南海产玉足海参的营养成分分析及评价*

肖同杰，陈廿虹，张翠侠，展学孔，宋彦廷

(1 海南大学热带生物资源教育部重点实验室，海南大学药学院，海南 海口 570228；2 海南椰岛酒业发展有限公司，海南 海口 570311)

南海是我国最大的海域，具有丰富的动物资源，包括十几种棘皮动物，以海参、海星、海胆等居多。其中，海参因营养价值和药用价值可媲美人参而得名，位列“八珍”之一[1-2]。海参具有多种养生滋补成分，除了常见的维生素和氨基酸等成分，还含有多种活性物质，譬如海参多糖、皂苷等。有研究表明，海参具有抗真菌、抗肿瘤、降血脂、提高免疫力、抗疲劳等生理活性[3-9]。这些活性成分对于人体大有裨益，也使海参成为深受人们欢迎的滋补圣品。

玉足海参(Holothurialeucospilota)属棘皮动物门，海参纲，楯手目，是海参科，海参属的一种海参，主要分布于我国海南岛等岛屿以及部分沿海城市[10]。2012年海南省成功繁育出玉足海参苗种，2013年玉足海参池塘养殖取得成功并建立规模化的养殖基地[11]。在现有的研究中，大部分学者在对海参的生物活性成分进行提取和检测时，一般直接选用市售的鲜海参，干海参或海参加工品，很少针对某一品种海参所含物质进行分析[12]。本文选用玉足海参，对其水分、灰分、盐分、蛋白质、水溶性总糖、含砂量以及复水后干重率等重要指标和活性成分(海参多糖、海参皂苷、海参脑苷脂和神经酰胺等)进行检测分析和含量测定，以期为南海玉足海参的开发研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验试剂

玉足海参采集于海南省琼海市海域，经煮熟后晒干而成。乙二胺四乙酸，德国BioFRoxx公司；半胱氨酸盐酸盐，德国BioFRoxx公司；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，以上试剂均为分析纯。岩藻糖标准品(纯度：99%)，上海麦克林生化科技有限公司；乳糖标准品(纯度≥98%)，CATO广州佳途科技股份有限公司；葡萄糖标准品(纯度≥98%)，上海源叶生物科技有限公司；神经酰胺标准品(纯度≥98%)，上海准甄生物科技有限公司；葡萄糖脑苷脂标准品(纯度≥98%)，上海源叶生物科技有限公司；人参皂苷Re标准品(纯度≥98%)，上海源叶生物科技有限公司。

1.1.2 实验仪器

旋转蒸发仪N-1100，上海爱朗仪器有限公司；高效液相色谱仪LC-100，上海伍丰科学仪器有限公司；紫外检测器LC-UV100，上海伍丰科学仪器有限公司；蒸发光散射检测器LC-ELSD100，上海伍丰科学仪器有限公司；涡旋混合器XW-80A，上海唐驰电子有限公司；紫外可见分光光度计UV-2600，SHIMADZU岛津公司；马弗炉SX2-NP，上海一恒科学仪器有限公司；真空干燥箱DZF-6020，上海一恒科学仪器有限公司；恒温培养摇床OLB-100C，山东博科科学仪器有限公司。

1.2 分析方法

水分含量依据GB 5009.3-2016采用直接干燥法进行测定[13]；灰分含量依据GB 5009.4-2016采用高温灼烧法进行测定[14]；盐分含量依据GB 5009.44-2016采用银量法进行测定[15]；含砂量及复水后干重率依据GB 31602-2015进行测定[16]；蛋白质含量依据GB 5009.5-2016采用分光光度法进行测定[17]。

1.2.1 水溶性总糖含量测定

取整只干海参，称重，置于1000 mL烧杯中，浸泡24 h，剖开参体，清洗泥沙。过滤洗液，取滤液100 mL置于250 mL圆底烧瓶中，加入30 mL浓盐酸。回流提取3 h，过滤，清洗滤渣，将滤液和洗液合并转移至250 mL容量瓶。

标准曲线制作：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL的葡萄糖标准液(100 mg/L)并转移至10 mL试管，加水至1 mL。依次加入1 mL 5%苯酚溶液、浓硫酸，静置10 min。涡旋混合，30 ℃水浴20 min。于490 nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，制作标准曲线。

样品测定：吸取试样溶液1 mL，按上述方法测定。

1.2.2 海参多糖含量测定

称取海参干粉1 g置于50 mL三角瓶中，加入25 mL 0.1 mol/L乙酸钠缓冲液、37 mg乙二胺四乙酸、22 mg半胱氨酸盐酸盐以及100 mg木瓜蛋白酶，涡旋混匀，60 ℃气浴振荡酶解24 h，9000 r/min离心10 min。取上清液，加入6.13 g乙酸钾，4 ℃静置12 h后，离心收集沉淀，5 mL水溶解后转移至10 mL容量瓶中。

取1 mL试液于5 mL安瓿瓶中，加入1 mL 4 mol/L三氟乙酸溶液，充氮封管，110 ℃水解8 h，氮气吹干，加2 mL水溶解，用0.3 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.5～7.5后转移入5 mL容量瓶。

