眉山市7135例孕早期孕妇红细胞叶酸及血清维生素B12检测结果分析及正常参考值建立

罗 艳 刘绪义 秦 琦 戴 凯 刘 玲

四川省眉山市妇幼保健院(620010)

叶酸和维生素B12是妊娠期女性不可或缺的维生素，共同参与了机体DNA、氨基酸、蛋白质、磷脂的合成和代谢，与细胞分裂也密切相关[1-3]。孕早期妇女缺乏叶酸会大大增加胎儿出现唇腭裂、21-三体综合征、神经管畸形概率[1,4-5]；维生素B12缺乏会引起孕妇发生巨幼细胞性贫血及婴儿神经系统异常[6-7]。大量研究发现，叶酸和维生素B12缺乏与妊娠期高血糖、高血压、贫血、流产、早产密切相关[8-12]。我国经济发达的东莞地区，孕妇叶酸缺乏率为6.1%，维生素B12缺乏率仍高达10.4%，随着孕周增加叶酸、维生素B12缺乏率升高[2]。目前采用罗氏化学发光法检测机体维生素B12水平，其参考范围仅为欧洲和美国人群的研究结果，缺少适用于中国人群的参考值范围，尤其缺少对孕早期孕妇的研究数据。我国幅员辽阔，各地区差异很大。因此，有必要在统一检测方法的基础上，建立适用于本地区孕妇的红细胞叶酸和维生素B12的正常参考范围，这也是精准医疗的具体实施。本研究通过测定眉山地区孕早期(8～12周)孕妇的红细胞叶酸和血清维生素B12水平，以了解本地区孕妇营养状况并建立参考范围，为本地区开展孕期管理提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年1月-2021年2月在本院产前检查的孕早期(8～12周)孕妇红细胞叶酸及血清维生素B12检测结果。纳入标准：同意签署知情同意书并愿意接受检测，年龄18～45岁。排除标准：胃肠切除手术史、患严重消化系统疾病、肝肾功能不全；患有甲状腺疾病、糖尿病、冠心病、恶性肿瘤、血液系统或免疫系统疾病；临床上需要补服大剂量叶酸或维生素B12治疗，其他不能配合参加。本研究经过院伦理委员会审批。

1.2 检测方法

均采集孕妇空腹静脉血2管，分离胶真空管5 ml 1管，EDTA-K2抗凝管3 ml 1管；采用Roche cobas e411全自动电化学发光免疫分析仪测定红细胞叶酸和血清维生素B12浓度，试剂为罗氏配套检测试剂、定标液及质控液等。按试剂盒说明书和仪器操作规程进行。红细胞叶酸浓度=分析结果/%红细胞比容×100。采用国际通用标准，红细胞叶酸<400 ng/ml判定为低于预防NTDs最适浓度[13]。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0数据分析。正态性检验，样本量≤5000采用Shapiro-Wilk检验，>5000采用Kolmogorov-Smirnov检验。P<0.05表明资料不服从正态分布，用2.5%～97.5%表示参考范围，组间比较采用Kruakal Waliis检验；P>0.05表明资料服从正态分布，用均数±标准差表示95%参考范围，组间比较采用方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 数据分析

共纳入早期妊娠孕妇7135例，均行红细胞叶酸检测；6296例行血清维生素B12检测。红细胞叶酸水平和血清维生素B12的参考值范围经过Kolmogorov-Smirnov检验，数据均不服从正态分布，用2.5%～97.5%百分位数法表示参考范围。

2.2 参考范围确定

经统计分析，本次孕早期孕妇红细胞叶酸参考范围为606.11～1492.69ng/ml, 中位数为1045.22 ng/ml;血清维生素B12参考范围为 201.0～927.3 pg/ml，中位数为499.60 pg/ml。

2.3 不同年龄段孕妇红细胞叶酸水平参考范围

将18～45岁孕妇分为5组，不同年龄段孕早期孕妇红细胞叶酸水平百分位点分布见表1。各年龄组红细胞叶酸水平参考范围分别为：18～25岁992.81(585.4～1417.0)ng/ml，26～30岁1068.56(620.1～1500)ng/ml，31～35岁1093.48(656.38～1542.42)ng/ml，36～40岁1097.31(611.24～1571.68)ng/ml，41～45岁1034.02(566.07～1501.97)ng/m。红细胞叶酸水平百分位点浓度，18～25岁组与26～30岁组、31～35岁组、36～40岁组有差异(χ2=146.842、157.262、53.860，均P=0.000)，26～30岁组与31～35岁组有差异(χ2=9.748，P=0.002)，其余组间无差异(P>0.05)。

表1 各年龄段孕妇红细胞叶酸不同百分位点浓度分布(ng/ml)

2.4 不同年龄段孕妇血清维生素B12水平参考范围

不同年龄段孕妇维生素B12水平百分位点分布见表2。各年龄段孕妇血清维生素B12水平参考范围：18～25岁2433例，参考范围495.31(206.5～924.0)pg/ml; 26～30岁2499例,参考范围506.19(200.9～932.3)pg/ml; 31～35岁1075例, 参考范围498.97(197.4～941.3)pg/ml; 36～40岁277例，参考范围483.24(193.8～844.6)pg/ml; 40～45岁12例，参考范围398.5(54.37～742.63)pg/ml。18～25岁组与26～30岁组维生素B12水平百分位点位浓度比较有差异(P<0.05),其余各组比较无差异。

表2 各年龄段孕妇血清维生素B12不同百分位点浓度分布(pg/ml)

