HPLC法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚含量

刘木洪，周晓橦，覃亮*

（1.云浮市厚德中药饮片有限公司，广东云浮 527300；2.肇庆学院 食品与制药工程学院，广东肇庆 526061）

小儿氨酚黄那敏颗粒是一种口感好、副作用小的小儿感冒惯用药，有效成分包括马来酸氯苯那敏、人工牛黄、对乙酰氨基酚[1]。马来酸氯苯那敏可治愈流泪、鼻塞、打喷嚏等感冒病状，人工牛黄可消除内热、镇惊、祛痰[2]。氨基经过乙酰化形成的对乙酰氨基酚使用起来更安全[3]，能被人体迅速吸收，对血小板的功能以及凝血效果基本没有影响，不伤害胃肠道和肾，刺激很小且没有肾毒性，临床上常用于医治发热、头痛、痛经等症状[4]。

《中华人民共和国药典（2020年版）》选用紫外-可见分光光度法测定对乙酰氨基酚的含量[5]，该方法专属性不强[6]，不能完全排除对乙酰氨基酚以外其他成分对含量测定的干扰，局限性大。为完善其含量测定的方法，本文选择采用操作简单可行，结果专属性、准确度更高，能快速定性、定量的反相高效液相色谱法来测定对乙酰氨基酚含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

LC-20AT高效液相色谱仪，日本岛津公司；BT125D电子天平，德国Sartorius公司；5800上超声清洗器，必能信超声（上海）有限公司；GM-0.5B无油隔膜真空泵，天津市津腾实验设备有限公司。

1.2 药品与试剂

对乙酰氨基酚（批号：100018-201610，提供给HPLC法测定，使用前无需要干燥，需要在10～30 ℃保存，含量为99.9%），中国食品药品检定研究院；马来酸氯苯那敏（批号：100047-201507，供给HPLC法测定，供给含量测定用，需要遮光，需要在10～30℃保存，含量为99.7%），中国食品药品检定研究院；小儿氨酚黄那敏颗粒：批号200306，江西香雪和明制药有限公司；批号20210201，广东彼迪彼儿康药业有限公司；批号210108，山西同达青苹果药业有限公司；批号201211，黄山精致药业南京同仁堂有限公司；批号210404，贵州省科晖制药厂；批号202102072，吉林万通药业集团梅河药业股份有限公司；批号201110，广东宏远集团药业有限公司。

甲醇，色谱纯，≥99.9%，货号M116118，阿拉丁（上海）生化科技股份有限公司；水为超纯水。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件

选择甲醇∶水=40∶60作为流动相；色谱柱CAPCELL PAK C18MG（250 mm×4.6 mm，5 μm）为固定相；流速1.0 mL/min；进样量20 μL；柱温选择25 ℃；检测波长 275 nm[6]。

1.3.2 溶液配制

对照品溶液的配制：准确称量0.010 82 g对乙酰氨基酚对照品，转移到100 mL容量瓶，用超纯水定容。阴性对照品同法制备。

供试样品溶液的配制：每个厂家取20袋颗粒剂，精密称定，记录每个厂家20袋颗粒剂总重并计算每个厂家供试样品的平均装量，取供试样品倒入研体，用研体研磨成细粉。精密称量小儿氨酚黄那敏颗粒（大约含有10 mg对乙酰氨基酚）转移到100 mL容量瓶，超纯水定容，转移5 mL溶液到50 mL容量瓶并定容，使用续滤液进样。

1.3.3 标准曲线绘制

分别精密量取5 mL 对照品溶液转移到10 mL、20 mL、50 mL、100 mL、500 mL容量瓶，用超纯水定容，以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘标准曲线。

1.3.4 精密度实验

选同一浓度对照品溶液，按1.3.2描述的进行配制溶液，连续进样6次。

1.3.5 供试品含量的测定

精密称量不同厂家不同批号供试样品（约含对乙酰氨基酚10 mg），按照1.3.2描述配制溶液，记下色谱图，用外标法计算对乙酰氨基酚含量。

1.3.6 重复性实验

平行称定6份小儿氨酚黄那敏颗粒（吉林万通药业集团梅河药业股份有限公司，批号202102072），按照1.3.2配制溶液，每份重复进样2次。

1.3.7 稳定性实验

对同一份供试样品，按照1.3.2描述的方法进行溶液配制，分别在放置1 h、6 h、12 h、24、h和48 h后进样2次。

1.3.8 加标回收率实验

对1.3.5项下测出含量的6份供试样品，按照1.3.2方法在50 mL容量瓶中定容。

准确称量0.010 93 g对乙酰氨基酚对照品，转移到20 mL容量瓶，用超纯水定容，移取1 mL到未定容的50 mL容量瓶中，按照供试、对照溶液浓度比1∶1制备。计算出每份对应的含量、平均回收率、RSD值。

2 结果与分析

2.1 线性实验

实验结果见图1，对照品溶液浓度在1.080 92～54.045 90 μg/mL，对乙酰氨基酚对照品峰面积与其浓度呈现直线型线性关系，线性方程为Y=14 578.970 57X-2 030.228 12，R2=0.999 979 3。

图1 对乙酰氨基酚对照品线性曲线色谱图

2.2 精密度实验

实验结果见图2，对照品溶液保留时间为3.667～3.680 min，相应峰面积在155 070～156 595，浓度在10.675～10.780 μg/mL，测定浓度较接近，可得精密度RSD=0.258 1%（n=6），说明选择使用的色谱系统连续进样时响应值的精密度较好。

图2 对乙酰氨基酚对照品精密度色谱图

2.3 供试样品的含量

对不同厂家颗粒剂中对乙酰氨基酚含量进行测定，对乙酰氨基酚平均含量在98.253 5%～101.762 1%（见表1），差距较小，表明生产厂家不同，不影响含量测定，因此本文选择万通药业生产的颗粒剂作为相关实验的供试样品。

表1 不同厂家供试样品中的对乙酰氨基酚含量

在同一保留时间内，采用同一色谱系统分离得到同一种物质，即对乙酰氨基酚，其含量分别为101.155 9%、100.622 7%、99.891 0%和100.090 6%（见表2），表明供试样品含量稳定，可进行供试样品相关实验。

2.4 重复性实验

由表3可知，保留时间在3.690～3.699 min时，测得供试品浓度在10.286～10.694 μg/mL，对乙酰氨基酚含量为99.289 2%～101.731 3%，RSD值为0.777 6%，实验重复性较好，可进行加标回收率实验。

表3 供试样品中的对乙酰氨基酚重复性含量

2.5 稳定性实验

由表4可知，保留时间在3.692～3.702 min时，测得供试样品中对乙酰氨基酚含量在100.572 7%～102.521 2%，平均含量为101.447 1%，含量RSD值为0.536 4%。表明在48 h内，供试样品的对乙酰氨基酚含量检测数据变化较小，稳定性较好。

表4 供试样品稳定性实验结果

2.6 加标回收率实验

由表5可知，保留时间在3.685～3.705 min时，供试样品的加标回收率在100.576 3%～104.505 2%，平均回收率为102.573 6%，RSD值为1.168 9%，符合平均回收率数据要求的92%～105%，RSD值小于1.5[5]。表明该方法对对乙酰氨基酚含量测定产生影响较小，操作简单可行。

表5 供试样品的加标回收率

3 结论

HPLC法专属性良好，精密度、稳定性、重复性高，操作简单便捷，可作为小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚含量测定的检测新方法。