高通量测序技术及早期血液检查在稽留流产诊治中的研究进展

许阳

【摘要】稽留流产是妇产科中较为常见的一种病症，也被称作过期流产。患者的病理特点为胚胎的发育已经停止却没有及时的自然排出。稽留流产的发生因素众多，例如胚胎的发育、环境因素、孕产妇的因素等。对于稽留流产，最主要的应对措施是及早采取高效的诊断措施提高稽留流产的诊断准确率，从而在早期采取有效的防治措施。对于稽留流产的诊断，目前临床上有高通量测序技术、血液检验、绒毛组织细胞培养核型分析、FISH技术等方式，尤其是高通量测序技术、血液检验具有多种优势。本文就高通量测序技术及早期血液检查在稽留流产诊治中的研究进展进行了研究分析。

【关键词】高通量测序技术；血液检查；稽留流产；诊治

Research Progress of High-throughput Sequencing Technology and Early Blood Test in the Diagnosis and Treatment of Missed Abortion

XU Yang

Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu 225000， China

【Abstract】Missed miscarriage is a common disease in obstetrics and gynecology， also known as overdue abortion. The pathological feature of the patient is that the development of the embryo has stopped but has not been spontaneously excreted in time. There are many factors that cause missed abortion， such as embryonic development， environmental factors， and maternal factors and so on. For missed abortion， the most important countermeasure is to take efficient diagnostic measures as soon as possible to improve the diagnostic accuracy of missed abortion， so as to take effective preventive and treatment measures in the early stage. For the diagnosis of missed abortion， there are currently clinical methods such as high-throughput sequencing technology， blood test， karyotype analysis of villous tissue cell culture， and FISH technology，in particular， high-throughput sequencing technology and blood test have many advantages. This paper analyzes the research progress of highthroughput sequencing technology and early blood test in the diagnosis and treatment of missed abortion.

【Key？Words】High-throughput sequencing technology； Blood test； Missed abortion； Diagnosis and treatment

稽留流产是妇产科中的一类常见的异常妊娠，大约占据了所有异常妊娠的20%，在出现稽留流产之后如果没得及时有效的治疗则会引发出血、感染等危险事件，还会提升后续刮宫术损伤子宫内膜的发生概率，同时还会造成药物流产成功率下降，并可能导致凝血功能障碍发生。与此同时，在女性妊娠早期的时候，正常妊娠、异位妊娠和稽留流产孕妇的临床表现基本相似，症状包括阴道流血、下腹痛等，所以很容易造成误诊发生，所以在早期采取高效的诊断措施准确诊断和鉴别，以此能够有效地预防不必要的保胎治疗，不仅能够在更早时期内有效纠正稽留流产和其他异常妊娠，还能够避免或减少稽留流产引发的各种并发症，减轻患者痛苦的同时减少患者的负担。对于异常妊娠的诊断，临床常采用孕酮水平、超声检查、血人绒毛膜促性腺激素，但这些方式主要用于中晚期妊娠诊断，在早期妊娠时诊断漏诊率较高。近年来，临床逐步引入了早期血液检验及高通量测序技术。为此，本文就高通量测序技术及早期血液检查在稽留流产诊治中的研究进展进行了研究分析。

1 稽留流产的常规诊断

稽留流产如果未能得到及时有效的诊治会对孕妇的健康产生极大的伤害，与此同时，稽留流产在早期时的症状表现与其它类型的异位妊娠以及正常妊娠者具有高度的相似性，因此对稽留流产的诊断，目前临床上有多种方式，尤其是随着细胞遗传学研究技术水平的持续深入研究，临床对于染色体异常引起的自然流产、死胎及死产、胎儿畸形的关注度也越来越高，众多临床研究者一致表明，在所有的早期自然流产中大约有50%存在胚胎染色体异常；同时，也有一部分研究者提出，在实际生活中，染色体异常的发生概率远远高于这一水平，只是在诊断中受限于常规细胞遗传学方法較为落后的因素，其检测结果比较低下，由此可见，在早期找到一种能够更加全面、准确地检测早期自然流产胚胎染色体异常技术非常必要。

