乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA表达与血小板参数及D-二聚体的相关性

袁航 徐烨 黄波

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所导致的一种以肝细胞变性、坏死、炎症反应为主要特点的疾病，而中国作为乙型肝炎高发地区，目前HBV 携带者已有1.3 亿之多，HBV 总感染率也已达到60%[1]。在临床中，乙型肝炎患者在疾病发展过程中的长期肝细胞受损、充血水肿及纤维组织的增生，可导致其发生肝硬化[2]。根据临床研究指出，肝脏作为维持人体抗凝、凝血及纤溶系统稳定最为主要的脏器，乙型肝炎肝硬化的发生可导致患者肝脏凝血相关物质的合成及代谢受到损害，表现为血小板数量的减少及凝血功能的异常[3]。既往研究认为门静脉高压状态下的脾功能亢进、脾大是导致乙型肝炎肝硬化患者凝血功能异常的主要原因[4]，但根据近期研究指出，非脾功能亢进的肝硬化患者同样存在血小板数量减少、凝血功能异常的问题[5]。因而对于临床乙型肝炎肝硬化患者凝血功能异常的机制还有待进一步的研究。同时另有研究指出，HBV 对骨髓巨核细胞具有抑制作用，影响血小板的合成及凝血功能[6]。目前。临床关于乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表达与其血小板参数、D-二聚体（D-D）的相关性研究较少。基于此，本次研究选取80 例于2019 年1 月-2022 年1 月在宜春市人民医院接受治疗的乙型肝炎肝硬化患者作为研究对象，探究乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表达与其血小板参数、D-D 的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 便利抽取80 例于2019 年1 月-2022 年1 月在本院接受治疗的乙型肝炎肝硬化患者作为观察组，纳入标准：符合2019 年中华医学会《肝硬化诊治指南》中的乙型肝炎肝硬化诊断标准，（1）乙型肝炎表面抗原阳性，或乙型肝炎表面抗原阴性、乙型肝炎核心抗体阳性且有明确慢性HBV 感染史；（2）病理学检查或影像学诊断发现存在门静脉高压、无创性检测肝脏硬度测定值（LSM）≥17.0 kPa[7]。排除标准：（1）非乙型肝炎导致的肝硬化；（2）存在凝血功能障碍或可导致血小板减少的疾病；（3）临床资料缺损。另选取25 例同期在本院进行常规体检的健康人作为对照组。本次研究经过本院医学伦理委员会审批。患者知情并同意。

1.2 方法 观察组予以HBV-DNA 检测，观察组及对照组均予以血小板参数、D-D 检测。具体检测方法如下：抽取待检测人群空腹静脉血5 mL，分别放置于促凝管、枸橼酸钠抗凝管及EDTA-2K 抗凝管中并充分摇匀，其中促凝管、枸橼酸钠抗凝管均以3 000 r/min 速率离心10 min，待离心结束后，提取上层血清及血浆用于HBV-DNA 和D-D 检测。EDTA-2K 抗凝管血样用于血小板参数检测[血小板计数（PLT）、血小板体积分布宽度（PDW）及平均血小板体积（MPV）]。HBV-DNA 检测采用HBVDNA 检测试剂盒（中山大学达安基因公司）及ABI-7300 荧光定量PCR 仪检测，血小板参数、D-D检测分别采用全自动血细胞分析仪、全自动血凝仪及配套试剂盒。

1.3 观察指标及判定标准 根据HBV-DNA 定量，将80 例乙型肝炎肝硬化患者分为低（HBV-DNA＜ 103IU/mL）、中（≥103IU/mL 且＜105IU/mL）、高载毒量组（105～106IU/mL）。对比观察组、对照组及不同HBV-DNA 载毒量组之间的血小板参数、D-D水平的差异性，并分析乙型肝炎肝硬化患者HBVDNA 表达与其血小板参数、D-D 的相关性。

1.4 统计学处理 本次研究采用Excel 录入保存数据，SPSS 20.0 分析处理数据。对于符合正态分布的计量资料以（）表示，采用独立样本t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验；采用Pearson 相关性分析探究乙型肝炎肝硬化患者HBVDNA 表达与其血小板参数、D-D 的相关性。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 观察组男49 例，女31 例；平均年龄（49.78±5.27）岁；对照组男17 例，女8 例；平均年龄（50.28±5.36）岁。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

2.2 观察组和对照组血小板参数、D-D 水平比较 对比两组血小板参数、D-D 水平，观察组PLT 水平低于对照组，MPV、PDW、D-D 水平均高于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 观察组和对照组血小板参数、D-D水平比较（）

表1 观察组和对照组血小板参数、D-D水平比较（）

2.3 三组不同载毒量组血小板参数、D-D 水平比较 对比三组不同载毒量组血小板参数、D-D 水平，差异均存在统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 三组不同载毒量组血小板参数、D-D水平比较（）

表2 三组不同载毒量组血小板参数、D-D水平比较（）

2.4 乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表达与血小板参数及D-D 的相关性分析 乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表达与PLT 呈负相关，与MPV、PDW及D-D 水平均呈正相关（P＜0.05），见表3。