图1 玉足海参多糖色谱图

标准曲线制作：分别移取浓度为0.1、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mmol/L的岩藻糖标准液400 μL于10 mL具塞试管中，加入50 μL 2 mmol/L乳糖溶液、450 μL 0.5 mol/L PMP甲醇溶液和450 μL 0.3 mol/L氢氧化钠溶液，涡旋混合，70 ℃水浴30 min，冷却后，加450 μL 0.3 mol/L盐酸溶液，涡旋混合，加1 mL氯仿，取上层溶液，重复三次，上层水相过0.45 μm滤膜，供液相色谱分析，样品测定同上。

(1)色谱条件

色谱柱：XDB-C18，5 μm，250 mm×4.6 mm；柱温：25 ℃；检测波长：254 nm；进样量20 μL；流速1.0 mL/min；流动相A：磷酸盐-乙腈溶液(17:3)流动相B：磷酸盐-乙腈溶液(3:2)。梯度洗脱程序：0～10 min，100%～90% A；10～40 min，92%～63% A；40～45 min，63%～100% A。

1.2.3 海参神经酰胺与脑苷脂含量测定

称取0.1 g海参干粉，加入6 mL氯仿-甲醇溶液(2:1)超声提取15 min，过滤，重复提取3次。将滤液用氮气吹干，1 mL水溶解后，加入2 mL正己烷萃取，重复3次，将有机相合并后用氮气吹干，加入100 μL 4 mol/L氢氧化钾溶液和1 mL甲醇，37 ℃水浴60 min，加入0.8 mL水，2 mL氯仿萃取，萃取3次，氮气吹干。使用甲醇溶解于10 mL容量瓶中。样品溶液过0.22 μm滤膜，供液相色谱分析[18]。

图2 玉足海参海参中神经酰胺、脑苷脂色谱图

标准曲线制作：分别称取葡萄糖脑苷脂和神经酰胺标准品5 mg，甲醇溶解于10 mL容量瓶中。制备2.5、5、25、50、100、150、250 μg/mL系列混合对照品溶液，供液相色谱分析。

(1)色谱条件

色谱柱：TSK(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；柱温：40 ℃；流速：1 mL/min； 进样量：20 μL。流动相A：正己烷-异丙醇溶液(99:1)，流动相B：二氯甲烷-甲醇溶液(60:40)；蒸发光散射检测器：雾化气为氮气，流速2.4 L/min，漂移管温度50 ℃。梯度洗脱程序：0～12 min，100%～60% A；12～15 min，60%～40% A；15～17 min，40%～40% A；17～18 min，40%～100% A。

1.2.4 海参皂苷含量测定

称取海参干粉2 g，40 mL 60%乙醇溶液，冷凝回流1 h，重复3次，收集提取液，旋蒸至干燥，20 mL水溶解，用正丁醇萃取，重复三次，收集萃取液，旋转蒸发，加入60%甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中。

标准曲线制作：称取人参皂苷Re标准品10 mg用甲醇溶液溶解于50 mL容量瓶中，取人参皂苷Re标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL比色管，水浴锅中蒸干溶剂。在蒸干后的比色管中依次加入5% 香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，60 ℃水浴加热15 min后，冰水冷却5 min。然后分别加入5 mL冰醋酸，摇匀后，静置10 min，于560 nm波长下测定吸光度，并绘制标准曲线。

样品测定：取0.1 mL试液同上述方法测定。

2 结果与讨论

本文选用南海产玉足海参对其各营养成分进行检测分析和含量测定。结果表明本实验所选用的南海玉足干海参盐分、水溶性总糖、水分含量、含砂量、复水后干重率分别为0.35%、2.4 mg/g、10%、2.2%、44.5%均符合国家标准。灰分含量为9.73%，这与王远红等所测得四种海参灰分含量范围8.48%～18.33%较为接近。然而，不同品种海参之间的差异依然明显[19]。

从实验结果可以看出南海玉足海参中蛋白质含量最高为32.9%；神经酰胺含量最低仅有16.39 mg/kg。由此我们可以判断蛋白质为南海玉足海参的主要营养成分。然而相比于其他品种海参，南海玉足海参蛋白质含量较低。韦丁和陈健对糙海参营养成分进行了分析，结果显示其蛋白质含量为70.75%[20]。井君等对7种海参的营养成分进行了分析，结果显示不同品种的海参蛋白质含量存在着差异，其测得含量范围为38.09%～68.45%[21]。其他成分海参多糖、海参皂苷含量分别为49.7 mg/g、4.59 mg/g，其中海参多糖含量与王远红等所测得的糙参多糖含量较为接近，海参皂苷含量与井君等所测得的黑玉参皂苷含量较为接近，但与其他品种海参相比存在一定差异[19-21]。海参神经酰胺与脑苷脂含量分别为16.39 mg/kg、43.57 mg/kg，含量较低且与其他品种海参差异明显[18]。这种差异的存在与海参的品种，生长环境，保存及处理条件等条件息息相关。

表1 玉足海参各营养成分含量(水分含量以湿基计，其余项以干基计)

3 结 论

海参的品种多达一千多种，不同品种的海参其所含各种物质的成分也不尽相同。本文选用南海产玉足海参对其各营养成分进行检测分析和含量测定。虽与其他品种海参营养成分含量比较，存在一定差异，但是均富含多糖和蛋白质等生物活性成分，证明了玉足海参具有较高的营养价值，为进一步开发研究南海玉足海参提供参考依据。