对于早期自然流产胚胎染色体异常的诊断，常规诊断方式为流产绒毛组织细胞培养核型分析方式，这种方式能够对大部分的自然流产物或胎儿染色体结构和数目异常进行检测，在早期的时候属于诊断和鉴别病因或产前诊断的“金标准”，但是这一方式在开展过程中对于检测标本具有很高的要求，同时，检测所需的时间也比较长，操作的复杂度较高，对于检测医师也具备更高的要求，同时由于检测操作过程比较繁琐，从而导致了绒毛组织很容易遭受微生物的污染，特别是发生稽留流产之后，停止发育的胚胎在宫内滞留时间长、生长活力差，也会容易造成绒毛组织在培养过程中失败，另外，一些组织的染色体小片段存在着缺失现象，从而无法对这部分染色体小片进行检测。

吕莉琴等[1]通过对440例稽留流产患者进行了绒毛组织培养，最终有424例培养成功，培养成功率为96.36%，另外16例患者则由于未知原因污染导致了培养失败。侯冠英等[2]通过对20例稽留流产患者进行了绒毛组织培养，最终有18例培养成功，培养成功率为90.0%，另外2例患者标本则因为稽留流产时间过长而培养失败。

随着临床医疗技术的不断发展，在稽留流产的检测中逐步引入了FISH技术，这一检测技术的引入有效地弥补了绒毛细胞培养的缺陷，相比之下，这种方式大大降低了对检测标本的要求，即使是受到污染的标本也能够快速进行检测，而目前我国开展的自然流产遗传学病因检测的FISH探针只是涵盖了染色体13、16、18、21、22、X/Y，而这几种染色体类型仅能够覆盖染色体数目异常的81.3%左右，从而无法对常染色体和一组性染色体进行检测，从而导致了大约20%的患者发生漏诊。如果要满足对常染色体和一组性染色体进行覆盖，则需要花费非常高昂的价格，所以FISH技术无法大范围地进行临床应用及推广。同时，现今临床上开展的自然流产染色体数目异常检测的FISH探针还无法实现针对染色体结构进行检测的功能，这就很容易造成大约2%～5%的染色体结构异常夫妇反复流产无法准确地查明其发病原因。

2 高通量基因测序技术在稽留流产的应用

高通量测序技术属于第二代测序的代表技术之一，高通量测序技术一方面能够对46条染色体非整倍体异常进行检测，另一方面则可以对100 kb以上片段的微缺失、微重复进行检测，同时，这种方式对于绒毛样本的要求也相对较低，其检测准确率也比较高，患者检测之后能够在更短的时间内获得检测报告，患者花费的检测成本也相对较低，尤其是与基因芯片相比大大减少了检测成本。除此之外，高通量测序技术还能够在早期及时诊断出不同区域的拷贝数变异情况，这也是高通量测序技术最大的优势，从而有效地避免了FISH技术、染色体核型分析检测方式的弊端，因此临床上常将高通量测序技术作为传统染色体核型分析的補充方法。

陶丽丹等[3]表明，高通量基因测序技术最大的优势是弥补了绒毛组织细胞培养核型分析“金标准”和FISH技术的缺陷，不仅能够快速、批量、准确地进行检测，同时还提高了检测的覆盖面，不需要检测标本具备过高的质量标本，可以对污染、绒毛退化标本等多类型存在一定质量影响的标本进行检测，对于存在0.5Mbp以上的染色体片段缺失的标本也能够进行检测。

慕铭坤等[4]通过对50例稽留流产患者标本应用高通量基因测序技术进行了检测，检测结果显示其染色体异常检出率为70.0%，显著比临床报道的55.56%水平更高，分析其原因主要是由于全基因检测可以准确地诊断出染色体数目、片段缺失、结构异常等情况。另外则是可能与患者所处区域的不同而存在一定差异，比如一些城市地区的居民靠近核电站，使得患者的染色体异常率比临床报道水平更高。

张羽等[5]在研究中对因稽留流产行高通量测序技术检测绒毛染色体的患者235例进行了检测和分析，旨在探讨染色体异常类型与年龄，妊娠方式及既往流产次数之间的关系，结果显示，235例稽留流产患者绒毛染色体中，异常染色体有165例，其中染色体数目异常占50.2%，并以三体为主，且16-三体最为高发。由此证明了早期流产的病因以染色体异常为主，年龄是影响胚胎染色体的重要因素，而妊娠方式及既往流产次数并未见明显影响作用。高通量基因测序技术染色体检测方法可明显增加染色体的异常检出率，更加准确地为明确稽留流产病因提供理论依据。

