ApoE基因多态性与糖尿病肾病及血脂水平的关系

左腾子，李 伟

徐州医科大学附属宿迁医院/南京鼓楼医院集团宿迁医院内分泌科，江苏宿迁 223800；2.徐州医科大学附属医院内分泌科，江苏徐州 221000

糖尿病是一种慢性病，近年来，我国糖尿病发病率明显升高，18岁及以上人群中糖尿病患病率为11.2%，随着糖尿病患病率的不断升高，与此相关的并发症的发生也进一步加重了患者负担[1-3]。糖尿病肾病(DN)是主要的糖尿病并发症之一，在2型糖尿病患者中发病率在25%以上，最终将导致终末期肾衰竭，比肾病综合征更加棘手[4-6]。DN的病因和发病机制尚无定论，一般认为与机体免疫功能紊乱相关，遗传因素在其中起到关键性的作用[7]。有研究指出，载脂蛋白E(ApoE)通过与低密度脂蛋白(LDL)受体结合，直接参与脂蛋白代谢[8-9]。本研究通过分析ApoE基因多态性与DN、血脂水平的相关性，探讨ApoE基因在DN发病中的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2017年10月至2021年10月本院收治的60例DN患者纳入DN组，另选取60例年龄匹配的2型糖尿病未并发肾病患者作为单纯2型糖尿病组。DN组中男31例，女29例；年龄48～74岁，平均(62.81±4.67)岁；体质量指数(BMI)20.77～23.28 kg/m2，平均(21.67±0.35)kg/m2；病程10～21年，平均(13.86±3.76)年。单纯2型糖尿病组中男33例，女27例；年龄51～76岁，平均(63.19±4.98)岁；BMI 20.84～23.32 kg/m2，平均(21.74±0.42)kg/m2；病程10～23年，平均(14.08±4.01)年。两组患者年龄、性别、病程、BMI比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。2型糖尿病诊断标准参考《中国2型糖尿病防治指南(2020年版)》[10]中相关标准：(1)有糖尿病症状，如多尿、多饮、多食、无原因体质量骤降，或任意时刻血糖≥11.1 mmol/L；(2)空腹血糖(FPG)≥7.0 mmol/L；(3)口服葡萄糖耐量试验2 h后血糖≥11.1 mmol/L；(4)糖化血红蛋白(HbA1c)≥6.5%。满足其中任意一条即可诊断为2型糖尿病。DN的诊断标准[11]：肾小球滤过率(GRF)<60 mL/(min·1.73 m2)或尿清蛋白肌酐比值(UACR)≥30 mg/mmol且持续超过3个月的2型糖尿病患者。排除标准：(1)1型糖尿病；(2)合并免疫、血液系统疾病；(3)合并术后感染；(4)合并恶性肿瘤；(5)合并精神疾病；(6)进行肾脏病理组织活检，光镜下肾小球数量少于5个；(7)妊娠、哺乳期女性。所有研究对象均自愿参与本研究，并签署知情同意书，本研究经本院医学伦理委员会审批。

1.2方法 采集所有患者清晨空腹静脉血5 mL，取3 mL静脉血使用AU5800全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特有限公司)检测总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)水平。另取2 mL静脉血加入抗凝剂，苯酚/氯仿法抽提DNA，进行聚合酶链反应(PCR)扩增，再进行ApoE基因检测。

1.3观察指标 (1)比较两组血脂水平；(2)比较两组ApoE基因型频率，分为ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4；(3)比较两组ApoE等位基因分布，将ε2/2、ε2/3记为E2，ε3/3记为E3，ε3/4、ε4/4记为E4，由于ε2/4占比极少，且ε2、ε4对血脂的作用效果相悖[12]，统计时排除；(4)比较E2、E3、E4等位基因患者血脂水平。

2 结 果

2.1两组血脂水平比较 DN组HDL-C水平低于单纯2型糖尿病组，差异有统计学意义(P<0.05)。两组血清TC、LDL-C、TG水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组血脂水平比较

