胶质母细胞瘤PPFIBP1的表达及其临床意义

王昆鹏 张建党 董孟宁 刘素杰 徐广建

胶质母细胞瘤是恶性程度最高的原发性脑肿瘤，WHO 分级Ⅳ级，尽管近年来诊治技术有了很大进展，但是病人生存期仅12～15 个月[1，2]。胶质母细胞瘤的发病机制尚不清楚。LAR蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白（LAR protein-tyrosine phosphataseinteracting protein，LIPRIN）家族在淋巴管形成、神经突触发育过程中起着重要作用[3]，该家族包括四种脂蛋白α（α1～α4）和两种脂蛋白β（β1、β2）[4]。脂蛋白β 1，也 被 称 为PPFIA 结 合 蛋 白1（PPFIA binding protein 1，PPFIBP1），在肿瘤细胞粘附的过程中具有重要作用[3]。研究发现，PPFIBP1促进乳腺癌及黑色素瘤细胞的侵袭和迁移[4，5]，与卵巢癌病人不良生存预后有关[6]。本文探讨脑胶质母细胞瘤PPFIBP1 表达及其与病人生存预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 纳入标准：病理检查证实为胶质母细胞瘤；首次入院；术前未接受放/化疗。排除标准：复发性胶质母细胞瘤；合并其他部位肿瘤；合并严重心肝肾等脏器疾病；合并免疫性疾病。选取2011 年6月至2018 年6 月手术切除的胶质母细胞瘤116 例，其中男61 例，女55 例；年龄18～76 岁，平均（50.09±10.21）岁。另选取2020 年6 月至2021 年12 月颅脑减压术中切除的非肿瘤脑组织68例（对照组），其中男39例，女29例；年龄21～68岁，平均（48.45±12.20）岁。

1.2 免疫组化染色检测组织PPFIBP1表达10%中性福尔马林（南京森贝伽生物科技有限公司）固定组织，随后梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片（厚度4 μm）。用二甲苯脱蜡，乙醇水化，柠檬酸钠抗原修复液（上海如吉生物科技发展有限公司）进行抗原修复，随后用羊血清封闭。按照免疫组化SP法检测试剂盒（上海如吉生物科技发展有限公司），滴加一抗兔抗人PPFIBP1单克隆抗体（1:500，美国Sigma公司）4 ℃孵育过夜。PBS洗涤后，滴加酶标羊抗兔二抗（1:500美国Sigma公司），DAB显色，苏木精复染，显微镜下观察。染色为棕黄色颗粒视为表达阳性（图1），随机选择10个高倍视野，每个视野随机选100 个细胞，进行染色评分。染色强度的评分方法：未着色0 分，浅黄色1 分，棕黄色2 分，棕褐色3 分。阳性细胞比例评分：≤5%为0 分，6%～25%为1 分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色强度评分和阳性细胞比例评分相乘，≥4分为高表达[7]。

图1 免疫组化法检测组织PPFIBP1的表达（SP法，×100）

1.3 随访 术后门诊或电话随访，截止2021 年6 月。记录总生存期和无进展生存期。总生存期定义为术后1 d至死亡或者最后一次随访的时间，无进展生存期定义为术后1 d 至第一次疾病进展或者任何原因导致死亡的时间[8]。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0软件分析，计量资料以±s表示，用t检验；计数资料用χ2检验；用多因素Cox 比例回归风险模型分析生存预后影响因素；用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线分析PPFIBP1 表达水平与预后的关系；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胶质母细胞瘤PPFIBP1 的表达 胶质母细胞瘤组织PPFIBP1 高表达率[67.24%（78/116）]明显高于对照组[17.65%（12/68）；P＜0.05]。

2.2 胶质母细胞瘤病人生存预后的影响因素 多因素Cox回归分析显示，年龄≥50岁、肿瘤未全切除、术后未放/化疗、PPFIBP1 高表达是胶质母细胞瘤病人总体生存预后和无进展生存预后不良的独立危险因素（P＜0.05，表1）。

表1 本文116例胶质母细胞瘤生存预后影响因素的多因素Cox比例回归风险模型分析

2.3 PPFIBP1 表达水平与胶质母细胞瘤病人生存期的关系 生存曲线分析显示，高表达组中位总体生存期为12 个月（9～38 个月），中位无进展生存期为11个月（8～42个月）；低表达组分别为17个月（14～47个月）、18个月（14～48个月）。高表达组中位总体生存期和中位无进展生存期较低表达组均明显缩短（P＜0.05，图2）。

图2 生存曲线分析PPFIBP1表达水平与胶质母细胞瘤病人生存预后的关系

3 讨论

胶质母细胞瘤属于WHO分级Ⅳ级胶质瘤，恶性程度高，手术、放疗和化疗是常用治疗方式[9,10]，但是病人的生存时间仅有12～15 个月[2]。研究胶质母细胞瘤的生物学标志物对胶质母细胞瘤的诊治具有重要意义。

LIPRIN 蛋白是细胞形成复杂结构的多价蛋白，与 细胞侵袭和迁移 有关[3，11，12]。PPFIBP1 是LIPRIN家族的重要成员之一，其基因可以编码脂蛋白β1。研究发现，PPFIBP1 与肿瘤发生、发展有关，其机制涉及细胞的异常融合、局部染色体扩增、基因选择性剪接[8，13]。有研究发现，PPFIBP1 可以促进乳腺癌及黑色素瘤细胞侵袭和迁移[4，5]。体外研究发现，PPFIBP1 可能通过FAK/Src/JNK 信号通路促进胶质细胞的侵袭和迁移[14]。本文结果显示胶质母细胞瘤PPFIBP1 呈高表达，而且与病人不良预后有关。这提示PPFIBP1 有可能是胶质母细胞瘤的生物标志物。未来需要开展细胞和动物研究进一步证实PPFIBP1在胶质母细胞瘤中的作用及机制。