贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂化疗对非小细胞肺癌患者血清lncRNA H19及lncRNA HOTAIR表达的影响

徐建群 王红娟 郭红荣 戴芹

(武汉市第三医院，湖北 武汉 430060)

非小细胞肺癌是常见的恶性肿瘤之一，占肺癌的75%～80%，发病率及病死率较高，但是早期发现率较低，较多患者确诊时已经处于中晚期，失去了最佳手术机会，5年生存率较低。因此化疗是延长患者生存时间的主要治疗方案，铂类联合第三代化疗药物方案是非小细胞肺癌的主要治疗方法〔1～3〕。培美曲塞联合顺铂治疗非小细胞肺癌近年在临床上应用较多，该方案疗效较好，不良反应较少〔4,5〕。贝伐单抗是一种靶向治疗药物，可以抑制血管内皮生长因子，减少肿瘤新生血管形成，从而抑制肿瘤〔6〕，既往有研究发现贝伐单抗联合紫杉醇和顺铂治疗非小细胞肺癌的治疗效果较好〔7〕，但是贝伐单抗联合培美曲塞和顺铂的治疗研究较少，本研究探讨3种药物对非小细胞肺癌的治疗效果。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016年1月至2019年12月在武汉市第三院治疗的非小细胞肺癌患者150例，根据患者的治疗方案分为观察组和对照组各75例。对照组给予培美曲塞联合顺铂治疗，其中男41例，女34例，年龄56～74岁，平均(62.1±3.6)岁；病理类型：鳞癌54例，腺癌21例；分期：Ⅲa期26例，Ⅲb期31例，Ⅳ期18例；合并疾病：高血压33例，糖尿病25例；观察组给予贝伐单抗联合培美曲塞和顺铂治疗，其中男38例，女37例，年龄55～76岁，平均(62.9±3.3)岁；病理类型：鳞癌50例，腺癌25例；分期：Ⅲa期24例，Ⅲb期29例，Ⅳ期22例；合并疾病：高血压29例，糖尿病22例；两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准；所有患者及家属知情并同意。纳入标准：①患者行病理检查均符合非小细胞肺癌的诊断标准；②均为初诊，未接受过放化疗治疗；③预计生存时间>3个月。排除标准：①合并严重心、肝、肾等脏器疾病者；②合并活动性肺间质病变者；③对本研究药物过敏者；④合并急慢性感染者；⑤既往行手术治疗、放化疗者；⑥非原发性肿瘤或者肿瘤转移至其他部位或合并其他部位肿瘤者；⑦合并神经、精神疾病者。

1.2方法 所有患者化疗之前给予预防呕吐、补充电解质等常规治疗，在化疗前连续口服3 d地塞米松8 mg/d；化疗前14 d开始口服叶酸400 μg/d，补充维生素B12 1 000 μg/次。对照组给予培美曲塞联合顺铂治疗，第1天给予培美曲塞(南京制药厂有限公司，国药准字H20080176)500 mg/m2，在1 h内静滴完成；化疗第1～3天给予顺铂(齐鲁制药有限公司，国药准字H37021356)75 mg/m2静滴；28 d为1个疗程，共治疗4个疗程。观察组在对照组基础上给予贝伐单抗(瑞士罗氏制药有限公司，国药准字S20100024)治疗，给予7.5 mg/(kg·d)，28 d为1个疗程，治疗4个疗程。

1.3观察指标

1.3.1两组治疗效果 治疗4个疗程后使用《实体瘤治疗疗程评价标准》〔8〕评估治疗效果，完全缓解表示病灶完全消失，部分缓解表示靶病灶的最大直径总和减少≥30%，稳定表示病灶增加<20%或缩小<30%，进展表示病灶最大直径总和增加≥20%或出现新病灶；总有效率=(完全缓解+部分缓解)/总例数×100%。

1.3.2两组免疫功能 治疗前、治疗4个疗程后空腹采集肘部静脉血5 ml，使用流式细胞仪检测T细胞水平，使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β水平。

