改良Neubauer计数板在胸腹水细胞计数中的应用效果研究

王大鹏 陈艳青 谢明珠

胸腹水细胞计数是临床区分胸水性质的手段之一，利于鉴别渗出液和漏出液，同时对多发性浆膜炎、结核性积液、化脓性感染、病毒感染等诊断有着重要的意义[1]。改良Neubauer计数板（手工法）和希森美康XN血球仪体液模式（仪器法）是目前临床较为常用的细胞计数方法，改良Neubauer计数板通过显微镜对细胞进行计数，而无需其他辅助设备，但其操作较为繁琐，重复性低，检测效率不高[2]；伴随自动化检测技术发展，血球仪被广泛用于临床检测中，具有高效、便捷、重复性好的优点[3]。相关研究表明血球仪除了能够对血液标本细胞分类计数进行检测外，还可对体检标本进行检测，为胸腹水细胞计数奠定了基础[4]，但其并未进行临床论证和推广，诸多因素可能会对其准确性产生影响。但目前很少有研究探究希森美康XN血球仪体液模式和改良Neubauer计数板何种更有利于检测胸腹水细胞计数，值得深入研究。因此本研究主要是对比希森美康XN血球仪体液模式和改良Neubauer计数板在胸腹水细胞计数中的应用效果，旨在为胸腹水细胞的临床检测提供更为科学的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2020年5月—2021年11月汕头市澄海区人民医院60份胸腹水标本，分别进行手工和仪器计数，手工组采用改良Neubauer计数板进行胸腹水细胞计数细胞计数，仪器组采用希森美康XN血球仪体液模式进行胸腹水细胞计数。本研究已通过伦理审查，并获得患者知情同意。

1.2 方法

手工组采用改良Neubauer计数板：由两名职称在中级以上的检验师于显微镜下通过改良Neubauer计数板对有核细胞和红细胞进行计数，最终结果为两者镜检结果均值，参照《全国临床检验操作规程》[5]进行细胞计数。

仪器组采用希森美康XN-10（B3）血球仪体液模式：首先对希森美康XN-10（B3）全自动血球仪进行校准，同时对室内进行质量控制，于质控在控的情况下对标本进行检测，根据希森美康XN-10（B3）全自动血球仪中文操作手册对新鲜标本进行操作，于2 h内完成检测，且每份标本进行两次检测，最终结果为两次的平均值。

仪器与试剂：双目显微镜（L1100A）；改良Neubauer计数板；希森美康XN-10（B3）全自动血球仪及配套试剂、质控品和标准品（日本SYSMEX）。

1.3 观察指标

（1）比较两组胸腹水细胞计数。（2）比较两组细胞计数批内精密度：随机选取两份高（白细胞＞1×109/L）、低值（白细胞＜1×109/L）细胞计数胸腹水标本，分别采用手工法和仪器法对每份标本进行连续10次计数，继而对变异系数（coefficient of variation，CV）进行计算[CV=标准差/平均数（s/x）]，CV≤30%则精密度在允许范围内，同时重复性良好。（3）观察仪器组仪器的携带污染率：通过仪器法对高值样本进行连续3次检测（分别记为i1、i2、i3），之后对低值样本进行连续3次测定（分别记为j1、j2、j3），之后计算携带污染率=[（j1-j3）/（i3-j3）]×100%。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组胸腹水细胞计数的比较

仪器组经全自动血细胞分析仪检验，其细胞总数、单个核细胞的计数统计结果均稍高于手工组，但两组结果对比差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。仪器组红细胞、白细胞、多个核细胞的计数结果显著高于手工组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组胸腹水细胞计数的比较（×106/L， ）

表1 两组胸腹水细胞计数的比较（×106/L， ）

组别 份数 细胞总数 红细胞 白细胞 单个核细胞 多个核细胞手工组 60 12.143±0.690 8.966±0.503 0.863±0.235 0.348±0.027 0.520±0.066仪器组 60 13.286±1.113 11.843±0.577 1.408±0.322 0.435±0.122 0.974±0.076 t值 - 6.76 29.11 10.59 5.39 34.94 P值 - ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.2 两组细胞计数批内精密度的比较

在白细胞＞1×109/L的高值细胞计数样本中，两组批内精密度均在允许范围内，且仪器组变异程度小于优于手工组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在白细胞＜1×109/L的低值细胞计数胸腹水标本中，两组批内精密度均在允许范围内，且仪器组变异程度小于优于手工组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组细胞计数批内精密度的比较

