HMG-CoA还原酶抑制剂联合阿托伐他汀对冠心病大鼠的干预及降血脂作用

杜蕊 李娜 赵彩杰 纪征 (河北唐山工人医院心内一科，河北 唐山 063000)

冠心病简称为冠状动脉粥样硬化性心脏病，是一种缺血性心脏病〔1〕。导致冠心病的危险原因有很多除了遗传因素和年龄等不可控制的因素外，还包括超重、糖尿病、吸烟、肥胖、血脂异常、高血压等可控的因素，对这些因素进行积极防控有助于防治冠心病〔2,3〕。冠心病多发生在40岁以上成人，并且女性发病晚于男性，近年来呈年轻化趋势〔4〕。冠心病早期可无任何症状，仅表现为剧烈体育活动或者重体力劳动后，出现心绞痛症状，服用扩张冠状动脉药物或休息后可迅速缓解〔5〕。冠心病典型症状为心绞痛、呼吸短促、胸部压迫等，发生急性冠脉综合征时，除了典型的心绞痛之外可能还会伴有突然出现头晕、恶心、冷汗或消化不良的感觉、活动时颈部疼痛，呼吸短促感觉加剧〔6,7〕。本研究探讨羟甲基戊二酰辅酶(HMG-Co)A还原酶抑制剂联合阿托伐他汀对冠心病模型大鼠的干预效果及降血脂作用。

1 材料与方法

1.1材料 选取44只清洗级SD健康雄性大鼠(成都达硕生物科技有限公司)，体重180～230 g，平均(204.2±21.3)g，根据体重随机分为分正常组、模型组、阿托伐他汀组、联合治疗组各11只。在环境温度(22±2)℃、湿度(52±2)%条件下进行喂养，将饮用水及食物消毒后，自然采光，自由饮食、饮水，适应性喂养1 w后进行实验。主要试剂及使用药物：维生素D注射剂(上海通用药业股份有限公司)；垂体后叶素注射液；兔抗大鼠谷草转氨酶(AST)抗体(Hyclone公司)。

1.2建模及给药 建模：选取11只大鼠，不进行任何处理作为正常组。其余33只进行冠心病模型建立。对大鼠麻醉后将气管切开插管，采用动物呼吸机进行辅助呼吸，褪去大鼠胸部毛，消毒处理后，沿左锁骨中线切开大鼠胸腔，剪开心包，轻微按压右侧胸部挤出心脏。对左冠状动脉前降支中上部位采取结扎处理，后将心脏复位关胸，于大鼠苏醒后缝合拔管，Ⅱ导心电图检测，当ST段下移或者T波改变现象视为建模成功。建模过程中死亡1只，最终建模成功32只，分为模型组10只，阿托伐他汀组11只，联合治疗组11只。

给药：阿托伐他汀组、联合治疗组建模成功后第1天分别给予0.10 mg/ml阿托伐他汀溶液、10 mol/L HMG-CoA还原酶抑制剂联合0.10 mg/ml阿托伐他汀溶液。

1.3标本采集 在实验各组分别治疗的第1周后，对所有大鼠禁食不禁水，使用乙醚吸入麻醉，进行背部固定，描记Ⅱ导心电图，抽取腹部静脉血10 ml对血脂、心肌酶等指标进行检测后，剖开胸腔，戊二醛固定，剥离心脏及置于载玻片上的心尖组织。将一部分心肌组织置于戊二醛、磷酸缓冲液配制液中进行固定，另一部分置于液氮中保存待用。

1.4苏木素-伊红(HE)染色 大鼠心肌组织固定24 h后，将大鼠心肌组织从戊二醛、磷酸缓冲液配制液中取出并且进行脱水处理，处理后进行石蜡包埋、切片、染色。染色后在显微镜下观察。

1.5脂联素(APN)表达量检测 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测APN表达：提取细胞总RNA，检测RNA纯度、含量，逆转录处理后获得cDNA，使用Primer5.0软件设计引物，采用2-ΔΔCt方法计算，内参U6。设置反转录反应条件：25℃ 10 min，40℃ 60 min，85℃ 5 min；设置扩增条件：94℃ 20 s、72℃ 30 s、60℃ 30 s，35个循环，采用2-ΔΔCt方法计算出需要检测的APN表达量。

1.6酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肌酸激酶(CK)、AST、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平 取主动脉血5 ml，使用3 000 r/min离心机进行离心处理15 min，制备血清。使用ELISA法对CK、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C、TNF-α水平检测：将血清置于室温，标记酶标板，制作标准品，然后取出试剂盒，以1∶2的稀释液稀释样品；在反应孔上依次加入稀释血清和标准品100 μl/孔，放置37℃恒温孵育箱中湿育2 h；然后用专用的洗涤液将反应板清洗3次以后，再加入抗体工作液(1∶100倍稀释后)100 μl/孔，放于37℃恒温孵育箱中湿育45 min；继续清洗反应板4次后，在反应孔内加入TMB溶液100 μl/孔，置于37℃恒温孵育箱中湿育45 min后在反应孔内加入终止液100 μl/孔终止反应，在450 nm波长测定吸光度，颜色反应深浅与CK、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C、TNF-α水平成正比，经绘制标准曲线计算CK、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C、TNF-α水平。

1.7血流动力学检测 使用全自动生化分析仪对血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞变形指数进行检测：使用全自动生化分析仪时应严格按照仪器说明书进行，避免出现误差。

1.8统计学方法 采用SPSS21.0软件进行方差分析、t检验。

2 结 果

2.1病理图 正常组心肌细胞形态及间质结构正常，未见有炎症细胞侵入；模型组心肌横纹、肌束断裂消失，细胞膜不完整，炎症细胞渗出，大量结缔组织增生；阿托伐他汀组心肌横纹、肌束少量断裂消失，炎症细胞较少渗出，少量结缔组织增生；联合治疗组心肌细胞形态及间质结构趋于正常，但有少量炎症细胞侵入。见图1。

