粪便钙卫蛋白检测在腹泻鉴别诊断中的意义

于溪 陈钟鸣 郑佳玲

作者单位：盐城市第一人民医院检验科，江苏 盐城 224001

腹泻属于临床一类常见消化道疾病，指的是每日排便在3 次以上，排粪量在200 g/d 以上，粪便质地稀薄，含水量在85%以上的情况[1]。结合病程长短能划分成急性、慢性腹泻两类，其中前者主要原因为肠道感染，后者原因比较复杂，多为结肠或者小肠疾病引起[2]。腹泻发生后未及时进行诊断和治疗，能影响机体的营养状态，导致肠神经紊乱，对胃肠激素分泌产生不利影响[3]。腹泻在临床上易和其他的肠道疾病相混淆，如腹泻型肠易激综合征（diarrhea type of irritable bowel syndrome，D-IBS）以及大肠癌等，因此，积极探索出特异性检测指标对鉴别诊断腹泻和制定正确治疗方案有着重要意义。粪便钙卫蛋白（faecal calprotein，FCP）属于一类炎症活动性的标志物，来源于巨噬细胞以及中性粒细胞，能和钙离子相结合，于粪便当中水平较为稳定[4]。以往有关FCP 的研究多集中在炎症性肠病的活动性判断中，有关其在腹泻鉴别诊断中的作用临床报道较少。为此，文章对2021 年6 月—2022 年5 月盐城市第一人民医院就诊的单纯腹泻患者总共600 例的临床资料开展回顾性分析，总结FCP 检测用于腹泻鉴别诊断中的意义，旨在为鉴别诊断腹泻和制定后续治疗方案提供参考依据，具体内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年6 月—2022 年5 月在盐城市第一人民医院就诊的600 例单纯腹泻患者设为腹泻组，其中包含男性356 例，女性244 例；年龄范围在18 ～65 岁，平均（40.35±5.36）岁；文化程度：初中及以下365 例，高中及以上235 例。选取同时间段盐城市第一人民医院收治的30 例大肠癌患者设为大肠癌组，其中包含男性18 例，女性12 例；年龄范围在18 ～64 岁，平均（40.26±5.48）岁；文化程度：初中及以下18 例，高中及以上12 例。30 例D-IBS 患者设为D-IBS 组，其中包含男性19 例，女性11 例；年龄范围在20 ～60 岁，平均（40.76±5.02）岁；文化程度：初中或以下17 例，高中或以上13 例。30 例健康体检者设为对照组，其中包含男性18例，女性12 例；年龄范围在21 ～68 岁，平均（41.02±5.36）岁；文化程度：初中及以下19 例，高中及以上11 例。各组性别、年龄及例数等一般资料相比差异无统计学意义（P＞0.05），数据之间具有可比性。本研究经过医院医学伦理委员会批准，同时取得研究对象知情同意。

纳入标准：（1）单纯腹泻组均结合X 线钡剂灌肠或者肠镜确诊为单纯腹泻，大肠癌、D-IBS 组均经临床检查及病理学检查确诊，对照组为经体检无任何异常者。（2）年龄不低于18 岁，依从性佳。（3）临床资料无任何缺失。

排除标准：（1）存在其他脏器严重者。（2）存在消化道肿瘤者。（3）存在认知障碍、精神病等无法配合完成检查者。（4）长期采取非甾体抗炎药者。（5）处在妊娠或者哺乳阶段女性。（6）酗酒和药物成瘾者。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器 南京美宁康诚生物科技有限公司生产的FCP 测定试剂盒、样本采集器以及Mokosensor-A300 胶体金免疫层析分析仪。

1.2.2 检测方法 所有患者均接受FCP 检测，方法如下：在结肠镜检查1 周以内或者术前1 周以内进行10 ～20 g粪便标本留取后送往检测，对照组同样留取10 ～20 g 粪便标本后送检，采取专用采集管进行标本采集，若为水样便，采取采集器吸管吸取10 μL，后插入2.5 mL 标本稀释液内混匀。若为其他类型粪便，将采集器采便棒插入粪便至刻度线，轻轻旋转采集棒蘸取粪便，后插入样本稀释液混匀，在1 h 之内送往实验室内同时放在2 ～8℃的冰箱中保存，在48 h 以内集中抽提，检测前将留存的粪便放在室温状态下平衡解冻，采取一次性取样环挑取50 ～100 mg 的粪便，放入带螺口帽聚丙烯管15 mL，将取样环一同放入后称重，结合质量/容积为1/49 的比例将抽提液加入，放在上海熙扬仪器有限公司生产的YMT-2500 型多管涡旋混合器内充分摇动30 min，将样本混匀之后选取1.5 mL 放在2 mL 的离心管内，经北京汉达森机械技术有限公司生产的MIKRO220 型微量离心机开展5 min 离心处理，后选择1 mL 上清液放在-50℃的冰箱内备用。采取瑞士Bnhl-mann 公司提供FCP 检测试剂盒和酶联免疫吸附方法开展检测，操作者严格依据说明书中有关内容开展操作。将提取液放在室温状态下平衡解冻，采取1 ∶50 的比例稀释，后放于室温下孵育，采取常规酶联免疫吸附方法。测定方法：设置酶标仪成450 nm 开展检测，标准品包含5 个不同的质量浓度，分别为600、300、100、30、10 μg/g，总共开展样本检测2 次，浓度最高标准液吸光度值是2.397 和2.284，采取四参数法进行计算获得标准曲线，采取1 ∶50 稀释样本若超出了标准曲线的范围但未被检测出，应采取缓冲液开展进一步稀释处理，并重新检测，直到检测出结果为止，稀释的倍数计算到最终结果当中，单次样本检测需要重新建立起当次标准曲线。撕开检测卡外包装铝箔袋，取出检测卡待用，滴入60 μL 稀释过的样本至检测卡加样孔中，开始反应同时开始计时10 min。结束计时后，采取胶体金免疫层析分析仪对测定结果进行分析。结束计时后应在5 min 内读取结果，5 min 内未读取结果评定成无效，需要重新开展试验。本方法测定的FCP 可报告范围在30 ～600 μg/g，当结果低于线性范围下限时结果报告为＜30 μg/g，当结果超过线性范围上限时结果报告为＞600 μg/g，检测显示FCP 水平＞50 μg/g 代表检测结果为阳性[5]。