表2 （续）

2.3 仪器组仪器的携带污染率

除多个核细胞外，仪器组仪器的携带污染率均较低，见表3。

表3 仪器组仪器的携带污染率

3 讨论

胸腹水细胞计数以及应用对疾病的诊断、疗效观察、病情预测等有着重要的参考价值和临床意义。手工检验方式在具体操作步骤和流程上相对较繁琐，检验工作效率相对较低，同时可能会因为人为因素造成检验结果出现误差，且操作者的操作水平和经验等也可能会影响检验结果的准确性和可靠性。改良Neubauer计数板是目前检查胸腹水细胞计数的“金标准”，但其耗费时间较长、影响因素较多，导致检查的结果准确性和重复性低，这是不利于患者疾病的诊断，甚至耽误患者的治疗[6-7]，因此寻找一种高效且快捷的检测方法至关重要。随着相关临床检验技术的不断发展和进步，近年来越来越多先进的检验仪器以及检验技术开始被引入到胸腹水白细胞计数等临床检验工作中，而全自动血细胞分析仪的应用率也在逐步提高，有研究证实通过全自动血细胞分析仪实施胸腹水细胞计数可提高检验效率和质量，应用效果好。希森美康XN血球仪体液模式检测原理为采用核酸荧光染色法和半导体流式细胞术于新溶血素作用下对细胞进行计数，能够有效实现体液标本标准化和自动化[8-9]，能够针对白细胞进行科学、快速计数以及分类，同时分析仪设有相应的体液标本检测通道，能够针对胸腹水实施专门、科学、有效检测，同时能够避免检验过程中的人为因素等的影响，可提高检测工作效率和准确性。但目前关于希森美康XN血球仪体液模式与改良Neubauer计数板在胸腹水细胞计数中应用效果的对比研究尚少。

呼延武等[10]研究结果表明，当标本为血性体液时，仪器法检测结果与显微镜计数法检测结果无明显差别，但希森美康XN-10（B3）血球仪体液模式对胸腔积液、腹水、脑脊液细胞计数的重复性高、可信度更高；在本研究中，选择60份胸腹水标本通过手工计数和一起计数进行分析比较，两组细胞总数、单个核细胞比较差异无统计学意义（P＞0.05），而仪器组红细胞、白细胞、多个核细胞明显较对照组高，差异有统计学意义（P＜0.05），与呼延武研究结果基本相符。另外本研究还发现，两组CV值均低于30%，其精密度均在允许范围内，而相较于手工组，仪器组批内精密度更高，差异有统计学意义（P＜0.05），综合上述研究结果表明在一定程度上，希森美康XN血球仪体液模式在胸腹水细胞计数中的应用效果较改良Neubauer计数板更佳。改良Neubauer计数板很容易受检验者影响，一旦检验者不熟悉细胞形态、操作规范性不够、经验不足等均可对结果准确性产生影响[11]。而希森美康XN血球仪体液模式则能够对有核红细胞进行自动识别，同时对白细胞计数进行修正，而巨型血小板、脂肪滴、有核红细胞等则不会对白细胞计数产生影响，由于细胞中核酸水平不同，可对侧向荧光进行检测，进而对细胞核酸水平、细胞内容物的复杂程度进行有效反映，最终对体液白细胞进行计数及分类，另外希森美康XN血球仪体液模式不受检验者操作影响[12-13]。

康晨等[14]研究结果显示，对患者行血常规检查给予静脉血采样并行希森美康血液分析仪检验可有效提高对患者检验准确率；在本研究中，除多个核细胞外，仪器组仪器的携带污染率均较低，其原因可能为本研究所选取的低值标本量远远少于高值标本量，使得高低值多个核细胞的计数相差了3倍之多，微量细胞残留使得多个核细胞升高，在检测中可于高低值标本检测间隙开展空白清洗进行避免。

希森美康XN血球仪具有精密度高、效率高、误差小、适于大批量检测等特点，适用于临床检测，但目前希森美康XN血球仪体液模式对白细胞的分类仅限于单个核与多个核，对于体液中的可疑肿瘤细胞，由于其巨大的胞核，即便是散光图的高荧光区域有提示，但也不能进行明确分类[16]。临床检验工作中若仅通过希森美康XN血球仪对结果进行检测，而对高荧光细胞的报警信息加以忽略，则很容易忽略分类不明的部分细胞，继而对胸腹水的病因诊断产生影响，故改良Neubauer计数板在胸腹水标本的检测中仍起到了重要的作用，在检验工作中可联合两种方法进行共同检测移位临床诊疗工作提供更准确的科学依据。

研究结果显示希森美康XN血球仪体液模式在胸腹水细胞计数中的应用效果明显优于改良Neubauer计数板，希森美康XN血球仪体液模式不仅有利于检测红细胞计数，而且批内精密度更高，仪器携带污染率低，值得临床参考，为精确计数胸腹水细胞以及后期为患者的治疗提供更准确的治疗标准，提供了可借鉴内容。