肺腺癌组织转录因子Oct4的表达及临床意义

常晶 王蓓 张敬剑 莫慧敏 倪云峰 郏琴

近年来肺癌的发病率逐年升高，但是该病早期症状不典型，尚无能够早期诊断的特异性生物标记物[1]。在临床实践中，肺癌的常见病理类型是非小细胞肺癌，而其中又以肺腺癌所占比例最高，占原发性肺癌的40%～50%[2]。Oct4(Octamer binding transcription factor 4)是POU转录因子家族的成员之一, 位于6号染色体6p21和17B1上，已有研究证实Oct4能够影响干细胞在体内的分化和去分化，同时保持干细胞的自我更新能力[3]。近年来发现，Oct4在实体肿瘤中呈高表达[4-5]，可能参与肿瘤的增殖、分化、转移等生物学功能[6-8]，Oct4的表达与肺腺癌的预后有关[9]。本课题拟通过检测、分析Oct4在不同分化程度的肺腺癌组织中的差异化表达，研究肺腺癌组织中转录因子Oct4的临床意义。

资料与方法

一、标本来源

研究对象是2019年1月—2021年1月在我院诊断为肺腺癌且接受手术治疗的患者，共计120例，包括男性68例(56.7%)，女性52例(43.3%)，平均年龄64.25±4.23岁。肺腺癌的临床诊断严格依据2018版《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》的标准[10]，结合患者的临床表现、影像学特点、实验室检查、病理组织学、免疫组化等医学资料综合诊断。根据手术切除的肺腺癌组织病理学分型，低分化腺癌30例(25%)，中分化腺癌42例(35%)，高分化腺癌48例(40%)。患者在术前均未接受化疗、放疗、靶向治疗以及中药调理等干预。所有患者均无合并肺部感染性疾病。

二、取材和病理切片的制备

患者接受胸腔镜手术或者开胸手术治疗，在手术过程中，分别切除、留取适量新鲜肺癌组织和癌旁组织，立即予以4%中性甲醛溶液浸泡固定，最终共收集肺腺癌组织标本120例，癌旁组织标本120例。在病理科进一步处理，制备石蜡包块和切片(厚度4 μm)，完成Oct4免疫组织化学染色，在光学显微镜下观察并拍照。

三、免疫组织化学染色法

参照之前的方法[11]完成肺腺癌组织标本的免疫组织化学染色，其中一抗为兔单克隆Oct4抗体(Abcam，ab92494，美国)，按照1 ∶100稀释。二抗为小鼠抗兔抗体(Abcam，ab99697，美国)，小鼠IgG代替一抗作为阴性对照。

四、转录因子Oct4的表达分析

本研究使用免疫组化SP法检测Oct4在肺腺癌组织中的表达，免疫组化切片由具有中级以上职称的病理医师判读，Oct4定位于肿瘤细胞浆内。在光学显微镜下随机选择5个肿瘤区域进行细胞计数，当所观察指标定位部位出现棕黄色颗粒判为阳性表达。直接计算阳性细胞数(或面积)占视野下或整张切片内同类细胞数(或面积)的百分比进行分级[12]。具体判定标准如下：0(阴性)：无着色；+(弱阳性)：视野内任何比例的细胞呈现微弱、不完整膜着色；(阳性)：视野内>10%的细胞呈现弱至中等强度、完整但不均匀膜棕黄着色；(强阳性)：视野内>30%的细胞呈现强、完整膜棕褐着色。

五、统计学方法

采用SPSS20.0软件进行统计分析，计量资料采用配对t检验，计数资料采用χ2检验，Oct4表达与临床病理因素之间的关系采用Fisher 精确检验分析，设P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、转录因子Oct4在肺腺癌组织中的表达

免疫组织化学检测结果提示，Oct4在肺腺癌中主要表达在腺癌细胞浆内：低分化肺腺癌呈超强阳性()，中分化肺腺癌呈强阳性()、高分化肺腺癌呈阳性()，但是在癌旁组织中几乎检测不到Oct4。Oct4在低分化肺腺癌组织中的阳性表达水平高于中分化、高分化肺腺癌。随机选择其中的一次检测结果(见图1)所示。

