某规模化猪场外环境中非洲猪瘟监测及防控建议

郭 锐，周丹娜，刘泽文，杨克礼，高 婷，袁芳艳，刘 威，李 畅，夏三林，邱振乾，田永祥*

1.农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/ 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，武汉 430064；2.畜禽病原微生物学湖北省重点实验室，武汉 430064；3.宜城市农业技术推广中心，湖北宜城 441400

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）可引起不同年龄、不同品种的猪只出现烈性、高度出血性症状，病死率极高，最高可达100%，被我国列为一类动物疫病，也是世界动物卫生组织（OIE）要求必须报告的动物疫病之一。截至目前，全世界仍无有效的药物及疫苗对非洲猪瘟进行控制，防控只能依靠高度的生物安全措施、监测及扑杀。非洲猪瘟在2018 年进入中国以来，给养猪业造成了巨大的损失。目前，非洲猪瘟病毒毒株的多样性加剧，疫情的复杂性也在加重：流行毒株仍以基因Ⅱ型野毒株为主，存在自然变异毒株、基因缺失毒株、低毒力毒株等变异毒株以及基因Ⅰ毒株。非瘟猪瘟病毒基因Ⅱ型毒株感染仍呈现高发病率和高病死率，但易早发现早确诊；非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型毒株感染严重影响母猪繁殖性能，引起繁殖障碍等；临床上还存在野毒株和变异株混合感染现象。

根据临床症状，非洲猪瘟一般可分为特急性、急性、亚急性和慢性。非洲猪瘟的症状如下：①特急性非洲猪瘟：突然死亡而无明显症状。②急性非洲猪瘟：患病猪嗜睡喜卧，呼吸急促，食欲不振，伴有40～42 ℃高温，通常在1～2 周内死亡。临床症状主要表现为胸部、腹部、尾巴、会阴和腿部皮肤发红，眼睛和鼻子流出分泌物，腹泻或便秘并伴有呕吐，延长病程时出现神经症状。怀孕的母猪可以在怀孕的任何阶段流产。③亚急性非洲猪瘟：症状较轻，主要病变为出血和血肿。猪只会有不同程度的发烧，表现为精神抑郁、食欲不振、肺炎或呼吸道症状，关节通常肿胀。病程持续数周至数月，病猪通常在7～20 d 内死亡，死亡率为30%～70%。④慢性非洲猪瘟：临床症状为轻度发热，伴有中度或重度关节肿胀，呼吸道症状轻微，通常出现皮肤红斑、坏死、突起。非洲猪瘟病毒通常可以存活几个月，但很难恢复。剖析显示肺部呈干酪状坏死的肺炎、纤维性心包炎、病猪淋巴结肿大、局部出血症状。为此，国家农业农村部发布了《非洲猪瘟常态化防控技术指南》，中国动物疫病预防控制中心发布了《养殖场非洲猪瘟病毒变异株防控技术指南》，对于每个规模化猪场而言，做好生物安全，坚持ASFV 监测依然是目前有效防控非洲猪瘟的唯一方法[1]。

1 材料与方法

1.1 试验时间及地点

2021 年1-12 月，贵州省某集团种猪场。

1.2 采样方法及样品数量

按照笔者所在实验室拟订的“规模化猪场非洲猪瘟监测技术规程”，对贵州某规模化猪场进行持续12 个月的监测，累计采样检测样品共计4 421份，其中人员（1 347 份）、物资（572 份）、车辆（2 502 份）。

1.3 检测试剂

非洲猪瘟荧光定量PCR 试剂盒购自北京亿森宝公司，DNA 核酸提取试剂盒购自厦门腾基生物公司。

1.4 仪器设备

实时荧光定量PCR 仪FQD-48A 购自博日公司，移液器购自ependof 公司。

1.5 检测方法

样品采集后用样品液倒入无菌的样品保存管中，2 000 r/min 离心1 min，取上清500 μL 待检，样品能在24 h 内检测可置于4 ℃保存，如24 h 内无法检测的样品则置于-20 ℃保存。DNA 核酸提取和荧光定量PCR 检测均按照说明书操作及标准判定。

2 结果与分析

2021 年全年对4 421 份环境样品进行非洲猪瘟病原检测。由表1 可知，人员样品2、3、6、7、8 月份查出阳性，阳性率分别为7.69%、9.57%、1.91%、5.18%、8.96%；车辆样品1、2、3、4、6、7、8、9、12 月份查出阳性，阳性率分别为0.53%、5.97%、8.36%、0.5%、4.83%、4.85%、8.05%、0.92%、1.02%；物资样品8 月份查出阳性，阳性率为2.38%。

表1 场外环境样品1-12 月核酸监测阳性率 %

由表2 可知，不同用途车辆样品中，外部运猪车检出阳性率最高，为10.69%，其次为客户车辆5.71%、人员物资运输车1.88%、饲料公司料车1.02%、内部转猪车1.07%。

表2 不同用途车辆样品1-12 月核酸监测结果

对该场1 年的跟踪监测结果显示，2-3 月和6-8 月ASFV 检出率较高，从ASFV 带毒率来看：车辆＞人员＞物资，其中，外来运猪车辆和客户车辆风险系数较高。笔者在进行风险追溯后发现车辆带毒的主要原因：运输过带毒猪只后未彻底消毒、在公共洗消点被二次污染、运输路途中被污染；人员带毒主要原因：去过农贸市场和餐馆被污染、被同行人员二次污染、被乘坐车辆二次污染、被家中肉制品污染[2-3]。因此，要高度重视车辆、人员的传播风险，坚持监测工作，严格执行洗消流程，有条件的企业力争创建非洲猪瘟无疫小区，构建闭环生产链，大环境无疫则将大大减轻养殖企业的非洲猪瘟防控压力。

