潘康锁,代德华,侯佳琪,辛怡霖,唐 熙,李青云,张 欣,祁会彩,李引乾*
(1.陕西省农业检验检测中心,陕西西安 710016;2.陕西省动物卫生与屠宰管理站,陕西西安 710016;3.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵 712100;4.西安市农业综合执法支队未央大队,陕西西安 710016)
奶牛乳房炎是危害奶牛养殖最普遍的疾病之一,全球约有30%的奶牛患有乳房炎,经济损失严重[1]。乳房炎根据临床症状分为临床型乳房炎和隐型乳房炎。病原微生物感染是导致乳房炎的主要病因。目前已报道致奶牛乳房炎的病原微生物共有100多种微生物,其中主要为金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠埃希氏菌[2]。近年来,抗生素在防治奶牛乳房炎方面发挥了重要作用,但是抗生素治疗易造成药物残留,且耐药菌株变多,影响了抗生素的治疗效果[3]。而中药制剂有辨证施治、标本兼治、天然温和、低毒低残留的特点,具有良好的应用前景[4],且中药制剂不易产生耐药性,体内代谢较快、高效低毒、无残留,可替代化学合成药物用于奶牛乳房炎的防治。因此,研制开发中药制剂具有广阔的发展前景。本试验选用高、中、低3个剂量组公英翘芦散与公英散对奶牛乳房炎进行临床疗效试验,以期对比观察公英翘芦散对奶牛乳房炎临床治疗效果。
1.1.1 试验用动物 试验用动物选由西北农林科技大学畜牧站提供患有临床乳房炎的奶牛,主要表现为患病乳区奶汁异常(出现絮片、凝块或呈水样),乳房有不同程度的红、肿、热、痛症状,产奶量下降,但无明显的全身症状。
1.1.2 试验药品 供试品:公英翘芦散(批号:191201),含蒲公英 30 g,连翘 20 g,王不留行30 g,路路通20 g,漏芦10 g,黄芩20 g,当归20 g,川芎10 g,白术10 g,乳香10 g,没药10 g,皂角刺10 g,共12味中药,内蒙古华天制药有限公司产品。对照药物:公英散(批号:191121),含蒲公英60 g,金银花60 g,连翘60 g,丝瓜络30 g,通草25 g,芙蓉叶25 g,贝母30 g,共7味中药。
1.1.3 主要仪器 KQ-500 DE型数控超声波清洗器,江苏省昆山市超声仪器有限公司产品;不锈钢手提式压力蒸气灭菌器,上海申安医疗器械厂产品;PHS-精密pH计和超净工作台,上海精密科学有限公司产品;真空泵和真空盖式除菌过滤器,Pall-Gelman 公司产品;DGG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱,上海森信实验仪器有线公司产品;低速离心机,湖南凯达科学仪器有限公司产品;高速离心机,美国贝克曼公司产品;恒温水浴锅,天津市泰斯特仪器有限公司产品;便携式体细胞计数仪C-Reader,韩国Digital Bio Technology公司产品。
1.2.1 试验分组 将临床诊断确诊为乳房炎的40头奶牛,随机分为公英翘芦散给药组和对照药物给药组。公英翘芦散给药组,设高、中(推荐剂量)、低3个剂量试验组,每组试验动物10头,并记录患病乳区数。药物对照组,即“公英散”组,按照推荐剂量给药,试验动物10头,并记录患病乳区数。
1.2.2 用法用量 给药前,将药物散剂与3倍量水混合均匀,经胃管灌胃给药,1日1次,7 d为1个疗程。经2个疗程未治愈者改用其他药物治疗。参照文献[5-6],公英翘芦散给药组,设高、中(即产品说明书中推荐剂量)、低3个试验组,每次分别经胃管灌服公英翘芦散600 g、300 g、150 g,1日1次,7 d为1个疗程。最多治疗2个疗程。药物对照组,即“公英散”组,每次经胃管灌服“公英散” 300 g,1日1次,7 d为1个疗程。最多治疗2个疗程。
1.2.3 临床型奶牛乳房炎的纳入标准 患奶牛乳房炎的奶牛一般出现以下临床症状:乳汁异常、乳房的大小、质地和温度出现变化,患区表现疼痛,根据病情不同还常伴有不同程度的全身反应。且在治疗前未使用其它药物治疗,均可作为病例收治。
1.2.4 治疗后各组奶牛有效乳区数统计 在乳房炎奶牛治疗7 d后,综合考察患病奶牛的整体状况与感染乳区的局部症状,记录各组奶牛有效乳区数。
