人脑膜瘤组织Slit2、Robo1的表达与术后复发的关系

罗显华 张淳化 罗长稳 李铭辉

脑膜瘤是颅内常见的肿瘤，多为良性，手术切除治疗效果良好，但是部分脑膜瘤具有侵袭性，术后易复发，预后往往较差[1]。神经生长导向因子Slit 及其细胞膜受体Roundabout（Robo）属于分泌蛋白家族，其成员包括Slit1、Slit2、Slit3、Robo1、Robo2、Robo3、Robo4。Slit2/Robo1 信号通路在神经元迁移及轴突生长中起重要作用[2]。研究发现，Slit2/Robo1信号通路具有调节白细胞趋化的作用[3]，还可以通过影响肿瘤微环境来影响肿瘤细胞的增殖迁移，进而参与胶质瘤等肿瘤的发生发展[4]。本文探讨人脑膜瘤组织Slit2、Robo1 的表达与术后复发的关系，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 标本来源 纳入标准：病理检查证实为脑膜瘤；病例资料完整。排除标准：合并其他部位肿瘤；合并严重心肝肾等脏器功能障碍；复发性脑膜瘤；有颅脑损伤病史。选取2016年1月至2021年4月手术切除的脑膜瘤组织104 例，其中男61 例，女43 例；年龄56～71 岁，平均（57.01±10.12）岁；肿瘤直径2～8 cm，平均（4.58±1.87）cm；肿瘤位于大脑凸面51 例、大脑镰和矢状窦旁30例、其他23例；侵袭性脑膜瘤46例（指向邻近脑组织、硬脑膜、静脉窦、颅骨等浸润生长[5]）；瘤周围重度水肿48例（瘤周水肿指数＞3[6]）；癫痫39例，颅内压升高12例，视力下降30例，肢体运动障碍8例。另选取颅脑损伤内减压术切除的非肿瘤脑组织50例（对照组），其中男29例，女21例；年龄53～68 岁，平均（55.90±5.76）岁。本研究经过医院伦理委员会批准。

1.2 检测方法 用免疫组织化学染色法检测Slit2 和Robo1的表达水平。10%中性福尔马林（上海远慕生物科技有限公司）固定，随后梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片（厚度4 μm）。用二甲苯脱蜡，乙醇水化，柠檬酸钠抗原修复液（上海语纯生物科技有限公司）进行抗原修复，随后用羊血清封闭。按照免疫组化SP法检测试剂盒（上海远慕生物科技有限公司）操作。一抗兔抗人Slit2单克隆抗体（1:500，美国Sigma公司）或兔抗人Robo1单克隆抗体（1:1 000，美国Sigma）4 ℃孵育过夜。二抗酶标羊抗兔抗体（美国Sigma公司）室温孵育1 h，DAB显色，苏木精复染，显微镜下观察。染色为棕黄色颗粒视为表达阳性（图1）。随机选择10个高倍（400倍）视野，每个视野随机选100 个细胞，进行染色评分。染色强度的评分方法：未着色0 分，浅黄色1 分，棕黄色2 分，棕褐色3 分。阳性细胞比例评分：≤5%为0 分，6%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，＞75%为4分。将染色强度评分和阳性细胞比例评分相乘，≥4分为高表达[7]。

1.3 术后随访 术后3、6、9、12个月复查MRI，判断是否复发。复发定义为原已消失或缓解的临床症状、体征又出现，影像学检查或再次手术发现原手术部位脑膜瘤再次生长[8]。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计量资料用±s表示，用t检验；计数资料采用χ2检验；用多因素logistic 回归模型分析脑膜瘤术后复发的影响因素；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 术后复发率104例中，术后1年内复发22例，复发率为21.15%。

2.2 脑膜瘤组织Slit2、Robo1 的表达水平 脑膜瘤组织Slit2 低表达率[37.50%（39/104）]明显低于对照组[70.00%（35/50）；P＜0.05]。脑膜瘤组织Robo1高表达率[59.61%（62/104）]明显高于对照组[34.00%（17/50）；P＜0.05]。

2.3 脑膜瘤术后复发的影响因素 单因素分析发现，肿瘤直径、侵袭性生长、瘤周水肿、WHO 分级、肿瘤切除程度、Slit2 和Robo1 表达水平是脑膜瘤术后复发的影响因素（P＜0.05，表1）。多因素logsitic回归分析显示，肿瘤直径≥5 cm、侵袭性生长、重度瘤周水肿、WHO分级Ⅲ级、肿瘤未全切除、Slit2低表达、Robo1 高表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素（P＜0.05，表2）。

表1 本文104例脑膜瘤术后复发危险因素的单因素分析

表2 本文104例脑膜瘤术后复发危险因素的多因素logistic回归分析

3 讨论

Slit2 基因定位于染色体4p15.2，其蛋白可以由神经胶质细胞合成，属于分泌性糖蛋白。Slit2 具有调节轴突导向及神经元迁移的作用，并且影响血管内皮细胞增殖及包细胞趋化[9]。Slit2 表达异常与中枢神经系统疾病有关，如胶质瘤和阿尔茨海默病[10]。近年来研究发现，Slit2可以刺激其受体Robo1表达，诱导血管生成，进而影响肿瘤生长[11]。研究证实，Slit2/Robo1 信号通路可通过影响肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、免疫反应，参与白血病[12]、结直肠癌[13]、宫颈癌[14]等发生发展。有研究发现脑胶质瘤Slit2表达水平较低，而Robo1表达水平较高，并且Slit2和Robo1 是影响胶质瘤生存预后的影响因素[15]。本文发现，Slit2 及Robo1 阳性主要定位于细胞核和细胞质，脑膜瘤组织Slit2 表达降低，而Robo1 表达增高，提示Slit2/Robo1信号通路可能参与脑膜瘤的发生。

脑膜瘤术后复发受多种因素影响，文献报道脑膜瘤术后1 年复发率可达19%[16]。本文104 例脑膜瘤，术后1年复发率为21.15%。有研究发现，脑膜瘤术后复发的影响因素包括，肿瘤大小、侵袭性生长、瘤周水肿、WHO分级、肿瘤切除程度[17～19]。本文结果与此相符。另外，本文发现，Slit2低表达和Robo1过表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素。这可能是Slit2/Robo1 信号通路降低细胞间的粘附能力，使肿瘤细胞生长，导致增殖和侵袭的发生，增加复发风险[13]。另外，Slit2/Robo1信号通路导致细胞运动能力受到影响，损伤细胞外基质，增强肿瘤细胞抗凋亡作用[20]。此外，Slit2/Robo1信号通路介导的免疫炎症损伤也是脑膜瘤术后复发的重要原因之一[21]。

总之，脑膜瘤组织Slit2表达水平降低，而Robo1表达水平升高，Slit2 低表达和Robo1 高表达是脑膜瘤术后复发的独立影响因素。这提示Slit2/Robo1信号通路可能参与脑膜瘤进展。