表3 乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA表达与血小板参数及D-D的相关性

3 讨论

肝脏作为机体多种凝血因子合成的主要场所，具备合成、灭活抗纤溶物质、纤维蛋白溶解物质的功能，对于维持人体凝血、抗凝及纤维蛋白溶解的动态平衡具有重要作用[8]。血液中血小板在正常情况下具有特定的形态、结构及较为恒定的数量，在促进伤口愈合、止血、血栓形成等生理病理过程中均具有重要的临床意义，血小板数量、体积不仅可以准确反映人体骨髓巨核细胞的代谢、增生情况以及血小板合成情况，也可以在一定程度上反映血小板功能正常与否，其中PLT、MPV、PDW 等是临床血小板情况的重要观测参数。

肝硬化作为乙型肝炎患者病情发展至后期阶段的常见疾病转归，本次研究结果显示，相较于健康人群，乙型肝炎肝硬化患者其PLT 明显更低（P＜0.05），与李志英等[9]的研究结果具有一致性。既往研究认为，其原因可能在于：第一，乙型肝炎肝硬化患者由于肝功能受损，其毒素清除能力显著下降，导致内毒素大量在体内堆积，引起血小板的损伤，数量减少。第二，乙型肝炎肝硬化患者多伴有门静脉高压，导致脾功能亢进，单核-巨噬细胞系统大量吞噬和破坏血小板。第三，骨髓中血小板的合成依赖于肝脏血小板生成素的调节，但肝硬化可导致患者蛋白质合成功能下降，从而使得肝脏生成血小板生成素的能力下降，进而导致了血小板数量的减少[10-12]。此外，本次研究中乙型肝炎肝硬化患者血小板其他参数也发生了相应改变，观察组MPV、PDW 水平相较于对照组更高（P＜0.05）。其原因可能在于：乙型肝炎肝硬化患者对于PLT 破坏增加，导致骨髓巨核细胞增生代谢受到抑制，正常大小的血小板生成减少。在此状态下，为满足血小板减少时机体对血小板的需求，机体代偿性地增加功能、活性及代谢能力更为强大的大血小板，而在临床中一般认为MPV、PDW 水平越高，患者血液内大血小板与小血小板的数量分布差异越大[13]。此外，也有研究认为由于肝功能的损伤，导致患者血清白蛋白合成受阻，纤维蛋白大量与血小板结合，使得血小板黏附聚集能力增强，导致了正常大小的血小板数量减少，而大血小板数量增多[14]。

本次研究还探究了健康人群、不同HBV-DNA载量肝硬化患者之间D-D 表达的差异性，研究结果显示，相较于健康人群，乙型肝炎肝硬化患者其D-D 水平更高，且在不同HBV-DNA 载量患者之间，患者HBV-DNA 载量越高，D-D 水平越高。其中D-D 水平是机体凝血反应状态下凝血酶作用于纤维蛋白而形成的一种特异性降解蛋白，对于机体凝血状态及纤维蛋白溶解具有较强的敏感性，其与肝功能状态具有密切的联系。在蒙增萍等[15]、孙艳虹等[16]的研究中，也指出患者肝功能受损程度越重，患者体内D-D 水平越高，与本次研究结果具有相似之处。

在本次研究中，Pearson 分析结果显示乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA 表达与PLT 呈负相关，与MPV、PDW 及D-D 水平呈正相关。分析其原因在于：HBV 为一种吞噬性病毒，可对骨髓造血干细胞及骨髓巨核细胞产生直接抑制作用，且HBV 病毒载量越高，其对于骨髓造血干细胞及骨髓巨核细胞的抑制作用越强，使得血小板数量减少，影响凝血功能，从而导致了D-D 水平的升高[17]。在另一方面，HBV 还可通过影响机体的正常造血微环境，使得T 细胞功能失调，从而杀伤造血干细胞，引发骨髓抑制。也有学者认为，HBV 病毒载量越高，病毒复制程度越高，其传染性更强，对于患者肝细胞的损伤越大，而肝脏作为血小板生成素合成的主要器官，肝功能受损，则意味着凝血功能下降，D-D 水平升高[18]。在张曼华等[19]的研究中，对乙型肝炎肝硬化患者抗病毒治疗前后的D-D 水平变化进行了探究，其研究结果显示，乙型肝炎肝硬化患者治疗前D-D 水平显著高于治疗后，这能够在一定程度上反映乙型肝炎肝硬化患者HBV 病毒载量与D-D 水平之间的相关性。此外在董丽娴等[20]的研究中，也指出了乙肝肝硬化患者其HBV-DNA 与血小板生成素水平之间存在相关性。

综上所述，乙型肝炎肝硬化患者其HBV-DNA载量与其血小板参数及D-D 存在相关性，患者HBV-DNA 载量越高，其凝血纤溶功能失衡更加明显，提示在临床干预中，应当注重对乙型肝炎肝硬化患者的抗病毒干预，减少病毒复制以维持凝血纤溶功能的平衡。