图1 各组心肌病理(HE染色,×400)

2.2各组心脏APN、TNF-α、CK及AST表达量对比 与正常组相比，模型组APN表达量明显下降、TNF-α表达量明显上升(P<0.05)；与模型组相比，阿托伐他汀组APN表达量明显上升，TNF-α表达量明显下降(P<0.05)；与阿托伐他汀组相比，联合治疗组APN表达量明显上升，TNF-α表达量明显下降(P<0.05)。与正常组比较，模型组CK、AST水平明显上升(P<0.05)；与模型组相比，阿托伐他汀组CK、AST水平明显下降(P<0.05)；与阿托伐他汀组相比，联合治疗组大鼠CK、AST水平明显下降(P<0.05)。见表1、表2。

2.3各组血流动力学指标比较 与正常组相比，模型组血浆黏度、红细胞聚集指数明显上升，红细胞变形指数明显下降(P<0.05)；与模型组相比，阿托伐他汀组血浆黏度、红细胞聚集指数明显下降，红细胞变形指数明显上升(P<0.05)；与阿托伐他汀组相比，联合治疗组血浆黏度、红细胞聚集指数明显下降，红细胞变形指数明显上升(P<0.05)。见表1。

表1 各组APN、TNF-α、血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞变形指数比较

2.4各组血脂指标比较 与正常组相比，模型组TC、TG、LDL-C明显上升、HDL-C明显下降(P<0.05)；与模型组相比，阿托伐他汀组TC、TG、LDL-C明显下降，HDL-C明显上升(P<0.05)；与阿托伐他汀组相比，联合治疗组TC、TG、LDL-C明显下降，HDL-C明显上升(P<0.05)。见表2。

表2 各组CK、AST及TC、TG、LDL-C、HDL-C比较

3 讨 论

冠心病临床表现主要为出现不同程度的心绞痛，对患者生活及身体健康造成严重影响〔8，9〕。中老年人为冠心病主要发病人群，近年来受社会发展、饮食习惯改变、生活方式等影响，心血管疾病发病率不断上升，且部分疾病发病年龄呈年轻化趋势〔10〕。据相关流行病学调查数据显示，高血压、血脂水平异常等均属于常见冠心病诱因。HMG-CoA还原酶在临床可以有效治疗心血管疾病，也是胆固醇合成酶系中的关键，他汀类药物通过对他的抑制作用从而使肝脏合成胆固醇受到抑制。阿托伐他汀属于Ⅱ型他汀类药物，与Ⅰ型他汀类药物相比具有更为复杂的结构〔11,12〕。

由免疫细胞合成分泌的内源性多肽属于炎症因子，可以介导多种免疫反应，具有强大生物学效应。目前研究认为冠状动脉硬化的发生与发展与炎症反应具有重要作用〔13〕。TNF-α作为一种多种生物学效应的初级炎症因子，参与多种心血管疾病的发生、发展。冠状动脉粥样硬化与TNF-α之间形成密切相关〔14〕。APN是大鼠脂肪组织中发现一种胶原样细胞因子。心肌细胞不仅分泌APN,而且存在APN特异性集合受体，是一种新保护性抗炎细胞因子，对动脉粥样硬化具有抑制作用。通过多种途径对心血管保护作用，维护心血管正常生理功能〔15〕。本研究结果说明APN、TNF-α与冠心病有着密切关系。

临床上通过对CK、AST活性变化监测对心肌损伤程度进行评估。CK、AST等酶在心肌组织细胞中广泛存在，对维持心肌正常生理功能发挥重要作用。正常情况下，血清CK、AS活性较低，当心肌缺血造成代谢紊乱，造成心肌细胞内多种酶释放进入外周血，加重缺血对心肌损伤〔16,17〕。本研究结果HMG-CoA还原酶抑制剂联合阿托伐他汀对冠心病模型大鼠进行治疗，血清CK、AST水平降低，提示有效降低血清CK、AST活力，减轻心肌缺血损伤程度。

冠状动脉粥样硬化的发生与脂质代谢异常密切相关，而冠心病损伤反应学中脂质是必备条件。血清TC、TG、LDL-C升高、HDL-C降低，对动脉内皮均可造成损伤，高通透性，加速脂质在动脉内皮下的沉积，导致动脉粥样硬化的形成，进而促进冠心病形成〔18〕。研究发现，血清CK长期增高，使冠心病发生概率增加，LDL-C水平越高，患有冠状动脉粥样硬化风险越大〔19〕。本研究结果显示，通过HMG-CoA还原酶抑制剂联合阿托伐他汀对冠心病模型大鼠进行治疗，对脂类代谢具有明显调控作用。

血流流变学对判断疾病的发生发展及预后的重要指标〔20〕。血液流动减慢说明全血黏度增高，红细胞变形能力及减低。受血流变慢影响，红细胞聚集增多，导致外周血循环受阻，心脏缺血，无法得到足够供养，血液浓缩，加重疾病的发展。对血液流变改善，降低血液黏度可有效缓解脂质沉积、红细胞堆积现象，减轻冠心病临床症状〔21〕。本研究结果显示，通过HMG-CoA还原酶抑制剂联合阿托伐他汀对冠心病模型大鼠进行治疗，对改善冠心病大鼠血液流变学效果显著。

综上，使用HMG-CoA还原酶抑制剂联合阿托伐他汀对冠心病模型大鼠进行治疗，有效抑制炎症因子、减轻心肌损伤、调节脂质代谢降血脂、改善血液流变学、对冠心病大鼠有着一定的治疗效果。