血液分析仪RBC-O和R-MFV参数在纠正冷凝集标本MCHC中的作用

李 敏， 李建英， 罗国菊， 郭 野

（1.潍坊市人民医院检验科，山东 潍坊 261041；2.中国医学科学院北京协和医院检验科，北京 100730）

冷凝集是指在低温条件下红细胞（red blood cell，RBC）发生可逆性凝集，标本发生冷凝集会导致RBC计数假性减少和体积假性增高的结果。目前，临床实验室在进行血细胞分析时，如遇到冷凝集标本，较普遍的处理方式有37 ℃水浴30 min或进行血浆置换，基本能达到将平均红细胞血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）纠正到＜380 g/L的预期效果，但这些处理方式均需要一定的时间，操作步骤相对繁琐，且人工干预的步骤均会造成检测结果产生一定程度的误差。如何利用好血液分析仪的参数，在短时间内有效地解决问题，是对检验人员提出的挑战。有研究发现，冷凝集标本41 ℃加热1 min后检测，或利用血液分析仪的网织红细胞（reticulocyte，RET）通道检测的纠正效果比37 ℃水浴2 h的效果更好[1]。R-MFV、RBC-O是血液分析仪的研究参数，可通过计算纠正MCHC，无需额外的孵育或置换时间。目前尚未见有关联合应用RET通道RBC-O参数和电阻抗通道R-MFV参数计算MCHC来纠正冷凝集标本检测结果的报道。本研究在评估无冷凝集标本R-MFV、RBC-O的可应用性后，探讨R-MFV、RBC-O联合应用在纠正冷凝集标本MCHC中的价值。

1 材料和方法

1.1 样本收集

随机取2021年8月中国医学科学院北京协和医院临床送检血常规的20例无冷凝集标本血液分析仪检测结果。另收集2021年6—8月中国医学科学院北京协和医院住院患者临床送检血常规的15例冷凝集标本。冷凝集判断标准：MCHC≥380 g/L，RBC、血细胞比容（hematocrit，HCT）、血红蛋白（hemoglobin，Hb）之间不符合“3规则”[2]，放入4 ℃冰箱5 min有肉眼可见的冷凝集现象[3]。

1.2 仪器与试剂

XN-9100全自动血液分析仪（日本Sysmex公司）及配套试剂、质控品，该仪器电阻抗通道以鞘流电阻抗法检测RBC，RBC-I和R-MFV为该通道研究参数；RET通道采用半导体激光流式细胞术（flow cytometry，FCM）+核酸荧光染色法检测RBC，RBC-O为该通道的研究参数。

1.3 标本处理与质量控制

每日测定3个水平配套质控品，确保结果均在控。无冷凝集标本常规上机检测。冷凝集标本分别用3种方法处理。（1）37 ℃水浴法：将冷凝集标本与含2.0 mL 0.9%NaCl溶液的稀释液一同置于37 ℃水浴箱内孵育30 min，吸取10 μL迅速加入2.0 mL温0.9%NaCl溶液中混匀，滴到计数板上，待RBC在计数板中分布均匀后，采用显微镜法[4]计数RBC。（2）血浆置换法：将标本1 500×g离心3 min，弃去血浆，加入等量0.9% NaCl溶液混匀，重复血浆置换步骤2遍，上机检测。（3）RET通道MCHC检测：采用XN-9100全自动血液分析仪RET通道检测MCHC（记为MCHC-O）。（4）通过RBC-O和R-MFV计算MCHC：用RBC-O替换RBC-I，R-MFV替换红细胞平均体积（mean corpuscular volume，MCV），通过公式MCHC=Hb/（RBC-O×RMFV）计算MCHC（记为MCHC计算）。

1.4 结果判定

（1）采用Bland-Altman法比较20例无冷凝集标本RBC-I与RBC-O、MCV与R-MFV的一致性。以测量结果的差值为纵坐标，均值为横坐标，绘制散点图，并标注出95%一致性界限（±1.96s）。如果2个测量结果的差值均位于95%一致性界限内，则判定为2种方法结果具有较好的一致性[5]。

（2）以37 ℃水浴法为参考方法，分别计算15例冷凝集标本RET通道、血浆置换法RBC计数结果与参考方法的差值，以差值为90%～110%为可接受范围。

（3）以MCHC＜380 g/L，RBC、HCT、Hb之间符合“3规则”为纠正合格。统计RET通道、血浆置换法和通过RBC-O、R-MFV计算MCHC达到纠正标准的标本数。

2 结果

2.1 RBC-I与RBC-O、MCV与R-MFV的一致性

RBC-I与RBC-O、MCV与R-MFV的差值均在95%一致性界限内，一致性好。见图1、图2。

图1 无冷凝集标本RBC-I与RBC-O一致性分析

图2 无冷凝集标本MVC与R-MFV一致性分析

2.2 冷凝集标本处理前后RBC计数结果

除1例冷凝集标本血浆置换法与参考方法差值为60.5%外，其他14例标本与参考方法差值均为90%～110%。冷凝集标本直接上机检测、37 ℃水浴法、RET通道检测、血浆置换法RBC计数结果见表1。

