妊娠期糖尿病并发巨大儿产妇胎盘质量、胎盘组织超微结构及自噬相关信号通路变化

樊炳娟 王 丹 曲晓芹

河南省许昌市中心医院(461000)

妊娠糖尿病(GDM)是一种糖代谢异常疾病，发生机制尚未完全明确，并发巨大儿发生率较高[1]。近年GDM临床治疗现状得到明显改善，但巨大儿控制效果仍有待提升[2-3]。自噬相关信号通路研究是GDM并发巨大儿发生发展的一个新探究方向[4-5]。胎盘是妊娠母体与胎儿物质和能量交换场所，胎盘组织超微结构改变是引起不良妊娠结局的主要原因[6-7]。关于GDM并发巨大儿胎盘组织超微结构及自噬相关信号通路改变之间关系尚处于探索中，未能完全明确。本文选择GDM并发巨大儿患者作为研究对象，分析其胎盘组织超微结构与自噬相关信号通路的可能变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年10月-2021年2月本院诊治的GDM并发巨大儿患者98例临床资料(观察组)。纳入标准：①符合《妇产科》中关于巨大儿及GDM诊断标准；②胎盘完整；①单胎。排除标准：①合并其他代谢性疾病；②患恶性肿瘤；③产后大出血。同期产前检查诊断为单纯GDM患者98例为对照组，健康产妇98例为健康组。本研究经医院伦理委员会批准，患者和家属知情同意。

1.2 检测方法

1.2.1胎盘组织超微结构观察使用精密仪检测3组胎盘质量和胎盘容积。在分娩2h内检查产妇胎盘。获得胎盘组织使用2.5%戊二醛先行短暂固定后切片，4%戊二醛、1%锇酸双固定，30%、50%、70%、80%、95%无水乙醇梯度脱水，环氧树脂包埋，半薄切片定位，超薄切片后柠檬酸铅、醋酸双氧铀双染色。使用透视镜观察胎盘组织超微结构，参考健康组产妇胎盘微结构进行判断是否出现改变。

1.2.2酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测AMPKαRNA表达量。引物为5'-ACTGTACCAGGTCATCAGTACACC-3'；5'-CCACCATATGCCTGTGACAA-3'。剪刀剪取50～100mg组织置离心管内，生理盐水冲洗，震动，反复冲洗3次直至透明，离心处理后卵育5min，使用核蛋白分解，再次离心处理，向沉淀RNA中加入1ml 75%乙醇溶液，轻轻混匀。高速冷冻离心5min，去上清，逆转录反应，行PCR扩增，Western blot测定AMPKαRNA表达。

1.3 评价指标

比较3组胎盘质量、胎盘容积、胎盘组织超微结构改变情况、AMPKαRNA表达量。分析胎盘组织超微结构改变与AMPKαRNA表达量关系。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 基本情况

观察组年龄(36.2±3.1)岁(24～44岁)，孕周(39.0±0.5)周(32～41周)；对照组年龄(36.5±2.2)岁(23岁～43岁)，孕周(39.1±0.4)周(32～41周)；健康组年龄(36.4±2.2)岁(25岁～42岁)，孕周(39.2±0.4)周(32～41周)。3组年龄及孕周无差异(P>0.05)。

2.2 胎盘质量、胎盘容积

胎盘质量观察组、对照组、健康组依次降低(均P <0.001)，胎盘容积3组无差异(P>0.05)，见表1。

表1 各组胎盘质量、胎盘容积比较

2.3 胎盘组织超微结构改变情况

胎盘组织超微结构改变率观察组(66.3%，65/98)、对照组(29.6%，29/98)、健康组(2.1%，2/98)依次降低(χ2=92.710，P<0.001)。

