子痫前期患者血清环状RNA HIPK3水平变化及其对妊娠结局的预测效能

沈家慧，胡海珊，欧曼颖，邹聪聪，谢春丽，黄炜

1海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室，海口 570102；2海南医学院第一附属医院生殖医学科；3海南医学院热带转化医学教育部重点实验室

子痫前期（PE）是一种多发生于妊娠20周后的妊娠期并发症，可使孕产妇出现心、肝、肾等多器官损伤，也可引发胎儿生长受限、宫内窘迫，对母婴妊娠结局产生不利影响［1-2］。研究发现，PE发病与胎盘灌注不足、环状RNA（circRNA）异常表达、滋养细胞浸润、氧化应激、子宫—胎盘血管结构异常、炎症反应、自噬、血管内皮损伤等相关［3-4］。circRNA是非编码RNA的一种，可调控基因转录、剪切，影响蛋白质翻译，是诊断PE、心血管疾病等的潜在标志物［5］。HIPK3是circRNA家族的一员，其在PE患者胎盘组织中呈低表达。研究认为，HIPK3可能是治疗PE的分子靶点［6］。本研究观察了PE患者血清HIPK3水平变化，初步分析HIPK3与PE患者临床参数的相关性，探讨血清HIPK3检测对PE患者妊娠结局的预测价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象分组与临床资料收集选取2018年4月—2021年6月入院的PE患者95例为PE组，年龄23～38（31.14±5.38）岁，孕次1～3（1.87±0.56）次，分娩孕周33～41（37.19±2.53）周；患者均符合第8版《妇产科学》中PE的诊断标准［7］，均为单胎妊娠，自然受孕，检查资料齐全，自愿参与本研究；排除孕前合并慢性肾炎、糖尿病、肾病综合征、高血压者，合并心脏病、甲状腺功能亢进、严重肝损伤者，合并免疫功能障碍、凝血功能异常、肿瘤者，有其他妊娠疾病者，有急慢性感染或传染病史者，有烟酒不良嗜好者。另选取同期孕检的健康孕妇95例为对照组，年龄23～38（30.96±5.21）岁，孕次1～3（1.92±0.58）次，分娩孕周33～41（37.12±2.50）周，均为单胎妊娠、自然受孕、无糖尿病或其他妊娠相关疾病，血压＜140/90 mmHg，无蛋白尿。PE组与对照组年龄、孕次、分娩孕周差异无统计学意义（P均＞0.05）。本研究符合《赫尔辛基宣言》。收集两组孕妇总蛋白、白蛋白、24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮等临床指标，收集PE患者孕前体质量指数（BMI）、PE严重程度、分娩方式、分娩情况等资料。与对照组相比，PE组白蛋白、总蛋白水平降低，24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮水平升高（P均＜0.05）。详见表1、表2。

表1 PE组与对照组血清蛋白水平及血压比较（±s）

表1 PE组与对照组血清蛋白水平及血压比较（±s）

注：与对照组相比，*P＜0.05。

组别PE组对照组n 95 95白蛋白（g/L）30.11±3.03*34.53±3.27 24 h尿蛋白（mg）1 952.34±142.70*86.21±9.67总蛋白（g/L）55.22±5.85*63.13±6.51舒张压（mmHg）107.45±10.99*74.22±7.84收缩压（mmHg）139.38±12.46*112.23±9.41

表2 PE组与对照组肾功能指标比较（μmol/L，±s）

表2 PE组与对照组肾功能指标比较（μmol/L，±s）

注：与对照组相比，*P＜0.05。

组别PE组对照组n 95 95肌酐56.60±9.53*42.53±5.51尿酸319.56±37.91*265.48±28.70胱抑素C 1.73±0.55*1.14±0.37尿素氮4.24±1.18*3.08±1.03

