高粱秸秆栽培紫丁香蘑技术探索

蒋洪久，李朝云，黄亿，黄旋，王蕾，唐平华

（仁怀酱香白酒科研所，564500，贵州仁怀）

紫丁香蘑（Lepista nuda）又名紫晶蘑、裸口蘑，在真菌分类地位属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、香蘑属。紫丁香蘑的伞肉鲜嫩甜美，有弹性，菇香浓郁，口感独特，子实体中含有人体必需的氨基酸、矿质元素及维生素，经常食用具有增强机体免疫力、抗炎抑菌、抗癌、抗氧化等多种功效[1]。紫丁香蘑作为中低温型药食皆用的名贵野生真菌，具有较高的研究开发价值，但是目前为止主要来源为野外采集，其天然资源有限，且质量不能保证，在国内市场上极缺，市场潜力大，产业化前景好。不少研究者成功培养了紫丁香蘑液体菌种、栽培种，但是在生产中很少出菇或不出菇，种植技术难度大，经济效益低，无法进行产业化推广。

笔者在贵州省仁怀市当地采集野生紫丁香蘑进行形态学和分子生物学种属鉴定，分离得到纯培养菌株，采用液体和固体菌种相结合的方法来制备紫丁香蘑栽培种，利用高粱秸秆、牛粪为主料来种植紫丁香蘑，既解决了农村高粱秸秆的出路问题和牛粪污染环境的问题，提高了种植业、畜牧业副产品的附加值，又建立了一套快速而有效的紫丁香蘑栽培技术，为紫丁香蘑的人工驯化栽培提供参考。

1 材料与方法

1.1 母种培养及鉴定

采集当地野生新鲜紫丁香蘑子实体，采用组织分离法提取无菌子实体放在PDA 培养基上，于25 ℃下培养大约10 d 获得母种，于4～6 ℃冰箱中保存备用。ITS 序列分析采用引物ITS1（上游引物）：5′→3′TCCGTAGGTGAACCTGCGG；ITS4（下游引物）：5′ →3′TCCTCCGCTTATTGATATGC 。送生工生物工程（上海）有限公司进行测序鉴定[2]。

1.2 液体菌种培养

挑取3～5 块长势好的母种放入装有200 mL 加富PDA 液体培养基的锥形瓶中。加富PDA 液体培养基配方：马铃薯300 g，酵母粉2 g，豆胨1 g，葡萄糖15 g，硫酸镁0.3 g，磷酸二氢钾0.5 g，加水定容至1 000 mL 。pH 值为7.0。在恒温摇床温度25 ℃、转速150 r/min 条件下培养[3-4]。

1.3 栽培种制备

选用650 mL 组培瓶，内置大半瓶小麦固体培养基。小麦培养基配方（质量）：小麦98%，碳酸钙1%，石膏1%。吸取8～12 mL 液体菌种转接到高温灭菌后的小麦固体培养基，小麦培养基充分摇匀，在温度25 ℃的黑暗环境下培养。

1.4 出菇管理

栽培料按以下质量百分比堆积发酵制成：高粱秸秆50%～60%，牛粪35%～50%，过磷酸钙0.5%～1.5%，碳酸氢铵0.5%～1.5%，石膏0.5%～2%，石灰0.5%～1.5%。栽培场地要求畦宽1 m，高10 cm，畦间距40 cm，畦上铺料8～12 cm。将紫丁香蘑栽培种撒播在栽培料表层，菌种使用量0.5 kg/m2，播种后料面盖上地膜保温保湿发菌，菌丝基本长满栽培料表层时即可盖土，保持适宜的湿度、温度、光照培育出菇。

1.5 营养成分指标

选取新鲜紫丁香蘑子实体烘干打磨后留样备用。蛋白质检测采用GB5009.5—2016《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》，粗多糖检测采用NY/T1676—2008《食用菌中粗多糖含量的测定》，氨基酸检测采用GB5009.124—2016 《食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定》，粗脂肪检测采用GB5009.6—2016《食品安全国家标准 食品中脂肪的测定》。[5]

