包被胍基乙酸体外释放评价

蒋青荣，刘 璇，刘伟国，杨立彬*

1.固安君德同创生物工程有限公司，河北廊坊 065500；

2.北京君德同创生物技术股份有限公司，北京 100085

胍基乙酸（GAA）属于氨基酸及其衍生物，是肌酸的唯一前提物质，可以通过代谢途径提高动物体内肌酸水平以调节能量代谢，提高动物生长速度；通过调节氨基酸代谢，提高蛋白质沉积，改善肉品质，增强机体对外界的抗逆性，具有其他氨基酸无法替代的作用[1-7]。

GAA 在瘤胃中易被微生物降解，最终到达小肠被吸收利用的量较少。Hannah 等[8]以荷斯坦公牛为研究对象，在其瘤胃或真胃中注射GAA，通过血浆肌酸和尿肌酸浓度估算GAA 的吸收利用率发现，瘤胃注入GAA 的效果约为真胃注入GAA 的50%。在实际生产中，常采用纤维素包被、聚合物胶囊包被、酵母富集等方法，降低氨基酸类物质在反刍动物瘤胃中的降解率，提高小肠吸收利用率，进而减少在反刍动物饲料中的使用量，节约饲料成本。本试验以一种新研发的包被胍基乙酸（CGAA）为研究对象，采用体外法测定CGAA 产品在不同缓冲液中的释放率，衡量GAA 的包被效果，旨在为后续制剂的开发和在生产中的使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

GAA 样品(有效含量≥96%）和CGAA 样品（有效含量≥70%）均由固安君德同创生物工程有限公司提供。甲醇、乙腈，色谱纯，购自赛默飞世尔科技有限公司。柠檬酸、磷酸氢二钠、碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁等均为国产分析纯试剂。

1.2 主要仪器

高效液相色谱仪（安捷伦1260 InfintyⅡ）、恒温水浴锅（HWS-28）、超声水浴锅（KQ5200DE）。

1.3 溶液的制备

人工唾液模拟反刍动物口腔，按文献[9]配制，具体配方见表1。

表1 人工唾液配方 g

pH 6.6、pH 5.4、pH 2.4 缓冲液分别模拟反刍动物瘤胃、真胃、十二指肠，按文献[10]配制，具体配方见表2。

表2 不同pH 值缓冲液配方 g

1.4 试验方法

准确称取5.0 g（精确至0.001 g）GAA（GAA组）和CGAA（CGAA 组）样品放入50 mL 具塞试管底部，加入20 mL 人工唾液、pH 6.6、pH 5.4 和pH 2.4 缓冲液中，盖紧试管在39 ℃恒温水浴锅内消化4、8、12、24 h，冲洗、过滤，滤液定容至50 mL 容量瓶中，充分混合均匀后，收集滤液。采用高效液相色谱法测定滤液中的GAA 含量（具体测定色谱条件见本文“1.5”），计算样品在人工消化液中的释放率。

释放率=滤液中GAA 含量/样品中GAA 含量×100%。

1.5 含量测定色谱条件

使用Kromasil NH2 色谱柱对样品进行色谱分析。流动相为配比为40∶60 的磷酸氢二钠水溶液与乙腈，磷酸氢二钠水溶液pH 值为8，流速为1 mL/min，检测波长为200 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL。

1.6 数据分析

数据经Excel 处理后，采用SPSS 23.0 软件中的独立样本t检验进行方差分析。

2 结果与分析

由表3 可知，GAA 组和CGAA 组在人工唾液、人工瘤胃液、人工真胃液、人工肠液中的释放率均随着时间的延长而提高。与GAA 组相比，CGAA 组在人工唾液、人工瘤胃液、人工真胃液中各时间点的释放率均极显著较低，在人工肠液中各时间点的释放率无显著差异。CGAA 在人工瘤胃液中24 h 释放率不超过8.51%，在人工肠液中8 h 释放率可达99.76%。结果表明，CGAA 组样品在人工唾液、人工瘤胃液中具有良好的稳定性，在人工真胃液中逐渐释放，在人工小肠液中快速释放，不存在过保护现象。

表3 CGAA 在人工消化液中的释放率 %

3 结 论

CGAA 在人工唾液、人工瘤胃液中具有良好的稳定性，且在人工肠液中与GAA 具有同等良好的释放率。