1.2 血清HIPK3水平检测收集两组妊娠29～33周时的清晨空腹外周血5～6 mL，分离血清。采用Trizol LS Reagent抽提总RNA，用First-Strand cDNA Synthesis Kit制备cDNA，Realtime PCR Master Mix（SYBR Green）、qRT-PCR仪扩增cDNA。扩增条件：98.2℃预变性10 min，96.5℃变性40 s、60.5℃退火25 s、70.4℃延伸20 s，40个循环。HIPK3上游引物序列为5＇-TTCAACATATCTACAATCTCGGT-3＇，下游引物序列为5＇-ACCATTCACATAGGTCCGT-3＇；内参GAPDH上游引物序列为5＇-CTCTCTGCTCCTCCTGTTCGACAG-3＇，下游引物序列为5＇-AGGGGTCTTACTCCTTGGAGGCCA-3＇。以2－ΔΔCt表示HIPK3相对表达量。

1.3 妊娠结局观察收集PE组与对照组孕妇发生HELLP综合征、产后出血、胎盘早剥、胎儿窘迫、早产、胎儿生长受限、胎儿死亡的情况。根据PE组是否发生上述不良妊娠结局，进一步分为妊娠结局不良者和妊娠结局良好者。

1.4 统计学方法采用SPSS22.0统计软件。计量资料以±s表示，采用t检验。计数资料以例和百分率表示，采用χ2检验。相关性分析采用Pearson法。影响因素分析采用Logistic回归分析法。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价血清HIPK3对PE患者妊娠结局的预测效能。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组与PE组血清HIPK3水平及不良妊娠结局比较PE组血清HIPK3水平为0.47±0.16，低于对照组的1.03±0.34（P＜0.05）。与对照组相比，PE组HELLP综合征、产后出血、胎盘早剥、胎儿窘迫、早产、胎儿生长受限、胎儿死亡发生率升高（P均＜0.05）。详见表3。

表3 PE组、对照组不良妊娠结局比较［例（%）］

2.2 PE患者血清HIPK3水平与临床指标的相关性PE患者血清HIPK3水平与白蛋白、总蛋白呈正相关（r分别为0.567、0.581，P均＜0.05），与24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、胱抑素C水平呈负相关（r分别为-0.543、-0.497、-0.595、-0.532，P均＜0.05）。

2.3 PE患者妊娠结局的影响因素分析与妊娠结局良好者相比，妊娠结局不良者重度PE患者占比、收缩压、胱抑素C水平升高，血清HIPK3水平降低（P均＜0.05）。见表4～6。以PE患者妊娠结局为因变量（妊娠结局良好=0，妊娠结局不良=1），以PE严重程度（轻度=0，重度=1）、收缩压（实测值）、胱抑素C（实测值）、HIPK3（实测值）为自变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示，重度PE、收缩压是PE患者不良妊娠结局的危险因素，HIPK3是PE患者不良妊娠结局的保护因素（P均＜0.05）。见表7。

表4 不同妊娠结局PE患者分娩方式、初产妇情况、PE严重程度比较（例）

表5 不同妊娠结局PE患者年龄、孕前BMI、分娩孕周、血清蛋白、尿蛋白水平比较（±s）

表5 不同妊娠结局PE患者年龄、孕前BMI、分娩孕周、血清蛋白、尿蛋白水平比较（±s）

妊娠结局结局良好结局不良n 57 38年龄（岁）30.67±5.31 31.85±5.49 BMI（kg/m2）22.18±2.66 22.30±2.71分娩孕周（周）37.15±2.52 37.24±2.54白蛋白（g/L）30.52±3.10 29.50±2.97 24 h尿蛋白（mg）1 941.27±140.34 1 968.95±145.62总蛋白（g/L）55.87±5.95 54.25±5.71

表6 不同妊娠结局PE患者血压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮、HIPK3水平比较（±s）

表6 不同妊娠结局PE患者血压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮、HIPK3水平比较（±s）

注：与妊娠结局不良者相比，*P＜0.05。

妊娠结局结局良好结局不良n 57 38舒张压（mmHg）106.36±10.62 109.09±11.03收缩压（mmHg）132.37±11.73*159.90±13.67肌酐（μmol/L）55.37±9.21 58.45±9.78尿酸（μmol/L）315.59±37.26 325.52±38.57胱抑素C（μmol/L）1.42±0.47*2.20±0.73尿素氮（μmol/L）4.03±1.34 4.56±1.52 HIPK3 0.58±0.20*0.31±0.11