3 防控经验分享

3.1 了解当前非洲猪瘟流行特点

当前非洲猪瘟变异毒株表现为潜伏期长、猪只带毒时间长、传播速度变慢、死亡率降低的慢性非洲猪瘟、温和性非洲猪瘟，导致临床早期发现难度增加，精准剔除操作困难，一旦发现时，往往全群已经大面积感染，损失惨重。弱毒株、疫苗毒开始检测阴性，后期转阳性，与猪群应激关系极大；慢性非洲猪瘟、温和性非洲猪瘟、疫苗毒往往在其他疾病发生后或应激后又被检测出来。野毒发现即清除，而弱毒株、疫苗毒因传播慢、范围小、检测结果反复、死亡率低等原因，可采取疑似隔离、观察、检测确认再剔除方式进行；根据猪的种类（如母猪、育肥等）不同、疑似病例复盘可能路径不同、发病点分布不同，采样方式、检测范围、检测频次、剔除范围相应不同，剔除操作则要注意隔离、消毒，不扩散；对疫苗毒，血液检测相对更可靠，检出率更高，而口、鼻、肛采样在症状明显或死亡之后往往才能检测出来，检出率相对较低。对慢性疑似病例，只有多次反复抗原检测或结合抗体检测才能确认，可能还要用到不同厂家试剂盒加以验证；有专家建议把qPCR 检测Ct 值40 作为诊断参考。平时抗原、抗体定期监测与紧急状态扩大监测结合，既考虑可靠性又强调经济性。慢性非洲猪瘟、温和性非洲猪瘟的出现，无疑增加了对非洲猪瘟检测确诊的难度，检测成本急剧升高[4]。

3.2 提高猪群健康度

哈尔滨兽医研究所仇华吉研究员指出提升猪群“酒量”（感染阈值）的观点，也是指要提高健康度，那么如何评价猪群健康度？可以根据以下指标进行大致评估：猪群的精神状态、采食量；皮肤、黏膜的完整性；红细胞和血红蛋白水平；出现便秘、泪斑、铁锈线、难产母猪的比例；老弱病残和亚健康猪的比例；发情率、受胎率、健仔率、仔猪成活率和育成率的比例等。只有提高猪群整体健康度，才能有效抵御病毒的侵袭，主要措施有：①保证优良猪舍环境，针对自身猪舍情况进行改造，做到环境干燥、温度适宜、良好通风、降低猪群密度等方面；②提供含有丰富营养的饲料，蛋白质、氨基酸、脂肪、维生素和微量元素等都是能增强免疫力的营养元素，提供符合饮用标准的饮水也是保证健康的重要措施；③抗应激管理，提升非特异性免疫力。从事生产流程入手减少猪群的应激，当各阶段猪群处于应激期时全群投放中药、益生菌、抗菌肽、多维等功能性添加剂。

3.3 有效降低猪场环境病毒的载量

国外学者研究数据显示，猪只感染非瘟病毒需要一定的病毒量，不同的感染途径所需最低感染的病毒量不同，如非洲猪瘟的感染剂量通过口和鼻分别为105 HAD50/mL 和102.9 HAD50/mL。因此，在防控非洲猪瘟时的一个重要工作就是尽量减少猪只所处环境中的病毒载量，具体措施如下：①控制好五流（水料流、车辆流、人员流、动物流和物品流）、知己彼、拔病牙。通过“控五流”尽量堵住病毒不进入猪场。②有效消毒，正确规范的洗消杀工作对于消灭场内残留的病原和防止病原的传播至关重要，建议进行“立体式”洗消杀操作，包括场地洗消、饮水消毒和空气消毒。通过“有效消毒”的方式，杀灭可能进入猪场的病原。③重视消灭“蚊蝇老鼠”，蚊蝇虽小，但却是最极具危险且难以防范的非瘟传播媒介。吸血昆虫如果吸食了病猪的血液，可以保留24 h 的传播能力，在其活动采食范围内将成为非洲猪瘟病毒传播的机械载体，更有报告说苍蝇可以飞到2.3 km 外的地方传播流感病毒，由此可推理苍蝇传播非瘟病毒的距离之远。

3.4 重视硬件生物安全改造

目前，大部分猪场基本的防非硬件设施已经完善，但在生产操作过程中会出现不适用、闲置等问题，当出现这种现象时一定要立即改造，遵循“制度管人+硬件管人”的原则，在生物安全防控中不能完全依靠人性的自觉，更要设施管控，实现“不该去的区域去不了，洗消流程时间未到人离不开”。

4 结 语

目前，由于非洲猪瘟病毒的变异流行特点发生变化，很多养殖户认为非洲猪瘟病毒难防，但是只要在场内外环境和生产管理过程中构建好猪场的生物安全体系，提高猪群健康度，综合防控重要传染病，做好猪场内外环境监测，守好外围防线，便可以有效阻断非洲猪瘟病毒传播途径。因此，外环境监测在防控非洲猪瘟等动物疫病以及制定防控措施中起到了关键的作用，一方面能够早发现环境病毒并溯源，另一方面洗消措施更有针对性，抓住防控关键点将生物安全措施落到实处。