1.3.3血清印迹基因H19长链非编码RNA(lncRNA H19)、同源盒基因转录长链非编码RNA(lncRNA HOTAIR)水平比较 治疗前、治疗4个疗程后空腹采集肘部静脉血5 ml，以2 000 r/min离心10 min，收集上清液，检测lncRNA H19、lncRNA HOTAIR的表达情况。

1.3.4血管内皮生长因子水平比较 治疗前、治疗4个疗程后空腹采集肘部静脉血5 ml，以3 000 r/min离心15 min后收集血清，使用ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C水平。

1.3.5不良反应 观察治疗期间两组骨髓移植、恶心呕吐、白细胞减少等不良反应。

1.4统计学方法 采用SPSS21.0软件进行χ2检验、t检验。

2 结 果

2.1两组治疗效果比较 治疗后观察组治疗总缓解率(78.67%，其中部分缓解59例、稳定13例、进展3例)显著高于对照组(58.67%，其中部分缓解44例、稳定20例、进展11例；χ2=6.970，P=0.008)。

2.2两组VEGF水平比较 治疗前两组VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后两组VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C水平均较治疗前显著下降，且观察组显著低于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组VEGF水平比较

2.3两组免疫功能比较 治疗前两组免疫功能比较差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较治疗前明显升高，Treg、CD8+细胞水平较治疗前明显下降，且观察组较对照组改善更显著(P<0.05)，见表2。

表2 两组免疫功能比较

2.4两组细胞因子水平比较 治疗前两组细胞因子水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后两组IFN-γ、IL-4、TNF-α水平较治疗前明显升高，TGF-β水平较治疗前明显下降，且观察组改善较对照组更显著(均P<0.05)，见表3。

表3 两组细胞因子水平比较

2.5两组血清lncRNA H19、HOTAIR水平比较 治疗前两组lncRNA H19、HOTAIR水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后两组lncRNA H19、HOTAIR水平较治疗前明显下降，且观察组较治疗组下降更显著(均P<0.05)，见表4。

表4 两组血清lncRNA H19、HOTAIR水平比较

2.6两组的不良反应比较 观察组不良反应发生率(64.00%，其中恶心呕吐和血小板减少各7例,发热和皮疹各8例,骨髓抑制、白细胞减少、脱发各6例)与对照组(50.66%，其中恶心呕吐、脱发、骨髓抑制、白细胞减少各5例，发热、血小板减少和皮疹各6例)差异无统计学意义(χ2=2.725；P=0.099)。

3 讨 论

非小细胞肺癌发病早期临床症状缺乏特异性，确诊时常已经是中晚期了，治疗的目的主要是缓解症状，提高生活质量及延长生存期。化疗是临床上的主要治疗方法，铂类联合第三代细胞毒药物可提高治疗效果，但是患者的生存预后仍然有限。随着对非小细胞肺癌发病机制、分子靶向药物的研究，化疗联合靶向药物治疗逐渐成为研究热点。培美曲塞是一种新型的化疗药物，是一种多靶点抗叶酸化疗药物〔9〕，贝伐单抗可阻断新生血管的生成，使肿瘤的供血和供氧受到影响〔10〕，本研究联合3种药物观察治疗效果。

培美曲塞可干扰DNA合成的代谢途径并且可以直接整合到DNA上阻断细胞的复制和有丝分裂，从而发挥抗肿瘤的作用，主要是因为培美曲塞的多聚谷氨酸盐可抑制叶酸依赖酶，从多种途径抑制了嘌呤、嘧啶的合成。而且培美曲塞可阻断DNA复制、细胞分类所需要各种酶，使细胞分裂停止在S期，从而控制肿瘤细胞的生长〔11〕。有研究发现培美曲塞联合顺铂方案的中位生存时间长于多西他赛方案〔12〕。贝伐单抗是VEGF的人源化单克隆抗体，可内源性竞争、结合VEGF受体，可抑制内皮细胞的有丝分裂，抑制血管的声场，阻断肿瘤血供，从而抑制肿瘤的生长。而且贝伐单抗还可以促进肿瘤血管的正常化，增加了血管的通透性，使组织间隙压降低，可提高化疗药物浓度，从而增强肿瘤杀灭效果〔13，14〕。本研究结果说明，贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂化疗对非小细胞肺癌患者的治疗效果较好，主要是因为3种药物联合可协同增效，促进了抗肿瘤作用。

