子宫内膜异位症不孕患者异位内膜组织PAQR3、CAMS、HIF-1α表达及与生育指数关系

陈晓霞 权丽丽

河南省三门峡市中心医院(472000)

子宫内膜异位症(EMs)发病率为10%～15%，患者多伴有不孕症，不孕率达40%[1-2]。EMs是一种具有恶性生物学行为的良性妇科疾患，大量研究证实，新生血管的形成为EMs的发生、发展奠定了基础关系密切[3]，多种恶性肿瘤及癌前病变组织中而现今缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)已被诸多学者证实其在多种恶性肿瘤及癌前病变中过度表达高表达，因此临床普遍认为HIF-1α是肿瘤血管生成环节中的形成过程中心启动分子子[4]。EMs的确切发病机制尚不清楚，但多数学者认可子宫内密种植学说。黏附作用是EMs发生过程中的一个重要环节，是通过一系列位于细胞表面的细胞黏附分子(CAMS)来完成[5]。孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)在多种肿瘤中可结合丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-Raf与C-Raf，从而抑制丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)信号通路高尔基体上的膜蛋白，进而调节肿瘤相关生物学行为[6]。本研究检测EMs不孕患者PAQR3、CAMs、HIF-1α表达情况，并探究与EMs不孕的可能关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年4月-2020年4月就诊于本院、术后经病理检查证实为EMs合并不孕患者42例，年龄(39.3±5.2)岁(28～50岁)，取其异位内膜组织作为异位内膜组，依据美国生殖医学会(ASRM)分期分为Ⅰ期10例、Ⅱ期15例、Ⅲ期10例、Ⅳ期7例。选择同期收治的EMs患者30例为在位内膜组，行切开手术或刮宫或切开手术30例EMs患者收集手术时获得在位内膜作为在位内膜组，年龄(41.3±4.7)岁(27～53岁)；20例另选择同期因子宫肌瘤患者为正常内膜组，行子宫切除术的20例正常子宫内膜作为正常内膜组，年龄(39.6±5.1)岁(28～49岁)。3组对象月经周期规律稳定，均处于月经增生期，在术前3个月均未应用激素治疗，均不存在内分泌性疾病以及内外科相关疾病。本研究经伦理委员会审批。患者签署知情同意书。

1.2 PAQR3、CAMs与HIF-1α检测

收集内膜组织，部分经液氮处理30 min后置-80℃保存待用，另一部分经10%浓度甲醛固定，石蜡包埋，5 μm连续切片切片，常规HE染色；免疫组织化学染色分析。小鼠抗人单克隆抗体(Abcam公司)。①PAQR3阳性：为细胞浆内可见浅紫蓝色颗粒，阳性细胞数≤10%、≤30%、≤70%和>70%分别记0、1、2、3分；阳性着色强染色为细胞浆内可见可观察到浅紫蓝色颗粒状染色颗粒且颜色颜色与背景色对比明显明显高于背景底色、细胞浆内见可观察到较紫蓝色颗粒状染色颗粒、细胞浆内可以观察到有大量紫蓝色颗粒状染色情况时需要依次分别记记为1、2、3分；阳性细胞数评分与阳性细胞染色评分上述两种记分相加为最终结果，≥3分为阳性，否则为阴性。②CAMs阳性：以腺上皮细胞胞浆或者胞膜中检出CD44表达为标准，即依据上述位置出现颜色，无色、淡黄、黄色、深黄色分别赋0、1、2、3分；染色范围<5%、5%～20%、20%～50%、>50%分别赋0、1、2、3分。两记分相加，≥2分为阳性，否则为阴性。③HIF-1α阳性：着色弱但且染色与阴性对照组强明显强于阴性对照者、染色着色情况清晰、染色着色程度强等依次分别记为1、2、3分；阳性细胞与切片中总细胞数 <10%、10%～50%，51%～80%，>80%分别赋0、1、2、3分。以上两项评分相加，≥3分为阳性，否则为阴性。

1.3 EMs生育指数(EFI)

利用EFI评估EMs合并不孕患者腹腔镜手术分期后自然妊娠情况，评分越高妊娠概率越高。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 不同内膜组织中 PAQR3、CD44、HIF-1α表达

异位内膜组织中PAQR3、HIF-1α、CD44蛋白表达阳性率均低于在位内膜组织及正常内膜组织(均P<0.05)，但不同分期患者异位内膜组织各蛋白表达无差异(P>0.05)。见表1。

