B族链球菌血清型分布情况及耐药性分析*

贾丽娜，赵 丽，陈国栋，蒋冬香

桂林医学院附属医院检验科，广西桂林 541001

B族链球菌(GBS)又称无乳链球菌，是一种条件致病菌。荚膜多糖是GBS的保护性抗原，根据荚膜抗原性将GBS分为Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ 10种血清型，但是GBS流行血清型的分布有一定区域差异。在发达国家，GBS是围生期孕妇感染的主要致病菌，GBS感染已成为导致围生儿间接死亡的主要原因之一[1]。美国疾病预防控制中心于2010年推出的《围生期GBS疾病预防指南》[2]中明确指出，对于孕35～37周孕妇应普遍进行阴道下1/3直肠GBS定植筛查。近年来，我国不断有研究发现，对于围生期孕妇而言，GBS与围生期孕妇不良妊娠结局存在密切关系[3-4]。如今国家“三孩”政策已实施，为降低围生期孕妇感染GBS及不良母婴结局，临床上应加大对孕晚期孕妇GBS感染的筛查力度，对可能出现的母婴感染应及时进行预防性治疗，改善不良妊娠结局。本研究对桂林地区围生期孕妇GBS感染的血清型分布情况及耐药性进行分析，为临床预防和治疗GBS感染提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年7月至2020年12月在本院常规产前检查、住院分娩且临床资料完整的1 294例孕晚期孕妇阴道分泌物拭子培养出的75株GBS作为研究对象。纳入标准：年龄20～35岁；未合并妊娠期并发症(糖尿病、高血压、甲状腺功能减退症等)；标本采集前1周孕妇未使用抗菌药物。排除标准：双胎妊娠；滴虫、真菌、支原体等其他生殖道感染；肝、肾、心、脑等慢性疾病患者；精神疾病患者。所有研究对象均知情同意并签署知情同意书。本研究经本院医学伦理委员会审批通过，审批号：2019WJWZCLL-6。

1.2仪器与试剂 VITEK MS质谱仪、VITEK2 Compact全自动微生物分析系统及配套AST-GP67药敏卡均购自法国生物梅里埃股份有限公司；生物安全柜购自济南鑫贝生物技术有限公司；哥伦比亚血琼脂平板购自杭州天和微生物试剂有限公司；血清分型试剂购自丹麦血清研究所；革兰染色试剂盒购自四川省迈克科技有限责任公司；普通显微镜。大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923及铜绿假单胞菌ATCC27853用于药敏试验质量控制，购自原卫生部临床检验中心。

1.3方法

1.3.1标本采集 由经过专业培训的产科医生采集标本，使用一次性无菌棉签拭子在受检孕妇阴道下1/3处旋转1周，将采集好的拭子放入无菌试管立即送检。

1.3.2细菌培养 阴道分泌物拭子采用分区划线法接种于哥伦比亚血琼脂平板，于恒温培养箱培养18～24 h后观察血平板上菌落的特点，挑取灰白色、圆形、半透明、中等大小、β溶血的可疑菌落涂片、革兰染色，GBS镜检为革兰阳性、成对或短链状排列的球菌。

1.3.3GBS鉴定、药敏试验及血清型分型 按照《全国临床检验操作规程》第4版[5]进行GBS培养分离鉴定及药敏试验。对疑似菌落采用VITEK MS质谱仪快速鉴定，鉴定为GBS的采用VITEK2 Compact全自动微生物分析系统及配套AST-GP67药敏卡进行药敏试验；血清型分型采用特异性乳胶凝集分型试剂盒，不与任何一种抗血清反应的菌株归为血清学不能分型菌株。

1.4统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行数据分析处理。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.175株GBS的血清型分布 75株GBS共检出3种血清型，以Ⅲ型31株(41.33%)为主，其次是Ⅰa型24株(32.00%)和Ⅰb型20株(26.67%)。

2.275株GBS的药敏试验结果 75株GBS对青霉素、万古霉素、替加环素、利奈唑胺、氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟及奎奴普丁/达福普汀的耐药率均为0.00%，对克林霉素、四环素、左氧氟沙星、莫西沙星和呋喃妥因的耐药率分别为100.00%、81.33%、34.67%、33.33%、17.33%，见表1。

表1 75株GBS的药敏试验结果[n(%)]

2.33种血清型GBS对4种抗菌药物的耐药率比较 3种血清型GBS对左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，Ⅲ型耐药率最高；3种血清型GBS对四环素和呋喃妥因的耐药率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 3种血清型GBS对4种抗菌药物的耐药率比较[n(%)]

3 讨 论

GBS是一种革兰阳性β溶血链球菌，需氧，圆形或卵圆形，成对或链状排列，在哥伦比亚血琼脂平板上35 ℃培养18～24 h后形成直径为0.5～1.0 mm，呈灰白色、扁平、半透明或不透明、表面光滑、较湿润的菌落，但β溶血环窄小，有11%的GBS不出现溶血，少数菌株可出现宽大的β溶血环。GBS氧化酶阴性，触酶阴性，对万古霉素敏感，6.5%NaCl试验不生长，胆汁七叶苷不生长，杆菌肽耐药，环磷酸腺苷试验阳性，马尿酸盐水解试验阳性，吡咯烷酮酶试验阴性，从而可与链球菌属其他临床重要链球菌相鉴别。GBS表面结构复杂，包括覆盖在表面的荚膜多糖、内层的肽聚糖结构和细胞膜。GBS的毒性和侵袭力主要来自其荚膜结构及其产生的透明质酸酶，GBS产生的其他酶和致病毒素包括M蛋白、链激酶、链道酶和溶血素等。孕妇围生期GBS筛查及分娩期抗菌药物的预防使用是目前降低GBS感染最有效的策略。因此，本研究对桂林地区围生期孕妇GBS感染的血清型分布情况及耐药性进行分析，为临床预防和治疗GBS感染提供重要依据。