2.5 不同年龄段孕妇血清维生素B12缺乏情况

本次调查的孕早期孕妇血清维生素B12<191 pg/l占比为2.3%(146/6296)，血清维生素B12缺乏随年龄增长呈升高趋势。血清维生素B12水平<191 pg/l比例在各年龄段分布有差异(χ2=584,P<0.05)，见表3。血清维生素B12水平<191 pg/L者集中在18～35岁，占95.2%(139/146)。

表3 各年龄段孕妇血清维生素B12水平分布[例(%)]

3 讨论

《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》[23]提出，妊娠后3个月的孕早期对孕妇进行叶酸和维生素B12监测具有重要意义。红细胞叶酸是较理想的叶酸营养状况反映指标。但目前，由于孕期红细胞叶酸检测方法学不同以及不同地区、不同民族检测参考范围相差较大。

3.1 与我国其他地区孕早期孕妇红细胞叶酸水平比较

本次研究的孕早期孕妇红细胞叶酸水平中位数1045.2 ng/ml(罗氏试剂)，高于南京市、北京市、江苏张家港、湖州市、云南、安徽省池州市及贵池区，考虑可能与方法学及样本量不同有关。湖州市4500例样本红细胞叶酸中位数297.0 ng/ml，采用全自动时间分辨荧光分析(芬兰生产试剂)检测[14]；南京1793例样本红细胞叶酸748.1 ng/ml[15]、北京3458例样本红细胞叶酸中位数806.5ng/ml[16]、江苏张家港665例样本红细胞叶酸中位数672.0 ng/ml[17]、云南123例样本红细胞叶酸中位数518.6 ng/ml[18]、安徽省池州市贵池区182例样本红细胞叶酸中位数368.7 ng/ml[19]、均采用贝克曼微粒子化学发光分析仪检测，试剂来自于贝克曼公司。通过比较发现，采用时间分辨法检测的参考范围偏低，且低于世界卫生组织推荐预防神经管畸形的最佳水平400 ng/ml，而采用贝克曼化学发光法检测的5个地区中，只有贵池地区叶酸水平低于WHO推荐值，考虑除方法学影响因素外，可能与样本量及地区差异有关。有研究报道，青海地区藏族、汉族与回族间红细胞叶酸和血清维生素B12参考范围有所不同[24]。各地区饮食习惯、生活环境不同可能是造成地区差异的原因之一。而不同检测方法对结果的影响较大，因此，有必要建立本地区、本实验室的孕早期孕妇红细胞叶酸水平的参考范围，为临床提供叶酸补充的精准依据。

3.2 与我国不同地区孕早期孕妇血清维生素B12水平比较

本次分析的国内各地区均采用化学发光法检测，但检测仪器生产厂家不同。本次6296孕妇血清维生素B12水平参考范围为499.60(201.0～927.3)pg/ml(罗氏)；广州湛江市30例孕早期孕妇维生素B12水平为368.69±23.52 pg/ml[10](新产业)；北京市113例孕早期孕妇维生素B12水平为457.55±160.68 pg/ml[20](未注明)；西安地区65例孕早期孕妇维生素B12水平为359.2±117.8 pg/ml[21](未注明)；天津市35例孕早期孕妇维生素B12水平427.92±41.08 pg/ml[22](贝克曼)。本次研究维生素B12水平高于上述地区。我国其他地区样本量均较少，仅有几十例，缺少大数据分析结果。因此，维生素B12是否受不同地区、不同民族、饮食和生活习惯的影响，有待大数据研究。在罗氏试剂说明书中，仅对欧洲和美国人群进行了维生素B12参考范围设定，缺少对我国人群尤其是孕期女性参考范围的研究，本次研究弥补这一不足。

3.3 不同年龄段孕早期孕妇叶酸、维生素B12缺乏状况

本次眉山地区不同年龄段孕早期孕妇红细胞叶酸浓度随年龄增长而升高，与国内其他地区人群叶酸水平研究[15]结果相一致。主要原因可能是随着年龄增长和社会阅历增加，高年龄孕妇健康意识更强，或高龄二胎孕妇有更多的经验积累，更懂得选择科学、健康的孕期饮食习惯。本研究中，仅有7例(0.098%)红细胞叶酸样本低于预防NTDs的最低水平(400 ng/ml)，低于国内其他地区的报道[15]。说明眉山市孕早期孕妇叶酸营养状况较好。维生素B12水平妊娠期会下降30%，根据2014年英国血液学标准委员会(BCSH)发布的《关于维生素B12和叶酸障碍的诊断和指南》[25]，对于维生素缺乏无特异性症状者，若维生素B12水平低于150 ng/l，应按照贫血管理进行治疗；若维生素B12水平在150～200 pg/l 时，应再次监测1～2个月，同时联合对血清同型半胱氨酸、甲基丙二酸和全反钴胺素进行评估。同时，根据罗氏化学发光试剂说明书，参照欧洲人群的参考范围191～661 pg/ml。本研究血清维生素B12<191 pg/l水平孕妇占比为2.3%，集中在18～35岁，维生素B12的缺乏随年龄增长呈升高趋势。因此，在孕早期进行维生素B12筛查，能及时发现低水平者并及时给予补充，具有重要意义。

综上所述，本次研究建立了本地区孕早期孕妇红细胞叶酸和维生素B12的正常参考值，纳入样本量较大，提高了结果的可信度和真实性，对指导本地区孕期保健具有针对性指导意义。