2021 年云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒监测

罗晓燕，杨耀兰，杨秋楠，宋诗雅，李晶，吕嵘，赵焕云

（1.玉溪市动物疫病预防控制中心，云南玉溪 653100；2.云南省动物疫病预防控制中心，云南昆明 650201）

禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A 型流感病毒引起的一种从呼吸系统到全身严重败血症等多种症状的禽类传染病。根据禽流感病毒（AIV）对禽类的致病性，可分为高致病性禽流感病毒（HPAIV）与低致病性禽流感病毒（LPAIV）。目前只发现H5 和H7 亚型属于HPAIV[1]。LPAIV 一般情况下仅造成禽类轻度的呼吸系统疾病，在禽间表现为隐性传播。近年来不断有关于LPAIV 流行的报道[2-5]，其流行和污染面呈上升和扩大趋势。很多报道[6-8]显示，H9 亚型是影响我国养禽业的主要禽流感病毒亚型，几乎存在于所有的养禽场，可引起发病禽轻度呼吸道症状和产蛋性能下降。2003 年在我国香港地区还出现了人感染H9N2 亚型禽流感病毒病例[9]。

活禽市场中的活禽流动性大、品种繁多，又普遍缺乏严格的消毒和隔离措施，是AIV 的重要储存库，是AIV 在禽间以及人禽间传播的重要环节[10]。为了解活禽交易市场的AIV 污染状况及流行趋势，2021 年对玉溪市辖区内的活禽交易市场进行了AIV 检测，以期为玉溪市活禽市场管理及禽流感防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2021 年，按照云南省农业农村厅印发的《2021年云南省动物疫病监测与流行病学调查计划》，对玉溪市辖区8 个县（市、区）的24 个活禽市场进行检测。每周轮流对其中的2 个县（市、区），各随机选择1 个活禽市场进行采样。每个活禽市场随机选择3 个售卖活禽摊位，每个摊位采集5 份活禽咽喉/泄殖腔双拭子样品；同时采集市场内环境棉拭子样品（案板、地面、污水等）5 份，运输工具棉拭子样品（鸡笼、推车等）5 份。每份样品装入1 个离心管中，加入保存液低温保存送实验室检测。

1.2 主要仪器与试剂

NP968C 型核酸自动提取仪，西安天隆科技有限公司产品；QuantStudio 7 Flex 荧光定量PCR 仪，美国ABI 公司产品。

病毒DNA/RNA 核酸提取试剂盒（4.0），西安天隆科技有限公司产品；A 型流感病毒荧光RTPCR 检测试剂盒，宝生物工程（大连）有限公司产品；H5/H7/H9 亚型AIV 三重荧光RT-PCR 检测试剂盒，中山大学达安基因股份有限公司产品。

1.3 检测方法

使用NP968C 型核酸自动提取仪，参照试剂盒说明书，提取病毒RNA。采用宝生物工程（大连）有限公司One Step PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time）流感病毒A 型通用核酸检测试剂盒方法配制体系，在实时荧光定量PCR 仪上进行检测；若检测为阳性，再用中山大学达安基因股份有限公司H5/H7/H9 亚型AIV 三重荧光RT-PCR 检测试剂盒进行分型检测。

1.4 统计分析

应用Excel 软件对数据进行整理，再通过SPSS 24.0 软件对阳性率进行统计分析。

2 结果

2.1 总体情况

全年累计检测63 场次共1 455 份样品，其中鸡咽喉/泄殖腔双拭子样品860 份、环境拭子样品317 份、运输工具拭子样品278 份。累计在44场次检出A 型流感病毒核酸阳性435 份，进一步分型未检出H5 和H7 亚型AIV 核酸阳性，检出H9 亚型AIV 核酸阳性428 份，另有7 份未确定亚型。H9 亚型AIV 场次阳性率为69.84%（44/63），样品阳性率为29.42%（428/1 455），其中活禽、环境、运输工具拭子的样品阳性率分别为32.56%（280/860）、25.87%（82/317）、23.74%（66/278）。7 份未确定型阳性样品分别为禽咽喉/泄殖腔双拭子2 份、环境拭子5 份。