2.4 AMPKαRNA表达量

AMPKαRNA表达量，观察组(0.31±0.02)、对照组(0.41±0.08)、健康组(0.49±0.03)依次升高(P<0.05)；健康组胎盘组织超微结构改变者表达量(0.47±0.04)与未改变者(0.51±0.06)无差异，而对照组及观察组胎盘组织超微结构改变者表达量(0.42±0.01、0.33±0.04)均低于未改变者(0.34±0.07、0.24±0.06)(均P<0.001)。

2.5 胎盘质量、胎盘组织超微结构改变对AMPKαRNA表达量的影响

分析发现，胎盘质量越大(r=-0.772，P<0.001)、胎盘组织超微结构改变越明显(r=-0.560，P<0.001)均会影响AMPKαRNA的表达，呈负相关(P<0.05)。

3 讨论

GDM主要表现为不同程度的葡萄糖耐量异常[8-9]。GDM并发巨大儿出现与胎盘组织糖及脂质代谢信号传导通路异常关系密切[10-11]。胎盘为胎儿生长及发育提供所需营养物质。葡萄糖是胎儿代谢的主要能量之一，母体葡萄糖对胎儿生长发育起到至关重要作用[12-13]。通过扩散方式进入细胞膜内。当母体葡萄糖含量增加时胎儿也能吸收到更多的葡萄糖，从而增加巨大儿发生风险[14-16]。脂质代谢异常是影响胎儿发育的第二大因素。胎盘组织具有转运脂肪酸的能力，脂肪酸过多进入胎儿血液循环中，增加了胎儿蛋白质和脂肪合成数量，引起巨大儿。胎盘绒毛表层分布合体滋养细胞，各细胞间排列较紊乱，细胞核无特定性状，大小分布不均匀[17-18]。健康产妇的胎盘组织超微结构清晰、完整，绒毛干支无断裂、破损等，滋养细胞发育良好，游离面形态规则；粗面内质网和线粒体分布较广泛，细胞核性状呈长方形[19]。随着GDM发生发展，胎盘吸收了过多的脂肪和葡萄糖，使得胎盘组织超微结构主要表现在滋养细胞增加、绒毛干支排列混乱[20-21]。本文分析发现，胎盘质量越大、胎盘组织超微结构改变越明显将影响AMPKαRNA表达量，呈负相关。目前关于自噬相关信号通路研究较多。有报道发现[22-23]，自噬相关信号通路参与糖尿病肾病发生发展。自噬主要通过溶酶途径降解和循环利用细胞内蛋白质，去除受损的细胞器以维持细胞的稳定性和完整性。因此，分析自噬相关信号通路有利于判断机体细胞完整性。本文显示，AMPKαRNA表达量可以反映自噬相关信号通路情况，其表达量增加提示自噬相关信号通路较好，含量下降表示自噬相关信号通路受损。

对GDM并发巨大儿胎盘组织超微结构对自噬相关信号通路的差异性改变影响进行分析发现，观察组患者的胎盘质量最大，高于对照组和健康组，且胎盘组织超微结构改变率显著增加。胎盘对胎儿生长发育影响明显，胎盘质量越大，表明胎盘对脂肪和葡萄糖吸收越多，胎儿能吸收到更多的脂肪和葡萄糖，增加巨大儿发生率。GDM并发巨大儿产妇胎盘组织超微结构也会随之改变，主要表现为绒毛发育较多，绒毛分支排列紊乱，胎盘质量增加，与米阳等[24]研究结果一致。观察组AMPKαRNA表达量在3组中最低，且胎盘组织超微结构改变的产妇AMPKαRNA表达量低于未改变产妇。分析认为：AMPKαRNA表达量下降说明自噬能力下降，相关信号通路未能及时清除受损细胞器，从而导致细胞内环境紊乱加剧，最终导致GDM并发巨大儿发生发展。

综上所述，GDM并发巨大儿患者的胎盘组织超微结构发生改变且影响了自噬相关信号通路，临床需密切关注患者胎盘质量及胎盘组织超微结构改变情况。