2.2两组ApoE基因型频率比较 DN组ε2/2、ε2/3基因型频率高于单纯2型糖尿病组，ε3/4基因型频率低于单纯2型糖尿病组，差异有统计学意义(P<0.05)，两组ε2/4、ε3/3、ε4/4基因型频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3两组ApoE等位基因分布比较 DN组ApoE E2等位基因频率明显高于单纯2型糖尿病组，E4等位基因频率明显低于单纯2型糖尿病组，差异有统计学意义(P<0.05)，两组E3等位基因频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2.4不同等位基因患者的血脂水平比较 E2等位基因患者TG水平明显高于E3和E4等位基因患者，差异有统计学意义(P<0.05)。E2、E3和E4等位基因患者TC、HDL-C、LDL-C水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表2 两组ApoE基因型频率比较[n(%)]

表3 两组ApoE等位基因分布比较[n(%)]

表4 不同等位基因患者的血脂水平比较

3 讨 论

DN发病率高且起病隐匿，最终会进展为慢性肾衰竭，患者将依赖透析维持生命，DN是降低患者生活质量的元凶[13-15]。DN的发病机制尚无定论，有研究指出DN的发生与代谢紊乱、遗传因素、氧化应激等有关[16]。相关研究显示，ApoE水平为DN的影响因素，明确ApoE基因多态性与DN的相关性，有助于从分子水平阐释DN的发病机制并鉴别DN高危患者，对DN的早期防治有积极意义[17-19]。

ApoE基因由19号染色体上的基因编码，共含有299个氨基酸，具有3种常见的等位基因E2、E3、E4，共计6种基因型ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4，其中ε3/3被认为是野生型基因，在健康人、患者体内的基因型频率均较高[20-21]。LIN等[22]的研究指出亚洲人群中，ApoE E2等位基因的携带者发生DN的风险更高，其中糖尿病病程>10年的患者E2等位基因频率与DN的发生、发展密切相关，但在病程≤10年的患者群体内二者关系未明确。其原因可能有以下几点：(1)E2等位基因与LDL受体结合后的生物学功能受限，导致TG的清除不及时，血浆脂蛋白积累，引起DN的进展；(2)ApoE基因引起肾小球系膜细胞聚集并累积，加重肾小球的病变程度，进一步损伤肾功能；(3)与ApoE E3、E4等位基因对肾小球系膜细胞的保护作用相比，E2等位基因对肾功能的保护作用不明显。姚琼等[23]分析了ApoE基因多态性与高脂血症患者降脂疗效的相关性，认为ApoE基因的表达与患者血脂情况关系密切，这是由于ApoE基因型表达的蛋白受体与LDL-C结合能力不同导致。

本研究分析了不同ApoE等位基因患者血脂水平，发现E2等位基因患者TG水平明显高于E3和E4等位基因患者(P<0.05)，验证了ApoE E2等位基因可影响脂代谢，引起TG积累，E2等位基因可能是DN进展过程中的危险因素[24]。除此之外，本研究发现DN组HDL-C水平低于单纯2型糖尿病组，ε2/2、ε2/3基因型频率高于单纯2型糖尿病组，ApoE E2等位基因频率明显高于单纯2型糖尿病组，说明DN的发生与ApoE E2等位基因(ε2/2、ε2/3基因)的高表达、HDL-C低表达具有密切相关，推测是因为E2等位基因频率过高，引起糖尿病患者体内TG积累，高甘油三酯血症可引起HDL-C水平降低；HDL-C具有抗动脉粥样硬化的作用，不仅可以促进胆固醇排泄，还可以加速极低密度脂蛋白胆固醇代谢，减少动脉壁脂质沉积，而当糖尿病患者体内出现脂代谢紊乱时，HDL-C水平降低，可促进肾动脉粥样硬化的发生，进而诱发DN。值得注意的是ApoE等位基因的分布存在种族、地域差异，检测方法的不同也对ApoE基因型的统计结果有一定影响，所以对不同地域、种族人群ApoE多态性与DN的关系研究应有所区分[25]。

综上所述， ApoE ε2/2、ε2/3基因型、HDL-C水平降低与DN发生关系密切，ApoE基因的多态性与2型糖尿病患者TG水平有关。