表1 各蛋白在不同内膜组织中阳性表达比较[例(%)]

2.2 PAQR3、CD44、HIF-1α表达与患者EFI评分

异位内膜组患者，PAQR3表达阳性者EFI评分(7.26±1.11分)均高于表达阴性者(4.03±0.82分)，CD44、HIF-1α表达阳性者EFI评分(6.00±1.03分、5.55±0.76分)均低于表达阴性者(9.26±0.47分、8.82±0.64分)(t=10.676、6.922、9.164，均P=0.000)。

2.3 PAQR3、CD44以及HIF-1α表达情况与EMs不孕的相关性

PAQR3与EFI评分呈正相关(r=0.312，P<0.05)，CD44、HIF-1α均与EFI评分呈负相关(r=-0.354、-0.305，均P<0.05)。

3 讨论

现今EMs公认的病理机理主要有经血逆流、淋巴及静脉播散、免疫内分泌、遗传等学说[7]。女性月经周期中存在低氧状况，子宫内膜功能层的腺细胞和基质细胞中HIF-1α高表达导致细胞大量表达缺氧诱导细胞因子，进而调节靶基因表达情况，使细胞对于缺氧耐受能力提高[8]。本研究结果显示，相对于正常内膜组，发现HIF-1α蛋白在异位内膜组和及在位内膜组组织中HIF-1α蛋白的表达阳性率较高高于正常子宫内膜组，提示HIF-1α在EMs不孕的发生发展中存在某种作用。EMs疾病涉及多种基因的变异与异常表达，目前认为与子宫内膜细胞异位种植有关的典型生物学因子为CAMS，CAMS为一类细胞膜表面糖蛋白，在组织间黏附中起介导作用，目前研究证实CAMS与肿瘤的侵袭、种植以及转移有关[9]。EMs虽属于良性疾病，但能通过细胞增殖作用、生成新生血管、造成局部侵犯和破坏[10]。作为CAMS一员的CD44，能够与透明质酸结合，维持组织或器官的结构，促进肿瘤细胞浸润和介导肿瘤细胞迁移[11]。本研究中CD44在异位内膜组中的表达阳性率高于正常内膜组，表明CD44在异位内膜有更强的黏附作用，增加了细胞游走性，加快细胞迁移，并能够逃过腹腔中自然杀伤细胞的作用，继而导致腹膜的侵袭并种植，参与EMs进展。吴水梅等[12]研究证实，PAQR3在多种恶性肿瘤中具有明显的抑癌作用。PAQR3主要通过将Raf-1激酶锚定在高尔基体上，阻断其与上下游信号分子结合，继而阻断 Ras/Raf/MEK/ERK信号联级通路，抑制使机体肿瘤细胞病灶中细胞增殖、以及迁移过程被抑制与转化[13]；另外，PAQR3可发挥明显抑癌作用，作用机制为PAQR3可诱使机体能够抑制血管内皮生长因子自分泌信号通路激活被抑制，进而负调控由抑制对应信号通路血管内皮生长因子介导的参与血管生成，进而抑制肿瘤细胞增殖血管内皮细胞及血管生成，从而发挥抑癌作用[14]。

本研究中，PAQR3在异位内膜组中的表达阳性率均低于另外两组，EMs发生风险相对较高。另外，本研究还对PAQR3、CAMs以及HIF-1α与EMs不孕的关系进行探讨，以EFI评分作为不孕概率的评价指标，发现PAQR3、CD44、HIF-1α表达阳性患者EFI评分均高于或低于表达阴性患者，且PAQR3、CD44、HIF-1α均与EFI评分相关，提示PAQR3表达阳性率越高，EMs患者妊娠几率越高，CD44以及HIF-1α表达阳性率越高患者不孕的几率越大，三者可共同反映EMs患者的不孕与妊娠的概率；另外，不同分期EMs合并不孕患者PAQR3、CD44、HIF-1α表达均未见差异，可能与本研究纳入的样本量较少有关，需进一步扩大样本量再分析。

综上所述，EMs合并不孕患者内膜组织PAQR3、CAMs、HIF-1α均表达异常，提示3者可能促进了EMs的发生，进而导致患者不孕；EMs患者PAQRS表达阳性率越高妊娠几率越高，CD44、HIF-1α表达阳性率越高患者不孕的几率越大，三者可共同反映EMs患者的不孕与妊娠概率情况。