他留乌骨鸡保种场新城疫、禽流感H9抗体检测及免疫程序探讨

赵云堂，李庆华，夏桂林

（1.云南省丽江市永胜县六德乡农业综合服务中心，云南 永胜 674213；2.云南省丽江市动物疫病预防控制中心，云南 丽江 674100；3.云南省丽江市永胜县动物疫病预防控制中心，云南 永胜 674200）

他留乌骨鸡主产于丽江市永胜县，中心产区为永胜县六德傈僳族彝族乡，2010年1月15日，他留乌骨鸡被列入国家畜禽遗传资源名录，2011年录入《中国畜禽遗传资源志·家禽志》，属肉蛋兼用型品种。2014年起永胜县开展了他留乌骨鸡保种基地建设，在六德乡建设了保种场，保种场在新城疫和高致病性禽流感的防控工作中虽然按照县动物疫病预防控制中心提供的免疫程序开展预防免疫，但由于防控不当，死鸡、淘汰鸡现象普遍，制订适合保种场的免疫程序已刻不容缓。因此，2016年4～8月我们在六德乡他留文化产业公司保种场开展了鸡新城疫和高致病性禽流感H9抗体检测。

1 材料与方法

1.1 试验地点及动物选择试验地点在六德乡他留文化产业公司保种场，该场位于云南省丽江市永胜县六德乡营山村委会，鸡场位于远离村庄的荒山中，距主干公路5km，占地面积240亩，卫生防疫制度，饲养管理制度建全，执行良好，试验开始时存栏他留乌骨鸡28000羽。

试验动物选择该场2016年4月10日孵化出壳的2000羽他留乌骨鸡。按如下免疫程序接种（见表1）。

表1 他留乌骨鸡种保种场现行免疫程序

1.2 试验材料鸡新城疫病毒血凝抑制试验（HI）抗原、阳性血清购自青岛易帮生物工程有限公司，批号2016002；禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验（HI）抗原、阳性血清购自哈尔滨维科生物技术开发公司，批号2016003。

1.3 试验方法及检测标准对2016年4月10日刚出壳的雏鸡中随机选择200羽单独饲养组成试验组，在1、5、10、15、21、28、35、42、56、64、91、120、180日龄随机抽取32羽从翅静脉采血，分离血清后冷冻，送县动物疫病预防控制中心，采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）分别开展新城疫抗体检测和高致病性禽流感H9抗体检测。检测标准分别为新城疫诊断技术GB/T16550-2008和高致病性禽流感诊断技术GB/T18936-2003。

1.4 试验数据统计分析在检测结果中去掉一个最大值和一个最小值，要求最大值和最小值差≥3时方可进行最大差异化处理，试验数据采用EXCEL进行分析，结果用平均值±标准差表示。

2 结果与分析

在鸡场实施现行免疫程序情况下，不同日龄鸡新城疫和禽流感H9抗体监测结果（见表2）。

表2 他留乌骨鸡种保种场鸡新城疫、禽流感H9抗体检测结果

2.1 不同日龄鸡新城疫抗体监测结果监测结果表明：在雏鸡阶段（1～28日龄）1日龄为6.12log2、5日龄为6.69log2、10日龄为5.66log2、15日龄为4.97log2、21日龄为4.69log2，说明该批他留乌骨鸡1～7日龄鸡新城疫母源抗体较高，保种场母鸡群鸡新城疫免疫效果好。但7日龄以后至21日龄鸡新城疫抗体均为下降趋势，证实7日龄免疫后没有产生足够的抗体，分析原因7日龄使用新支二联苗滴鼻或滴眼免疫是通过黏膜免疫而起作用，但体液内的抗体检测效果却不好；另外，新支+禽流感H9+法氏囊病油苗免疫后抗体产生缓慢，有较长时间的空白期。21日龄使用鸡新城疫活疫苗免疫7d后抗体随即上升，并能长时间维持较高水平，此后，使用联苗点眼也能保持较高水平，这可能得益于7日龄免疫时细胞产生的记忆作用。对1～180日龄鸡新城疫抗体检测结果表明：21日龄进行鸡新城疫加强免疫是必须的。

2.2 不同日龄鸡禽流感H9抗体检测结果检测结果表明：1日龄出壳鸡禽流感H9抗体最高为7.75log2，5日龄为7.71log2，此后至35日龄禽流感H9抗体一直处于下降阶段，7日龄使用新支+禽流感H9+法氏囊病油苗免疫基本没有产生免疫应答，35日龄使用新城疫+禽流感H9二联油苗免疫后又开始缓慢上升，50日龄采用禽流感H5+H9二价活疫苗第3次加强免疫后抗体很快升高，并长时间维持上升趋势，到120日龄时最高为7.78log2，180日龄时仍达7.57log2。因此建议禽流感免疫最好使用二价活疫苗。

3 讨论与小结

3.1 试验证实雏鸡出壳后不论是鸡新城疫还是禽流感H9母源抗体都在10日龄前维持较好水平，随雏鸡日龄的增大，母源抗体的水平也逐渐下降，鸡新城疫、禽流感H9亚型母源抗体水平35日龄已基本消失。因此，鸡场确定免疫程序的首免日龄，既要避开母源抗体的高峰期，又不能迟于母源抗体保护临界值。

3.2 从试验结果看出雏鸡新城疫抗体1～5日龄逐渐升高，这与雏鸡吸收卵黄囊内抗体有关。随着卵黄囊的消失，母源抗体逐渐下降，而7日龄免疫后没有产生足够的抗体，21日龄降到4.69log2，所以鸡新城疫二次免疫在21日龄为佳。21日龄免疫后抗体持续上升，期间35日龄使用新城疫+禽流感H9二联油苗免疫、110日龄使用新支二联活苗（ND7+IB120)、新支减三联油苗免疫均对鸡新城疫抗体的影响不大，到120日龄后又呈下降趋势。因此，120～130日龄进行第三次免疫能获得长时间保护，到180日龄时抗体水平还可达到7.46log2，进入下次免疫周期。

禽流感H9抗体在7日龄免疫后有1周的上升期，此后15～35日龄逐渐下降，到基本消失，因此，应在14日龄时开展首次免疫。35日龄、50日龄2次免疫后呈连续上升趋势，到120日龄仍能维持高峰，180日龄时保持在7.57log2，所以120～130日龄使用新城疫、禽流感（H9亚型）二联活疫苗免疫即可顺利进入下次免疫周期。

3.3 根据试验结果结合当地他留乌骨鸡保种场现有防疫工作实际，推荐适合的免疫程序（见表3）。

表3 他留乌骨鸡保种场推存免疫程序

使用疫苗接种应充分考虑鸡场的生物安全措施，只有完善的生物安全措施，才能使鸡群获得更长的免疫保护期。

3.4 临床监测抗体是确定免疫时间最可靠、最直接的依据建议他留乌骨鸡种保种场每年要定期开展免疫抗体监测，适时调整免疫程序，科学、合理做好防控，逐步开展疫病净化，达到净化示范场目标。