肿瘤患者化疗治疗后可杀死部分免疫细胞，可抑制免疫功能，同时肿瘤的发生发展与免疫状态有较大关系。在抗肿瘤的免疫中T淋巴细胞是重要的一种免疫细胞，T淋巴细胞可直接杀伤肿瘤细胞，通过激活免疫系统的其他成分来发挥抗肿瘤的效果，T淋巴细胞亚群可反映机体的免疫功能，T淋巴细胞减少可降低机体的免疫功能。Treg是一种具有负向调控作用的细胞，在正常机体内其表达水平较低，而恶性肿瘤可激活Treg细胞，使其成为具有免疫抑制功能的细胞，从而抑制免疫系统，并且促进了肿瘤发展，与肺癌的生成、发展、治疗及预后有较大关系。Treg细胞可抑制CD3+、CD4+细胞，有研究发现在癌症患者中Treg细胞水平升高，数量增多，并且和预后之间呈负相关〔15，16〕。本研究结果说明，贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂治疗后对患者的免疫能力提升效果较显著，延缓肿瘤发展的效果较好，可能是因为贝伐单抗可调节免疫能力，抑制肺癌患者的Treg细胞，有效调节机体的免疫应答，升高T淋巴细胞水平，从而改善免疫功能。金珊珊等〔17〕研究发现，贝伐单抗联合化疗药物治疗非小细胞肺癌后可提高患者的免疫功能，与本研究结果较一致。

Treg细胞是一种免疫抑制细胞之一，可分泌抑制性的细胞因子，如TGF-β、IL-10等，从而抑制效应T细胞活化，本研究结果说明，3种药物联合作用抑制了TGF-β等免疫抑制因子的表达，调节了Th1与Th2的平衡，从而提高了免疫细胞的活性，增强了免疫杀伤的功能。

近年随着对RNA等分子生物学技术的研究，较多研究发现LncRNA有较复杂的生物学功能，在多个方面参与了细胞分化、个体发育调控，并与肿瘤的发生发展有较大关系。有研究发现HOTAIR在多种癌症中表达水平升高，如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、肾癌、卵巢癌等〔18〕。有研究发现，在非小细胞肺癌患者的肿瘤组织中HOTAIR水平高于正常肺组织，而且过表达HOTAIR促进A549细胞迁移、侵袭，并且与耐药性有关〔19〕。谭楠等〔20〕研究发现，在非小细胞肺癌患者肿瘤组织>3 cm时血清中HOTAIR水平显著高于肿瘤组织≤3 cm患者，并且Ⅲ期、Ⅳ期非小细胞肺癌血清中HOTAIR水平高于Ⅰ期、Ⅱ期，说明HOTAIR与肿瘤负荷、TNM分期有较大关系。随着研究的逐渐增多，HOTAIR水平可能成为肺癌早期诊断的指标之一。H19基因长度是kb，定位在11p15，有研究发现lncRNA H19在胃癌、结直肠癌、肾细胞癌、乳腺癌等肿瘤组织中表达水平异常，并且和肿瘤的发生发展、治疗效果、预后有较大关系。有研究发现，在非小细胞肺癌组织中lncRNA H19表达水平升高，并且和肿瘤的分期、大小、淋巴结转移有较大关系〔21,22〕。在非小细胞肺癌组织中lncRNA H19可促进A549的增殖、侵袭和上皮-间质转化〔23〕。本研究结果说明，贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂治疗非小细胞肺癌可显著降低lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平，可能是因为3种药物联合抗肿瘤作用效果较好，从而降低了lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平。本研究结果说明，贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂治疗相对的较安全。

综上，贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂治疗非小细胞肺癌患者的治疗效果较好，并且可改善机体免疫功能，改善细胞因子水平。