表7 PE患者妊娠结局影响因素的多因素Logistic回归分析结果

2.4 血清HIPK3对PE患者妊娠结局的预测效能ROC曲线分析显示，血清HIPK3预测PE患者妊娠结局的曲线下面积（AUC）为0.889（95%CI0.824～0.954），截断值为0.40，约登指数为0.658，灵敏度、特异度分别为81.6%、84.2%。见图1。

图1 血清HIPK3预测PE患者妊娠结局的ROC曲线

3 讨论

PE是一种多发于妊娠中晚期的高血压疾病，其发病率逐年上升，是造成孕产妇、围产儿死亡的重要原因［8-10］。本研究发现，PE组HELLP综合征、产后出血、胎盘早剥、胎儿窘迫、早产、胎儿生长受限、胎儿死亡发生率高于对照组，表明PE患者及其胎儿发生不良妊娠结局的概率较大，及时诊治PE非常必要。circRNA在血清中可稳定存在，具有时空特异性、高度保守性等特点，可影响蛋白质翻译，调控miR表达，与PE等高血压相关疾病进展有关［11-14］，有助于辅助诊断PE。然而，目前临床上仍缺乏能够有效预测PE患者妊娠结局的血清标志物。因此，寻找与PE病理参数变化相关且可有效预测妊娠结局的血清指标，对及时干预PE、改善PE患者及其胎儿的结局有积极意义。

近期研究显示，circRNA 0085296在PE患者中表达失调，其可通过靶向调控miR-942-5p表达，调节滋养层细胞增殖、侵袭，影响血管生成，从而影响PE进展，故circRNA 0085296可能是PE的治疗靶点［15］。另有研究发现，circRNA 0007121在PE患者胎盘组织中表达下调，其可通过与miR-182-5p靶向结合进而调节滋养层细胞侵袭、迁移、上皮—间质转化，从而抑制PE的进展［16］。以上研究表明，PE发生发展可能与circRNA异常表达相关。HIPK3作为circRNA的成员之一，其在PE中表达水平降低，HIPK3可通过靶向调控miR-346表达水平，进而影响滋养层细胞迁移、侵袭。研究认为，HIPK3可能参与PE的发生发展［17］。ZHANG等［6］也得出了类似的结论。本研究中，PE组血清HIPK3水平低于对照组，与相关研究结果一致，提示HIPK3表达下调可能与PE病理变化显著有关。推测HIPK3可能与miR靶向结合，进而调节滋养层细胞迁移、侵袭，抑制滋养细胞浸润能力，使胎盘子宫螺旋动脉重塑不足，造成血管阻力增加，胎盘血供减少［6，17］，从而调控PE进展，具体机制有待深入研究。

PE患者多伴肾功能异常、血压升高等［18-19］。本研究结果显示，与对照组相比，PE组白蛋白、总蛋白水平降低，24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮水平升高，与相关研究结果类似［18-19］，且PE患者血清HIPK3水平与白蛋白、总蛋白、24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、胱抑素C显著相关，提示HIPK3水平可能与PE患者肾功能异常、血压升高关系密切，这为临床治疗PE患者肾功能损伤提供了新方向。多因素分析显示，PE严重程度是导致PE患者不良妊娠结局的重要因素。ROC曲线分析发现，血清HIPK3预测PE患者妊娠结局的AUC为0.889，灵敏度为81.6%，特异度为84.2%，当血清HIPK3水平低于0.40时，PE患者发生不良妊娠结局的风险较高。这提示血清HIPK3对PE患者妊娠结局有一定预测价值，HIPK3有望成为评估PE妊娠结局的血清标志物。

综上，PE患者血清HIPK3水平降低，与白蛋白、总蛋白、24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮等临床指标密切相关，且HIPK3对于PE患者妊娠结局有一定预测价值。然而，HIPK3在PE发生发展中的具体作用机制尚未完全明确，后续实验将结合基础研究加以探究；另外，因样本量较少，本研究未能深入分析血清HIPK3水平与PE患者妊娠结局的关系，后期将增加样本量，就血清HIPK3对HELLP综合征、早产、胎儿死亡等妊娠结局的预测价值进行分层探究。