2.2 不同月份情况

月份统计结果（图1）显示：2021 年玉溪市辖区内活禽市场每个月均能检测到H9 亚型AIV 阳性样品。不同月份的H9 亚型AIV 核酸样品阳性率存在差异，其中3—6 月阳性率低于年均阳性率，1、2、7、10、12 月阳性率明显高于其他月份，各月份间阳性率差异具有统计学意义（P＜0.01）。

图1 2021 年不同月份H9 亚型AIV 阳性率分布

2.3 不同地区情况

地区统计结果（表1）显示：8 个县（市、区）的活禽市场中均检出H9 亚型AIV 阳性样品，但场次阳性率不一。澄江市、通海县、红塔区场次阳性率较高，在90%以上，其他县市区均在80%以内，其中华宁县场次阳性率最低（33.33%）。不同地区间的场次阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），而样品阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 不同县区H9 亚型AIV 检测结果统计

2.4 不同样品情况

活禽咽喉/泄殖腔双拭子的H9 亚型AIV 阳性率较高，达32.56%，明显高于环境（25.87%）和运输工具（23.74%）棉拭子（表2），差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表2 不同样品H9 亚型AIV 检测结果统计

3 讨论

本研究对玉溪市辖区内8 个县（区、市）的活禽市场开展禽流感监测，未检出H5、H7 亚型AIV 阳性。这可能与国家全面实施高致病性禽流感强制免疫（H5+H7 二价疫苗）政策，且疫苗毒株更新及时，从而在养殖环节有效控制了疫病的发生有关。活禽、市场环境、运输工具中均检出H9 亚型AIV，且阳性率较高，病毒污染面较广。不同样品H9 亚型AIV 阳性率差异显著，说明鸡群在进入市场时已携带病毒，并污染市场和运输工具，如果闭市时市场管理方严格清洗消毒市场和车辆，会降低市场和运输工具样品的阳性率。活禽交易市场是不同来源、批次和种类活禽的聚集地，加之场地狭小，卫生条件差，且部分当天未售卖完的活禽要么在市场过夜，要么流出市场，病毒极易大量复制增殖并在家禽群体及环境中持续传播和扩散，导致活禽零售市场成为禽流感病毒持续存在的高风险区域[11]。因此，应加强对流入市场家禽的监管和检疫，尽量避免外表健康的隐性感染家禽进入市场，同时也应严格执行活禽交易市场“1110 制度”（一日一清洗、一周一消毒、一月一休市、过夜零存栏），有条件的市场可推行白条鸡上市。

从不同月份看，偏冷季节（1、2、12 月）H9亚型AIV 阳性率较高，这可能与玉溪市冬季寒冷、潮湿，有利于病毒存活有关。随着天气转暖，阳性率逐渐降低，除10 月份外（该月阳性率异常升高，怀疑与当月检测数量少有关），其余月份阳性率趋于平稳，维持在20%～30%的水平，季节性差异缩小，这与朱建翠等[12]的研究结果一致。因此，除应重点加强冬春季节的禽流感防控外，其余季节的防控也不可掉以轻心。

从不同区域看，全市8 个县（市、区）的H9亚型AIV 样品阳性率为12.00%～52.22%，说明各地区活禽市场H9 亚型AIV 污染率较高。其中：通海县样品阳性率最高，这可能与该县为全市蛋鸡养殖大县，活禽交易比较频繁有关；华宁县和元江县阳性率较低，可能与样品采集主要来自于乡镇农贸市场，禽类来源单一有关，也可能与这些地区的活禽交易市场的卫生环境管理较好有关。因此，每个县区可根据各自活禽交易市场的H9 亚型AIV 流行特点，结合自身实际，制定切实可行的综合防控措施。

本次监测的对象主要是鸡，未涉及到其他禽类，监测结果未能全面反映活禽市场的AIV 污染情况。下一步将继续加强对其他禽类（鸭、鹅）及其他环节的禽流感监测，以期充分了解和掌握本地区AIV 流行趋势，提出有针对性的防控建议和措施，为本地区禽流感防控工作提供更有力依据。