3 血液检查在稽留流产诊断中的应用

血液检查也是如今临床诊断异常妊娠、稽留流产的重要方式[6]，根据临床研究表明，异常妊娠患者的中性粒细胞/淋巴细胞比值水平低于正常妊娠者，目前中性粒细胞/淋巴细胞比值已经作为全身炎症评估指标而在多种恶性肿瘤等疾病诊断中得到了广泛的应用。研究表明，妊娠的过程开始于胚胎植入直至胎盘形成，这一过程则会涉及滋养层细胞侵入、螺旋动脉重铸，其发展过程与肿瘤发生发展的过程有着高度的相似性，所以，稽留流产患者的中性粒细胞/淋巴细胞比值会出现下降，下降的原因则是由于早期胎盘形成不良[7-8]。

国外研究者通过对30例稽留流产患者进行了研究分析，实验结果表明，稽留流产患者会出现明显的中性粒细胞/淋巴细胞比值下降，而对患者实施黄体支持治疗之后，该部分患者中性粒细胞/淋巴细胞比值水平与正常妊娠者相比差异不明显。而在以往对稽留流产的研究报道中也指出，非月经期女性的黄体中期白细胞计数明显比月经期更高，由此提示，外周血孕激素水平会在一定程度上影响到中性粒细胞/淋巴细胞比值。另外，在稽留流产患者检测中，血小板/淋巴细胞比值也是一项非常重要的参考指标，通常情况下，稽留流产患者的血小板/淋巴细胞比值会出现明显的上升。有学者通过对119例稽留流产患者进行了研究分析，试验结果显示，中性粒细胞/淋巴细胞比值诊断稽留流产的最佳截断值为2.52，特异度达到了79.6%，证实了中性粒细胞/淋巴细胞比值诊断稽留流产的有效性，而在实际诊断中需联合其它指标共同提高诊断准确率。

4 结语

稽留流产虽然发生率不高，但危害性较大，需积极加强诊治，而由于稽留流产早期症状不具典型性，因此采取高效的诊断方式至关重要，高通量测序技术和血液检验具有较高的可靠性，尤其是高通量测序技术具有高分辨率、高敏感性和高准确性等优点，有助于明确稽留流产的病因，但其也存在一定的缺陷，需要不断地进行完善。

参考文献

[1] 吕莉琴，张晓丽，李学余，等.miR-362-3p和MCAM在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其与微血管密度的关系[J].广西医科大学学报，2021，38（3）：472-478.

[2] 侯冠英，庞淑芹，卢春宇，等.芬吗通和坤泰胶囊对稽留流产清宫术后子宫内膜容受性及血清β-EP和ENK的影响[J].临床和实验医学杂志，2021，20（20）：2195-2198.

[3] 陶丽丹，贾旺，杨娜，等.稽留流产清宫术后去氧孕烯炔雌醇辅助治疗对子宫内膜组织MMP9、TGF-β3mRNA水平及内膜修复效果[J].中国计划生育学杂志，2021， 29（9）：1956-1959.

[4] 慕铭坤，孙思敏，郑威，等.辅助生殖技术助孕女性稽留流产绒毛组织各型染色体异常发生率的研究[J].中华生殖与避孕杂志，2021，41（6）：538-542.

[5] 张羽，刘琰，李兰兰，等.稽留流产绒毛染色体通量测序技术检测235例结果分析[J].安徽医药，2022，26（1）：73-76.

[6] 李苑艳，沈旭娜，张常乐，等.孕妇血清PAPP-A和孕酮值在预测稽留流产和异位妊娠中的诊断价值[J].生殖医学杂志，2011，20（5）：406-407.

[7] 任茁，李智，王静，等.高通量测序技术检测96例稽留流产组织染色体核型异常分析[J].中国妇产科临床杂志，2018，19（2）：140-143.

[8] XIONG Ying，TAN Shiqiao，LV Kangmo Application analysis of high throughput sequencing in chromosome detection of missed abortion villus[J]. Chinese Journal of family planning，2018，26（7）：607-611.