乳腺癌中葡萄糖转运蛋白-1和p53蛋白表达水平与临床病理特征及预后的关系

管洁，戴北飞，何丹，唐磊，姚苗苗

(1.湖南航天医院，湖南 长沙 410006；2.邵阳市中医医院，湖南 邵阳 422000)

乳腺癌发病率、病死率在女性恶性肿瘤中占第一位，且每年以3%～4%速度不断增加，对女性生命健康造成严重威胁。细胞过度增殖与乳腺癌发生、进展关系密切，细胞增殖需大量耗氧，可致细胞缺氧而产生相关蛋白，促使细胞适应低氧环境[1-2]。葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)属于内源性乏氧标记物，其高表达可使恶性细胞在乏氧环境下获取能量，以快速生长、增殖、转移、侵袭[3]。p53蛋白是重要的肿瘤基因编码蛋白，可影响细胞的低分化，参与细胞错配修复机制的形成，在肿瘤的发生、进展中起重要作用[4]。本研究分析了乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1表达水平与临床病理特征及预后的关系，为临床诊治提供新的思路。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年1月—2020年9月行手术治疗的64 例乳腺癌患者的乳腺癌组织标本作为乳癌组，取距离癌组织3 cm的癌旁正常组织为癌旁组。患者年龄(57.32±2.46) 岁；病程(3.15±0.21) 年；黏液性囊腺癌2 例，单纯癌35 例，硬癌3 例，侵袭性导管癌15 例，髓样癌2 例，侵袭性小叶癌1 例，乳头状癌3 例，腺癌2 例，导管内癌1 例。纳入标准：经病理组织检查确诊为乳腺癌；病历资料完整。排除标准：严重免疫力低下；精神异常；存在血液系统疾病；术前接受化疗、放疗或生物免疫治疗；合并其他恶性肿瘤。

1.2 方法

连续切片，每例组织蜡块均切成4 μm厚度切片(4 块)，用甲醛溶液固定，石蜡包埋、高温灭菌、载玻片泡酸、多聚赖氨酸涂片等处理，DAB显色剂(试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司)显色，复染(苏木精)，脱水(乙醇)，透明(二甲苯)，封固(中性树胶)，用免疫组化法检测。p53蛋白、GLUT兔多克隆抗体购自美国Epitomics公司。

阳性判断标准：用上海比目仪器厂的光学显微镜(BMD-300E型)观察，GLUT-1定位于细胞膜上，阳性细胞呈棕黄色颗粒状，高倍镜下每个切片选择5 个视野，每个视野内细胞>200 个，阳性细胞≥10%为阳性，反之为阴性。p53蛋白定位于细胞核上，阳性细胞呈棕黄色颗粒状。细胞着色程度：无色为0 分，黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞百分比：阴性为0 分，阳性细胞<25%为1 分，25%～50%为2 分，>50%～75%为3分，>75%为4分。细胞着色评分与阳性细胞百分比评分乘积≥3 分即为阳性，反之为阴性。

1.3 观察指标

比较两组p53蛋白、GLUT-1阳性表达率；分析p53蛋白、GLUT-1阳性表达与临床病理特征、预后(术后1 年生存率)关系，临床病理特征包含年龄、肿瘤部位、月经初潮年纪、肿瘤直径、肿瘤-淋巴结-转移(TNM)分期、淋巴结转移等。

1.4 统计学方法

采用SPSS21.0系统软件进行统计学分析。计数资料以百分率(%)表示，采用 χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组p53蛋白和GLUT-1阳性表达率比较

乳癌组p53蛋白、GLUT-1阳性表达率高于癌旁组，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。p53蛋白、GLUT-1在乳腺癌组织和癌旁组织中表达情况见图1-4。

表1 p53蛋白和GLUT-1阳性表达率比较单位：例(%)

图1 乳腺癌组织p53蛋白阳性表达(SP×500)

图2 癌旁组织p53蛋白阴性表达(SP×500)

图3 乳腺癌组织GLUT-1阳性表达(SP×500)

图4 癌旁组织GLUT-1阴性表达(SP×500)

2.2 p53蛋白和GLUT-1的表达与乳腺癌患者临床病理特征关系

p53蛋白、GLUT-1阳性表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P<0.05)；p53蛋白、GLUT-1阳性表达与乳腺癌年龄、月经初潮年纪、肿瘤直径、肿瘤部位无关，差异无统计学意义(P>0.05)(见表2)。

表2 p53蛋白和GLUT-1阳性表达与乳腺癌患者临床病理特征关系

2.3 p53蛋白和GLUT-1阳性表达与乳腺癌预后的关系

乳腺癌患者术后1 年生存率为79.69%(51/64)。p53蛋白阳性表达者术后1年生存率为70.00%(28/40)，低于阴性表达者的95.83%(23/24)，差异有统计学意义(χ2=4.691，P=0.030)；GLUT-1阳性表达者术后1年生存率为70.73%(29/41)，低于阴性表达者的95.65%(22/23)，差异有统计学意义(χ2=4.218，P=0.040)。

3 讨 论

乳腺癌的发生、进展与抑癌基因、原癌基因的缺失、失活、突变等基因变化关系密切，基因水平异常是恶性肿瘤发生、进展的核心因素，基因表达调控异常或基因突变会增加癌细胞过度扩增风险，促使癌细胞进展[5-6]。

GLUT-1是人体葡萄糖跨膜转运的主要载体，主要在胎盘、细胞膜、血脑屏障中分布，当机体发生恶性肿瘤时，无糖酵解增加，细胞内GLUT-1代谢增强，使GLUT-1呈高表达[7]。p53属于抑癌基因，其中野生型p53基因能调控细胞凋亡、生长，发挥抑癌作用，当转变为突变型p53后，会改变原先抑癌作用，诱导异常基因表达，促使肿瘤发生、进展[8]。本研究结果显示，乳癌组p53蛋白、GLUT-1阳性表达率较癌旁组高；p53蛋白、GLUT-1阳性表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移有关，且p53蛋白、GLUT-1阳性表达者术后1 年生存率均低于阴性表达者。提示乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1呈高表达，其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移和预后密切相关。无限增殖是恶性肿瘤的重要特点，DNA复制期细胞数目明显增加，造成局部微环境处于严重缺氧状态，并可经两条不同途径共同促使GLUT-1过量表达。其中一条途径是氧浓度降低，激活细胞内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)，可结合GLUT-1增强子上HIF-lα的DNA结合位点，引起GLUT-1 5′端的增强子序列活化，造成GLUT-1的mRNA过度表达，并促使其产物大量合成。另一条途径是缺氧对线粒体氧化磷酸化形成抑制，可致GLUT-1内在活性改变，还可刺激其由细胞内囊泡内转移至细胞膜，增加GLUT-1 mRNA的稳定性和刺激GLUT-1基因转录[9]。p53是GLUT-1的上游调控因子，能够通过组织特异性对GLUT-1基因转录形成抑制，降低GLUT-1表达，但当p53蛋白出现突变，上述作用则会丧失。乳腺癌发生后机体多伴有p53 DNA结合区突变，影响p53抑制GLUT-1基因引物转录活性，加快葡萄糖代谢，为细胞肿瘤生长提供能量，促使肿瘤进展[10]。

综上所述，乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1呈高表达，其表达水平与肿瘤严重程度和预后密切相关。