脑星形胶质细胞瘤CPE的表达及其与病人预后的关系

兰伟途 武 峰 何建昌 兰文达 王万宏

星形胶质细胞瘤预后不良[1]。羧肽酶E（carboxypeptidase E，CPE）是神经递质及激素肽类物质合成的关键酶[2]。研究发现，CPE影响肿瘤细胞增殖、侵袭和上皮间质转化等过程[3～5]。有研究发现，CPE 基因过表达可以抑制胶质瘤细胞的迁移，并且延长胶质瘤小鼠的生存期[6]。本文分析脑星形胶质细胞瘤CPE的表达及其与病人预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2011 年3 月至2012 年3 月手术切除的脑星形胶质细胞瘤68 例，其中男40 例，女28例；年龄37～64 岁，平均（46.38±5.03）岁；毛细胞型（WHO 分级Ⅰ级）20例（额叶14例，颞叶4例，顶叶2例），弥漫型（WHO 分Ⅱ级）22 例（额叶14 例，颞叶5例，顶叶3 例），间变型（WHO 分Ⅲ级）26 例（额叶14例，颞叶4例，顶叶8例）。纳入标准：年龄≥18岁；术后病理检查证实为星形胶质细胞瘤；术前未接受放/化疗；临床资料完整。排除标准：合并其它肿瘤；合并免疫或代谢性疾病。

1.2 免疫组化染色检测CPE 的表达水平 用免疫组织化学染色法检测星形胶质细胞瘤组织CPE的表达水平。组织经过10%中性福尔马林固定液（上海懋康生物科技有限公司）固定，随后梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片（厚度为4 μm）。用二甲苯脱蜡，乙醇水化，柠檬酸钠抗原修复液（青岛捷世康生物科技有限公司）进行抗原修复，随后用羊血清封闭。按照免疫组化SP法检测试剂盒（河南博欣生物科技有限公司）说明书操作，滴加兔抗人CPE单克隆抗体（1:500，上海钰博生物科技有限公司），4 ℃孵育过夜。随后滴加酶标羊抗兔抗体（上海钰博生物科技有限公司），DAB显色，苏木精复染，最后中性树胶封闭，显微镜下观察。染色为棕黄色颗粒视为表达阳性（图1），随机选择10个高倍镜（×200）下视野，每个视野随机选100 个细胞，进行染色评分。染色强度的评分方法：未着色记0分，浅黄色记1分，棕黄色记2 分，棕褐色记3 分。阳性细胞比例评分：≤5%记0分；6%～25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记3 分，＞75%记4 分。染色强度评分和阳性细胞比例评分相乘，高于4分为高表达[7]。

图1 脑星形胶质细胞瘤CPE免疫组织化学染色（SP法，×200）

1.3 随访 术后进行门诊和电话随访。随访截止2022 年3 月。总生存时间（overall survival，OS）为确诊当日至死亡或者随访截止时间。

1.4 统计学方法 用SPSS 20.0软件处理；计量资料以±s表示，用t检验；计数资料用χ2检验；用多因素Cox比例回归风险模型分析预后的影响因素；用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线分析CPE 表达水平与病人预后的关系；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 星形胶质细胞瘤CPE 的表达WHO 分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级星形细胞瘤CPE 高表达率分别为65.00%（13/20）、45.45%（10/22）、34.62%（9/26）。WHO 分级Ⅲ级星形细胞瘤CPE 高表达率明显高于WHO 分级Ⅰ级、Ⅱ级星形细胞瘤（P＜0.05）。

2.2 星形胶质细胞瘤生存预后的影响因素 单因素分析显示，年龄、WHO 分级、术后放疗、术后化疗、CPE 表达与星形胶质细胞瘤的生存预后有关（P＜0.05，表1）。多因素Cox回归分析显示，年龄≥50岁、WHO分级为Ⅲ、术后未放疗、术后未化疗、CPE低表达是星形胶质细胞瘤患存预后不良的独立影响因素（P＜0.05，表1）。

表1 本文86例脑星形胶质细胞瘤不良生存预后危险因素的Cox回归分析

2.3 CPE 表达水平与星形胶质细胞瘤生存预后的关系 随访期间，死亡7 例（低表达组4 例，高表达组3例）。生存曲线分析显示CPE 低表达组中位OS[12个月，9～38个月）明显低于高表达组[18个月，14～44；P＜0.05；图2]。

图2 生存曲线分析CPE 表达水平与星形胶质细胞瘤生存预后的关系

3 讨论

CPE 也叫脑啡肽转化酶或羧肽酶H，属于金属羧肽酶基因家族成员之一，其编码的基因位于人类染色体4q32.3。CPE 主要参与神经肽的合成[8]。研究发现，CPE 在不同类型的神经内分泌肿瘤和转移性非神经内分泌肿瘤中表达，不仅参与神经内分泌肿瘤进展，还与多种非神经内分泌肿瘤有关，例如胰腺癌[3]、肺癌[4]和骨肉瘤[5]，可能与其激活ERK1/2信号通路、上调抗凋亡蛋白BCL-2表达有关[9]。

本文结果显示，随星形胶质细胞瘤WHO分级增高，CPE表达水平逐渐下降，提示CPE可参与脑星形胶质细胞瘤的进展。CPE在胶质瘤中的作用机制少有报道。Ilina 等[10]发现，CPE 降低乳酸产生并增强三羧酸循环，从而减少有氧糖酵解，最终减少胶质瘤细胞的侵袭。另外，CPE 基因过表达可以抑制胶质瘤细胞的迁移，并且延长胶质瘤小鼠的生存期[6]。本文发现，CPE 低表达是星形胶质细胞瘤生存预后不良的独立影响因素，CPE 低表达星形胶质细胞瘤病人的总生存期明显缩短。

总之，随WHO 分级升高，星形胶质细胞瘤CPE表达水平逐渐降低，CPE 低表达与脑星形胶质细胞瘤不良生存预后有关。