郑州地区固定单采血小板捐献人群血小板供者库建立分析

张丽，刘铮，张伯伟，康轶青，王娜

（河南省红十字血液中心，河南 郑州 450000）

血小板输注无效（PTR）是目前临床输血领域广泛关注的问题之一。 有调查显示，免疫性血小板抗体[主要包括人类白细胞抗原（HLA）与人类血小板抗原（HPA）]造成的PTR 占18%～25%[1-2]。 HLA与HPA 多态性高，能够在药物、输血与妊娠等各种免疫因素下形成相应抗体， 各种抗原抗体间所产生的免疫反应可造成免疫源性PTR， 即予以非同型输注会导致同种抗体产生[3]。 但是，当前输血技术规范尚未对血小板同型输注进行规定， 临床实践中，存在大量PTR；对于部分需长期多次输注治疗患者而言， 如果产生抗体， 将使得其 “无血可输”；同时由于目前血小板供应情况相对紧张，PTR属于资源浪费现象[4-5]。 故建立血小板供者HLA-I类以及HPA 基因分型的相应血小板库， 有利于为患者提供各种抗原相匹配单采血小板， 有效地降低PTR 发生风险，提高血小板资源利用效率，避免血小板输注问题产生。 本研究主要对河南省郑州地区血液中心固定无偿单采血小板捐献者予以HLA-I 类基因、HPA 基因分型检测，建立血小板供者库，希望为减少血小板输注问题提供有效指导。

1 资料与方法

1.1 研究对象 以河南省郑州地区血液中心2014年6 月1 日至2014 年12 月31 日1585 名固定单采血小板捐献者为研究对象，纳入标准：每年献单采血小板三次以上。 并在这1585 名研究对象中随机抽取500 名捐献者血样， 检测HLA-I 类基因与HPA 基因的分型。

1.2 方法 记录并整理1585 名研究对象性别、年龄、血型分布、职业分布、捐献次数等资料。 利用血液中心现代血站管理信息系统SHINOW 9.0，收集两个月无偿固定单采血小板捐献者的血样。 留取固定无偿单采血小板捐献者的血液标本3 mL，通过AutoMate Express 自动DNA 提取系统 （购自美国Life Technologies）， 选择天根DNA 提取试剂盒进行DNA 提取，严格依据说明书操作，聚合酶链式反应（PCR）扩增前，控制DNA 浓度50 ng/μL。基因检测： 采取聚合酶链-序列特异性引物技术（PCR-SSP）对HPA1-17 基因进行检测，使用美国Texas BioGene.inc 公司提供的HPAtyper 分型试剂盒（批号为M313041）；采取聚合酶链-序列特异性引物技术（PCR-SSO）对HLA-I 类抗原进行检测，使用美国one lambda 公司提供的LABTypeSSO 试剂盒(批号为：A 位点RSSO1A13，B 位点RSSOIB16)。1.3 统计学处理 HPA 基因分型通过直接计数法计算获得基因频率；HLA-A、B 位点基因分型，通过方根法计算基因频率： 其中f 为抗原频率，f=C/N， 其中N 表示调查样本总数，C 表示有某抗原个体数。

2 结果

2.1 固定无偿单采血小板献血者资料分析 1585名固定无偿单采血小板献血者中，男性（76.47%）、36～55 岁（69.78%）、农民（34.01%）、捐献3～9 次（78.87%）者占比较多，血型AB 型（11.86%）者占比较少。 见表1。

表1 固定无偿单采血小板献血者资料

2.2 固定无偿捐献单采血小板人群HLA-I 基因频率 各等位基因频率见表2，A 位点基因频率前5位为A*1101 （16.6%）、A*0201 （16.3%）、A*2402（16.3%）、A*3001（8.2%）、 A*3303（8.0%）；B 位点前5 位为B*1302（7.90%）、B*4001（7.4%）、B*5101（6.4%）、B*4601（6.2%）和B*0702（5.1%）。 基因频率较高的（>2%）见表3。

表2 HLA-A、B 等位基因频率分布

表3 HLA-A、B 等位基因频率分布（基因频率≥2%）

2.3 固定无偿捐献单采血小板人群HPA 基因及基因型频率 HPA-4、7、8、9、10、11、12、13、14、16、17系统基因型呈单态性，只检测到a 等位基因，其a/a基因频率为100%。 HPA-1、2、3、5、6、15 系统具有多态性，HPA-3 与HPA-15 杂合度 （a/b 杂合子基因型）最高，分别为57.00% 和49.80%；HPA-1、2、5、6 以a/a 纯合子基因型为主， 分别为99.2%，94.8%，98.4%，99.4%，无b/b 纯合子基因型。 见表4。