本研究结果显示，桂林地区围生期孕妇感染GBS的血清型以Ⅲ型[31株(41.33%)]为主，其次是Ⅰa型[24株(32.00%)]和Ⅰb型[20株(26.67%)]。唐山地区[6]流行的血清型以Ⅲ型(33.70%)为主，其次是Ⅰb型(32.70%)和Ⅴ型(18.20%)；江西中部地区[7]主要以Ⅰb型(35.10%)和Ⅲ型(26.60%)为主，其次是Ⅰa型(23.40%)；武汉地区[8]以Ⅰb型(35.56%)、Ⅰa型(26.67%)和Ⅲ型(20.00%)为主；厦门地区[9]以Ⅲ型(59.00%)、Ⅰa型(15.70%)和Ⅰb型(14.50%)为主。国外有研究表明，Ⅲ、Ⅰa、Ⅴ型是GBS感染最普遍的血清型[10]，本研究与国内外其他地区的研究存在差异，可见GBS血清型分布有一定的区域性差异，但是各地区引起流行的GBS血清型分布又基本一致，主要为Ⅰa、Ⅰb、Ⅲ和Ⅴ 4种。

本研究75株GBS对青霉素、万古霉素、替加环素、利奈唑胺、氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟及奎奴普丁/达福普汀的耐药率均为0.00%，对克林霉素、四环素、左氧氟沙星、莫西沙星、呋喃妥因的耐药率分别为100.00%、81.33%、34.67%、33.33%、17.33%。唐山地区姚玲等[6]报道，110株GBS对哌拉西林、头孢噻肟、利奈唑胺、莫西沙星、青霉素、氨苄西林、万古霉素全部敏感，对克林霉素、左氧氟沙星、四环素的耐药率分别为71.80%、64.50%、52.70%；西安地区王林等[11]报道，GBS对万古霉素、利奈唑胺、替加环素、头孢吡肟、头孢曲松、氨苄西林、青霉素的敏感率均为100.00%，对四环素、克林霉素、左氧氟沙星的敏感率分别为82.05%、50.00%、50.00%；青岛地区宋海燕等[12]报道，GBS对青霉素、氨苄青霉素、利奈唑胺、万古霉素均敏感，对克林霉素、左氧氟沙星的耐药率分别为75.90%、74.10%。由此可见，本研究GBS耐药情况与大多数报道一致，即GBS对青霉素类、头孢菌素类、糖肽类等抗菌药物均敏感，未发现对青霉素耐药的菌株，但GBS对克林霉素、四环素和左氧氟沙星均有不同程度的耐药。本研究GBS对克林霉素的耐药率为100.00%，略高于柳州地区陈燕群等[13]报道的克林霉素的耐药率(96.90%)，但远远高于全国其他地区，如西安地区王林等[11]报道的50.00%，青岛地区宋海燕等[12]报道的75.90%，东莞地区张丽华等[14]报道的62.10%。本研究GBS对四环素的耐药率(81.33%)与其他地区基本持平，新乡地区晁利娜等[15]报道的GBS对四环素的耐药率为86.73%，武汉地区蒋雯等[8]报道的为86.67%，东莞地区张丽华等[14]报道的为86.50%。本研究GBS对左氧氟沙星的耐药率为34.67%，低于唐山地区姚玲等[6]报道的64.50%和青岛地区宋海燕等[12]报道的74.10%，高于柳州地区陈燕群等[13]报道的32.90%。

本研究结果显示，3种血清型GBS对左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，Ⅲ型耐药率最高；3种血清型GBS对四环素和呋喃妥因的耐药率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。王林等[11]报道显示，GBS耐药菌株在Ⅲ型、Ⅰb型和Ⅴ型分离菌株中广泛流行。据文献报道，GBS耐药性与其血清型、耐药基因型等因素密切相关[16]。随着抗菌药物的使用，临床分离GBS的耐药率呈不断上升趋势。彭捷等[17]报道显示，GBS的5年耐药率总体呈逐年上升趋势。GBS对抗菌药物的耐药率各地均不相同，GBS血清型分布也有一定的区域性差异。因此，分析桂林地区GBS对常用抗菌药物的耐药性能为临床提供有效的预防和诊治依据。

桂林地区围生期孕妇感染GBS的血清型以Ⅲ型为主，其次是Ⅰa型和Ⅰb型；GBS对克林霉素和四环素耐药率均较高，GBS感染应首选青霉素治疗，对青霉素过敏者可选用万古霉素。不同地区GBS的血清型分布及耐药性均存在差异。为预防和控制桂林地区围生期孕妇GBS感染的发展，临床应根据药敏试验结果合理使用抗菌药物进行治疗，并密切关注其耐药性变迁，降低围生期孕妇GBS感染的风险，保障良好的妊娠结局。