肃南奶牛乳房炎主要致病菌的分离与鉴定

王娅波

（甘肃省肃南县牧业区划办公室，甘肃 肃南 734400）

奶牛乳房炎（bovine mastitis,BM）是一种因机械性刺激、病原微生物侵入及化学物理性损伤等因素引起的奶牛乳房实质和间质的炎症综合性疾病[1-2]。不同国家和地区奶牛乳房炎的发病率不同。在我国，因不同地区饲养管理水平差异，导致奶牛隐性乳房炎的发病率为13.41%～71.67%[3-4]。奶牛乳房炎根据奶牛乳汁可否检出病原菌和乳汁有无肉眼可见变化情况分为临床型乳房炎和亚临床型乳房炎（又名隐性乳房炎），同时，也可根据奶牛感染的细菌类型将其分为传染性乳房炎和环境性乳房炎[5-6]。

临床型乳房炎凭借肉眼观察乳房和乳汁的变化即可判定，其中轻症乳房炎表现为奶牛乳房肿胀，疼痛或疼痛不明显，乳汁稀薄、清淡，最初挤出的乳汁有絮状物，食欲和体温可能都正常，但产奶量略有下降[1]。患有重症乳房炎的奶牛则表现为一个或多个乳区患病，患病乳区呈不同程度充血、肿胀、温热和疼痛，有的还会出现乳头皮肤块状和大片坏死，产乳量减少或停止，乳汁稀薄并混有脓块，同时还会出现精神不振、食欲减退、心跳加快及全身寒战，体温最高可上升到41℃以上，严重时会出现眼球下陷、水泻、大便恶臭、体力衰竭以及卧地不起，直至因败血症而亡[1]。亚临床型乳房炎因症状轻微，常被人们忽视，但是该病不仅影响患病牛的产奶量和乳品质，还会延长产后发情和妊娠时间，而且容易在牛群中传播，给奶牛业造成的损失比显性乳房炎更大。亚临床型乳房炎病牛的乳腺组织眼观上和正常组织虽无明显差别，但是其奶样中的许多营养成分和理化性质却已经发生了改变，必须借助外界设备加以确诊[7]。通常以奶样中体细胞数量上升作为确诊的主要依据，当牛奶奶样中的体细胞数超过30万/mL时就可以判断为隐性乳房炎[8]，或者在奶样中分离出细菌也可以作为确诊依据。

奶牛乳房炎的诱发原因复杂，包括机械组织损伤、奶牛自身原因、饲养环境管理和病原微生物感染等，其中病原微生物是诱发该病最主要的原因，也是长期影响奶牛场经济效益、导致奶牛淘汰率居高不下的主要原因。大部分微生物均能导致奶牛乳房炎，其中细菌侵入奶牛机体是引起奶牛乳房炎发生的主要原因[9-10]，主要致病菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌及大肠杆菌等。为了解甘肃肃南县奶牛乳房炎的主要病原菌，本试验从肃南县奶牛养殖场及农户家中采集奶样，用北京奶牛乳房炎诊断液（BMT）检测出阳性样品进行致病菌的分离和鉴定，以便更好地为当地奶牛乳房炎的防控治疗提供针对性依据。

1 材料与方法

1.1 奶样的采集与检测

选择甘肃肃南5个规模奶牛养殖场和13户奶牛散养农户进行奶样采集。其中，奶牛场每隔一段时间会做隐性乳房炎检测，并将阳性奶牛单独隔离。本试验样品来源于养殖场隔离区奶牛。

采集样品前先对采集者本人的双手和采集器械进行消毒，然后用1%高锰酸钾对奶牛乳头周围进行擦洗消毒，并用纸巾擦干。采集奶样时先将前3把奶弃之，每个乳区各取2 mL乳汁，分别加入乳房炎检验盘中，再分别加入1∶4倍稀释的BMT诊断液2 mL，轻轻摇晃10～30 s后判定结果并记录。将BMT检测出的阳性奶样保存至放有冰袋的采样箱中，迅速送回实验室进行样品中细菌的分离鉴定[11]。

1.2 主要致病菌的分离

主要致病菌的分离方法参考文献[11-12]。

1.3 主要致病菌的药敏试验

将已经纯化后的细菌吸取100 μL接种于3 mL的BHI培养液体中培养12 h，再根据甘肃肃南奶牛场和基层兽医的常用药品种类选择相应的药敏试纸片进行试验。使用Mueller-Hinton（MH）肉汤培养基配成约4 mm厚的平板，将过夜培养好的细菌使用生理盐水稀释至浓度1.5×108CFU/mL。用棉签蘸取菌液后均匀涂布在平板上，用镊子夹取药敏试纸片贴在平板上，随后将贴好药敏试纸片的平板放进培养箱中培养12～24 h。

1.4 结果判定

BMT检测判定方法如表1。根据药敏试验标准判断细菌的耐药情况如表2。

表1 BMT法结果判定

表2 药敏试验抑菌圈直径判定标准

2 结果与分析

2.1 样品细菌分离结果

运用奶牛隐性乳房炎快速诊断液（BMT）共检测210份奶样，得到77份乳房炎阳性奶样。从77份奶样当中分离出共计118株菌。由表3可知，其中埃希氏菌属39株，分离率达到33.05%（39/118）；葡萄球菌属34株，分离率 28.81%（34/118）；链球菌属 24株，分离率 20.34%（24/118）；肠球菌属 12株，分离率 10.17%（12/118）；克雷伯氏菌属 9 株，分离率 7.63%（9/118）。

表3 样品中主要病原菌分离株鉴定结果

2.2 主要致病菌药敏试验结果

表4为药敏试验结果，可见甘肃肃南奶牛乳房炎主要致病菌均存在不同程度的耐药性。

表4 主要致病菌药敏结果

3 讨论

奶牛乳房炎是导致甘肃肃南奶牛淘汰率高、经济损失严重的重要因素之一。造成奶牛乳房炎的原因主要是致病菌感染，致病菌种类较多。因此，在治疗时应根据该场奶牛乳房炎中感染细菌的优势菌群进行治疗，才可以尽可能减少经济损失。

本试验通过对甘肃肃南奶牛乳房炎细菌的分离和鉴定，发现该地区患病奶牛乳房炎的主要致病菌以埃希氏菌属、葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属以及克雷伯氏菌属为主，而且均存在不同程度的耐药性，其主要原因是抗生素滥用。

4 结论

在实际生产生活中，应当减少频繁单一地使用广谱抗生素，以避免细菌耐药情况的出现，定期给奶牛做体检，并对发病牛的病原进行分离和鉴定。选择联合用药或运用抗生素替代疗法（中药、激素等）治疗奶牛乳房炎，不仅能够减少细菌耐药性的产生，还能够提高疾病的治愈率。