2 结果与分析

2.1 母种培养及鉴定结果

采集紫丁香蘑菌盖未开散的子实体，在子实体表面擦拭少量75%酒精消毒后，掰开挑取小块无菌子实体在PDA 培养基上25 ℃下培养10 d 左右，即菌丝长满平板，呈淡紫色，辐射状生长，形成大量气生菌丝。通过ITS 序列测定，其ITS 序列长度594 bp，将获得的紫丁香蘑ITS 序列与NCBI 的GenBank 数据库进行BLAST 检索比对，ITS 序列与基因库中的L.nuda txid64659 菌株的序列相似性高达99.66%，结合形态学和分子鉴定，将分离得到的菌株鉴定为紫丁香蘑。

2.2 液体菌种培养结果

紫丁香蘑母种在加富PDA 液体培养基恒温摇床温度25℃、转速150 r/min 条件下，2～3 d 小块母种上长满菌丝，4～5 d 开始逐渐增多小菌丝球，培养8～10 d出现大量菌丝球，11 d 过后菌丝球逐渐变紫，菌丝开始老化。选用8～10 d 指数生长期的液体菌种接种到栽培培养基上最佳。

2.3 栽培种制备结果

吸取8～12 mL 液体菌种接种到小麦固体培养基，在温度25 ℃下培养5～7 d，待表层培养基大部分长满菌丝开始摇瓶，使长有菌丝的小麦颗粒充分混匀在整个培养瓶中，菌丝继续培养10 d 左右，菌丝满瓶即可使用。

2.4 出菇结果

紫丁香蘑小麦栽培种撒播在栽培料上2～5 d，菌丝开始萌发并开始吃料，12～15 d 菌丝基本长满基料表层即可盖土，大棚土粒要进行消毒处理，以避免受到杂菌污染。覆土后保持温度在15～27 ℃为宜，促进菌丝生长。超过30 ℃菌丝会老化、死亡，在栽培中要避开高温[6];温度低于10 ℃菌丝生长显著减慢。笔者在10 月中旬基料表层长满菌丝盖土后，在低海拔500 多m 的蔬菜大棚试验地，11 月中旬紫丁香蘑开始出菇，平均鲜菇产量在1.75 kg/m2;但在高海拔900 多m 的蔬菜大棚试验地，12 月上旬紫丁香蘑才出菇:可见适宜的温度对于紫丁香蘑出菇很重要。

2.5 营养成分

通过对干品紫丁香蘑营养成分含量检测，紫丁香蘑含人体必需的8 种氨基酸，分别为：缬氨酸12 849.86 mg/kg、异亮氨酸12 870.75 mg/kg、蛋氨酸3 067.18 mg/kg、色氨酸6 106.85 mg/kg、苏氨酸12236.56 mg/kg、赖氨酸18 664.54 mg/kg、苯丙氨酸13 280.59 mg/kg、亮氨酸21 098.63 mg/kg。另外，100 g 干品紫丁香蘑含粗多糖1.87 g、脂肪0.7 g，蛋白质37.0 g 。紫丁香蘑粗多糖具有抗氧化能力，可见紫丁香蘑是一种低脂肪、高蛋白的很有开发价值的食用菌[7]。

3 结论与讨论

紫丁香蘑是一种很有开发价值的食药菌种，具有抗菌活性、抗氧化性、抗病毒及肿瘤等多种功效。笔者采用液体和固体培养基相结合的方式大大缩短了制种周期，紫丁香蘑栽培种菌丝生长均匀一致和菌龄整齐，提高了栽培种质量。利用高粱秸秆为主料栽培紫丁香蘑生长周期较短，成本低，经济效益好，但是在栽培紫丁香蘑试验过程中遇到蛞蝓、螨虫等虫害，以及鬼伞菌、胡桃肉状菌、白色石膏霉等杂菌污染。因此，还需要进一步研究紫丁香蘑生长最佳的温度、湿度、光照等环境条件，建立科学有效的病虫害防治措施，才能得到产量高、菇形正、色泽好的紫丁香蘑子实体。