表4 郑州地区固定无偿捐献单采血小板人群HPA 基因型频率分布

3 讨论

欧美地区很多国家血液中心以及输血服务中心均构建了明确HPA、HLA 基因型的相应血小板供者库， 便于为新生儿同种免疫血小板减少症与PTR 病人予以血小板配合型的有效输注[6]。 有调查显示， 美国威斯康辛地区血液中心所构建的血小板供者库，人数高达14000，并且每年大约1000 人接受配合型输注治疗； 瑞士日内瓦地区构建的明确HPA 型血小板供者库包含2142 人[7-8]。 很多发达国家均已经构建已知血型的庞大血小板供者库，且正在逐步扩增及完善。 我国近年来只有上海等大城市已经构建血小板供者资料库， 且样本量一般较小[9]。 河南省目前没有自己的血小板库，在临床上没有对血小板抗原基因进行分型及配型，导致临床血小板输注效果不理想， 并且增加了患者的负担。 因此， 建立河南郑州地区血小板供者库， 有利于提高本地临床血小板输注治疗安全性以及有效性，具有非常重要的现实意义。 本研究分析1 585 名固定无偿单采血小板献血者资料发现，以男性（76.47%）、36～55 岁群体（69.78%）、 农民（34.01%）、A 型（27.51%）、B 型（30.79%）与O 型（29.84%）血为主，且大部分（78.87%）捐献3～9 次。造成PTR 原因众多， 其中人体免疫因素发挥着重要作用[10]。血小板表面存在十分丰富并且复杂的抗原物质， 其基因多态性呈现种族以及群体特征[11]。对于血小板输注治疗时同种免疫反应，有大约5%为血小板同种抗原HPA 之间不配合使得机体分泌相应抗体所致， 大约80%是因为供血小板表面存在的HLA-I 类抗原抗体间产生同种反应损害到血小板所致[12-13]。 确保受血者与供血者之间HLA 完全相同具有较大难度，根据临床经验，采用HLA 部分位点相同以及HPA 完全相同血小板进行输注，可获得良好疗效[14-15]。 本研究显示，HLA-A 位点基因频率前5 位分别为A*1101 （16.6%）、A*0201（16.3%）、A*2402（16.3%）、A*3001（8.2%）、 A*3303（8.0%），B 位点前5 位分别为B*1302 （7.90%）、B*4001（7.4%）、B*5101（6.4%）、B*4601（6.2%）和

B*0702 （5.1%），A*2402、B*4601、B*5101、B*0702与我国其他地区调查研究[16]结果较为相似，其中A*1101、A*0201、A*3001、A*3303、B*1302、B*4001具有较大地域性特点， 对于北方人群比较罕见的B*78、B*82、A*36 以及A*43，均没有检出。 本研究发现，HPA-4、7、8、9、10、11、12、13、14、16、17 系统基因型呈单态性，只检测到a 等位基因，a/a 基因频率高达100%，而HPA-1、2、3、5、6、15 系统呈现多态性，其中HPA-3、HPA-15 杂合度（a/b 杂合子基因型）最高，将其归为同种免疫风险比较高的基因型，需予以高度重视；HPA-1、2、5、6 主要为a/a 纯合子基因型，未见b/b 纯合子基因型。 本研究根据郑州地区固定单采血小板捐献人群HLA 以及HPA 基因特征，构建了相应系统基因库。 临床对于PTR 者，应该首先予以HLA、HPA 分型，并且对血小板抗体进行筛查，若为长期输血者，必须提前干预，采取HLA、HPA 相合的相应血小板进行输注治疗[17]。通过建立固定单采血小板捐献人群血小板供者库，有利于选择配型血小板予以输注，起到节约血小板资源、避免浪费以及减轻患者负担作用。

综上， 河南省郑州地区固定单采血小板捐献人群大部分为男性、36～55 岁、 捐献3～9 次者，AB型较少，HLA-A、B 等位基因以及HPA1-17 基因均表现出明显区域性特征， 通过构建血小板供者库，可更好地满足临床需求，降低PTR 发生率。