1.3 观察指标

比较单纯腹泻组与大肠癌组、D-IBS 组和对照组的FCP 水平及阳性率差异。FCP 阳性率=FCP 阳性例数/总例数×100%。

1.4 统计学方法

经SPSS 23.0 统计软件处理数据，计数资料以n（%）表示，行χ2检验；计量资料以 （±s）代表，行t检验，多组间计量资料比较采取方差分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

单纯腹泻组的FCP 水平及阳性率远远高于大肠癌组，差异有统计学意义（t=7.572、χ2=4.082，P＜0.05），单纯腹泻组的FCP 水平及阳性率高于D-IBS 组，差异有统计学意义（t=20.386、χ2=205.242，P＜0.05）；单纯腹泻组的FCP水平及阳性率高于对照组，差异有统计学意义，（t=20.783、χ2=233.454，P＜0.05），见表1。

表1 四组FCP 水平及阳性率相比结果

3 讨论

腹泻是多病原以及多种因素所致的肠道疾病，主要表现是排便次数，及频率增加、大便不成形等，会使患者产生程度不一的水电解质和酸碱失衡，进而影响其身体健康[6-7]。临床治疗期间，多以继续进食、维持营养以及合理调配为主要原则，同时迅速纠正患者的水电解质紊乱等，从而缓解有关症状[8]。腹泻症状也可出现在其他肠道疾病患者中，如腹泻型肠易激综合征、大肠癌、消化性溃疡以及克罗恩病等，不同疾病的治疗方式存在较大差异。因此，做好腹泻和其他肠道疾病的鉴别诊断工作意义重大。

以往临床多结合临床症状、发病季节、病史以及大便性状等方面开展判断，但诊断准确度不高，会直接影响到后续治疗方案制定，存在一定的局限性，需要积极探索出其他更为高效的诊断指标[9]。FCP 的来源主要为中性粒细胞和巨噬细胞，可经鳖合锌离子而具备耐热性，并和钙离子相结合以抗蛋白酶活性，于肠腔、外界环境当中能长期维持在一个相对稳定的状态，不被酶、细菌破坏，不会随着粪便降解而被水解，样本放置于室温下5 d 不会导致其浓度显著丢失[10]。据有关研究显示，粪便内FCP 含量高达血浆内FCP 含量的6 倍左右[11]，检测粪便中的炎症标志物较血清标志物可以更敏感反映出消化道的炎症程度。除此之外，FCP 具备调节免疫、抗微生物有关活性、炎症反应中调节蛋白等生物保护功能[12]。

舒利琼等[13]发现，FCP 在克罗恩病、溃疡性结肠炎鉴别诊断中具有较高价值。葛秋霞等[14]发现，FCP 在炎症性肠病、功能性肠病区分中的准确度较高。但有关FCP 在腹泻鉴别诊断中的研究较少。本文研究结果显示：单纯腹泻组的FCP 水平及阳性率远远高于大肠癌组、D-IBS 组和对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），这说明FCP 能协助临床鉴别诊断单纯腹泻和大肠癌、D-IBS 等疾病。单纯腹泻患者FCP 水平上升的原因可能是病原体到达肠道后于小肠内不断繁殖，同时黏附在黏膜中释放出致病性的肠毒素，进而在肠道内引发分泌性反应，最终造成腹泻发生，且借助其侵袭能力能直接入侵肠上皮细胞，导致黏膜处在充血和水肿状态，促进中性粒细胞浸润以及炎性介质渗出和溃疡产生，中性粒细胞经病变黏膜不断前移到肠腔中促使FCP 水平上升，由粪便内排出体外。D-IBS 是肠功能紊乱使得肠道动力功能出现障碍，进而引发的腹泻，无肠黏膜炎症以及组织受损，不存在中性粒细胞浸润，不会导致FCP 水平上升。大肠癌患者肿瘤附近存在炎症细胞浸润，也能观察到粪便FCP 水平上升的情况存在。笔者认为，FCP 检测只能作为单纯腹泻、大肠癌、D-IBS 等疾病鉴别诊断中的一项辅助指标，疾病确诊仍需依赖于X 线钡剂灌肠或者肠镜、病理学检查等。既往学者将FCP 水平设定成50 μg/g 当作临界值以评定炎症肠病患者活动性，具备较高的敏感度和特异度[15]。本次研究中将FCP 的阳性临界值同样设定成50 μg/g。文章中体现了《成人急性感染性腹泻诊疗专家共识》[16]的临床参考标准。

综上所述，FCP 检测作为一类无创、迅速且简便的检测方式，能为临床诊断单纯腹泻和大肠癌、D-IBS 等疾病提供重要的参考依据，有助于临床医师制定后续治疗方案。但此次研究中依旧还有不足之处存在，如文中未对FCP 在腹泻和克罗恩病、溃疡性结肠炎鉴别诊断中的作用开展分析，未对FCP 的诊断效能如准确度、敏感度和特异度等指标进行分析，且未对FCP鉴别诊断不同病原所致腹泻的价值进行统计，得出的结果依旧有局限性，还需在日后研究中加以完善，进一步证实上述结论，指导临床实践。