表1 15例冷凝集标本不同方法RBC计数结果

2.3 采用不同方法纠正冷凝集标本MCHC的效果比较

RET通道、血浆置换法和通过RBC-O、R-MFV计算MCHC，分别有5、13、14例达到纠正要求。见表2、图3。

表2 15例冷凝集标本不同方法红系参数纠正结果

图3 3种方法MCHC结果比较

3 讨论

XN-9100全自动血液分析仪检测RBC的原理为电阻抗法，RBC通过小孔时，形成相应大小的脉冲，脉冲的数目代表RBC的数量，脉冲的高度代表单个细胞的体积，脉冲高度叠加，经换算即可得出HCT的值。Hb测定原理为在稀释的血液中加入溶血剂，将RBC溶解，释放出Hb，后者与溶血剂中相关成分结合形成Hb衍生物，进入Hb测试系统进行比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成正比[6]。在冷凝集标本中，RBC凝集成团，体积增大，聚集后体积超过250 fL时RBC计数会假性减少；多个RBC聚集后形成的RBC团在通过计数孔时引起脉冲增大，会导致MCV假性升高，凝集的RBC使MCV增高，同时RBC计数减少，但以RBC计数减少为主，因此HCT也随之降低，并造成了由RBC、Hb、HCT计算得到的MCHC结果异常升高[7]。Hb检测为比色法，不受影响，对于冷凝集标本而言，Hb是电阻抗通道提供的不受影响的相对“真值”，可以直接应用。

血液分析仪RET通道的分析原理为半导体激光FCM+核酸荧光染色，且配置41 ℃液体加热设备，故理论上通过RET通道可排除冷凝集干扰，得到可靠的RBC-O[6]。RBC体积服从正态分布，R-MFV与MCV在理论上是一致的[8]。因MCV是所有进入检测范围（25～250 fL）内单个、聚集的RBC体积的平均值，而当RBC体积按大小排序时，聚集的RBC因体积大会排在后边，因此R-MFV未纳入或仅纳入一部分聚集的RBC，其R-MFV也较MCV可靠，理论上更接近于RBC平均体积的“真值”。本研究结果显示，无冷凝集的标本RBC-I与RBC-O、MCV与R-MFV检测结果具有较好的一致性，与相关研究结果[6]一致。

本研究结果显示，RET通道检测与37 ℃水浴法（参考方法）RBC计数的差值均为90%～110%，而血浆置换法5号样本与参考方法RBC计数的差值（60.5%）超出界限，未达到纠正效果，但通过RBC-O和R-MFV计算，则达到了纠正效果；本研究15例冷凝集标本纠正结果显示，仅7号标本未能通过研究参数计算的方法纠正（血浆置换法可以纠正）；2号和5号标本血浆置换法未达到纠正标准，但通过RBC-O和R-MFV计算可以纠正；8号标本的MCHC＜380 g/L，但RBC、HCT与Hb之间不符合“3规则”，放置于冰箱5 min后，管壁上可看到凝集颗粒，因此在遇到RBC、HCT与Hb含量不成比例时，建议先确认是否存在冷凝集；13号标本因标本凝集成块，初次检测无结果，因此将标本37 ℃水浴30 min后上机检测，结果几乎无偏差。对RET通道、血浆置换法、通过RBC-O和R-MFV计算MCHC均可达到纠正要求（＜380 g/L）的标本（4、8、11、13号），MCHC和MCV结果有一定的偏差，但因为尚无可参考的金标准，无法判断哪种方法纠正后的结果更接近真值，建议在报告中进行相应的描述，仅供临床参考。

冷凝集标本虽然可以通过水浴后稀释、血浆置换、水浴后灌板计数、温浴后稀释等方法进行处理，但这些方法都需要一定的时间，并且人工干预造成的误差也不可控制[1]。本研究15例冷凝集标本通过研究参数换算的方法有14例达到了纠正效果，纠正率＞90%，为冷凝集标本的处理提供了一种快速的解决方法。然而，RET通道的RBC直方图显示明显不呈正态分布时，R-MFV不适用，此时可采用水浴或水浴后稀释、血浆置换等方法纠正冷凝集标本。

本研究基于工作中冷凝集标本的处理经验，发现血浆置换优于37 ℃ 30 min水浴的纠正效果，因此将血浆置换法与通过RBC-O、R-MFV计算的MCHC结果进行了比较，发现计算的纠正效果较优，但本研究标本例数较少，未来在实际工作中会不断验证RBC-O与R-MFV的应用价值。