血小板混合过滤法和血小板混合过滤法去除混合浓缩血小板中WBC，血小板混合过滤法去除WBC效果较好且差异有统计学意义（P＜0.05），虽然在去除WBC中也损失一定量PLT，但比较好地平衡在去除白细胞和保留血小板更适用于临床用血[3，14]，因此建议采用血小板混合过滤法去除混合浓缩血小板WBC。