1.2.5 乳样体细胞数检测 在乳房炎奶牛治疗前后,分别采集并测定乳液中体细胞数(SCC)。采样时先挤掉前几把奶,随后挤取约30 mL奶于50 mL离心管中,采用便携式体细胞检测仪对其进行检测。
1.2.6 奶牛乳房炎的疗效判定标准 对确诊患乳房炎的奶牛按1.2.2的方法给药后,观察治疗效果,并按以下标准进行治疗效果评定[7]。①治愈:临床症状消失,乳房恢复正常,产乳量恢复,乳汁外观正常,乳汁体细胞数降至正常范围(50万/mL以下),治愈率=(组内治愈乳区数/组内用药乳区数)× 100%;②显效:临床症状基本消失,乳房恢复正常,产乳量恢复,乳汁外观正常,实验室检查,各种指标接近正常,显效率=(组内显效乳区数/组内用药乳区数)× 100%;③有效:临床症状减轻,乳汁外观正常,产乳量恢复,乳汁体细胞数下降至50万/mL~100万/mL,有效率=(组内有效乳区数/组内用药乳区数)× 100%;④无效:各项指标均未改善,甚至病情加重,无效率=(组内无效乳区数/组内用药乳区数)× 100%。
1.2.7 统计学处理方法 各项检测数据均用SPSS软件(SPSS 17.0版)进行单因素方差分析统计学处理,分析各组间用药后乳汁体细胞数的差异显著性,用卡方检验对各组的治愈率、显效率、有效率和无效率进行差异显著性比较。
治疗前40头患临床型乳房炎的奶牛分成4组及统计各组奶牛的患病乳区数见表1,治疗后各组临床型奶牛乳房炎有效乳区数情况见表2。
表1 治疗前奶牛乳房炎患病乳区统计结果
表2 治疗后统计奶牛有效乳区数
本试验在分别给予患乳房炎的奶牛不同剂量的公英翘芦散和公英散后,对40头患乳房炎奶牛治疗前后的牛乳进行体细胞数(SCC)检测,连续7 d,结果见表3。治疗前4组奶牛乳样体细胞数无显著性差异(P>0.05)。治疗后(7 d)4组均与治疗前有显著性差异(P<0.01),公英翘芦散高、中剂量组治疗效果明显优于公英散对照组,且差异极显著(P<0.01),而公英翘芦散低剂量组则与公英散对照组之间则无显著性差异(P>0.05)。
表3 乳房炎奶牛乳汁SCC检测结果(万个/mL)
经过7 d的临床治疗,40头乳房炎奶牛的临床治疗效果见表4。公英翘芦散高、中剂量组治愈效果明显,有效治愈率均达100%,低剂量组有效治愈率为88.89%,稍高于公英散对照组(83.33%),表明公英翘芦散对奶牛乳房炎有较好的治疗效果。
表4 公英翘芦散与公英散对奶牛乳房炎患病乳区的临床治疗效果
奶牛乳房炎给养殖业带来了极大的损失,中兽医认为乳房炎即乳痈,是热、湿、气、血郁结不散,化而为炎,应以清热解毒、抗菌消炎、通经活血、活络通乳为治疗原则[4]。公英翘芦散是由蒲公英、黄芩、连翘、当归等12味中药组成,其中,蒲公英具有消痈散结、抗菌消炎的作用,能够疏通阻塞的乳腺管,起到散结化瘀、利尿催乳的作用[8]。导致奶牛乳房炎的病原菌主要包括无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌[2,9],蒲公英提取物与多种抗生素联合使用,对金黄色葡萄球菌的体外抑菌具有良好的协同作用,可显著降低抗生素的用量[10]。黄芩对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌均有一定的抑制作用[11]。王不留行性苦、平,归肝、胃经,有活血通经,下乳消肿的功效,其中主要含有三萜皂苷、环肽、黄酮类化合物等成分,具有催乳、抗氧化等作用[12]。当归味甘,温,长期以来被用作活血润肠,调经止痛,其主要成分当归多糖具有重要的体内外药理作用,如增强免疫、抗氧化、保肝等[13]。以黄芪、当归及王不留行为主药的芪王催乳散可有效治疗奶牛隐性乳腺炎,且可有效改善奶牛乳样品质[14]。
公英散是我国兽医临床治疗奶牛乳房炎的经典中药方剂,具有清热解毒,散结消肿的功效[15],本试验中,公英翘芦散对奶牛乳房炎的治疗效果明显优于公英散,通过灌胃给药,公英翘芦散高、中剂量组的患乳房炎奶牛临床症状基本消失,乳汁正常,体细胞数也降至正常范围,有效治愈率均达到100%,低剂量组患病奶牛的临床症状也普遍消失,乳汁体细胞数较治疗前显著减少(P<0.01)。高、中剂量组对患病奶牛乳样体细胞的治疗效果显著优于公英散组(P<0.01),有效治愈率也均高于公英散组,表明公英翘芦散对奶牛乳房炎具有良好的治疗效果。