图1 不同肺组织Oct4免疫组织化学染色结果，Oct4蛋白主要表达在细胞浆和细胞核。A：癌旁组织呈阴性表达(-)；B：低分化肺腺癌组织呈超强阳性表达()；C：中分化肺腺癌组织呈强阳性表达()；D：高分化肺腺癌组织呈阳性表达()。放大倍数100×。

二、转录因子Oct4的表达与肺腺癌临床病理因素之间的相关性

Oct4的阳性表达情况在所有患者的年龄、性别、有无吸烟史等一般因素方面无差异(P>0.05)，但是在肺腺癌组织的分化程度、有无淋巴转移等方面有差异(P<0.05)。光镜下观察肺腺癌病理组织切片，发现Oct4的阳性表达率在120例肺腺癌组织中是73.3%(95%CI:65.3%～81.4%)，在合并有淋巴结转移的87例肺腺癌组织中是71.3%(95%CI:63.5%～79.1%)。Oct4的阳性表达率在低分化组肺腺癌组织中是80%(95%CI:71.3%～88.7%)，在中分化组中是71.4%(95%CI:63.6%～79.2%)，在高分化组是68.8%(95%CI:61.3%～76.3%)，由此可见，Oct4的阳性表达率在肺腺癌低分化组织中，高于中分化组织和高分化组织，P<0.05(见表1)。

表1 不同临床病理因素影响下肺腺癌组织中Oct4的表达情况

讨 论

肺癌被认为是人类因癌症死亡的主要病因，每年造成全球近159万人死亡，其中有超过50%的患者在确诊后已经处于中晚期，多数患者一年内死亡[13]。肺癌的危险因素包括长期吸烟，大气污染，职业暴露，肺部慢性疾病等。我国的肺癌患者中，男女构成比约为1.34：1，近年来发现女性肺癌、非吸烟肺癌患者占比，有增加的趋势，其中腺癌构成比最高，其次是鳞状细胞癌[14]。肺癌的不良预后主要归因于在确诊时就已经出现远处转移，另一个原因是根治性切除术后复发率太高。由于缺乏能够早期诊断肺癌的特异性生物分子标志物，迫切需要在这一研究领域有所突破。近年来研究发现，转录因子在肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等方面发挥着重要作用[15-18]，其中对Oct4的研究越来越深入，有望成为能够早期诊断恶性肿瘤的特异性生物标记物之一。

根据本课题的研究结果，转录因子Oct4的阳性表达率在肺腺癌的癌旁组织中几乎呈阴性，而在肺腺癌组织中有高达73.4%的阳性表达率，证实Oct4与肺癌相关，可能是肺腺癌的重要标记物，具有潜在的鉴别诊断价值。通过对研究结果的进一步分析，发现在87例合并有淋巴结转移的患者肺腺癌组织中，Oct4的阳性表达率高达79.5%，证实Oct4可能与肺腺癌的淋巴转移相关。Oct4的阳性表达率在低分化组、中分化、高分化肺腺癌组织中的表达率分别是80%、71.4%、68.7%，提示Oct4在组织中表达水平的高低与腺癌细胞的分化程度呈负相关。刘天艺等[19]对非小细胞肺癌组织中Oct4的表达做了研究，结果也证实Oct4在肺癌组织中有表达，而且在低分化肺癌组织中的表达水平高于中分化组织和高分化组织，与本研究结果一致。

已有研究证实转录因子Oct4的表达与肿瘤的大小、分类、组织病理学分化程度之间存在显著的相关性[20-21]。另有研究证实多种恶性肿瘤的总生存率(OS)和无病生存率(DFS)/无复发生存期(RFS)/无进展生存期(PFS)与Oct4的过度表达有关[22]。Fu T.Y.等报道[23]在口腔鳞状细胞癌中，Oct4表达水平越高患者的预后越好。Feng Y.H.等报道[24]，与Oct4中、低表达的膀胱肿瘤相比，高表达Oct4的膀胱肿瘤与病情的进展、远处转移和生存期缩短直接相关。2019年的一篇meta分析指出，Oct4在肺癌中的过度表达与较差的临床病理特征和较差的生存结果密切相关[25]。最新的一篇meta分析研究也证实 Oct4的高表达与多种实体恶性肿瘤患者的预后不良存在一定的相关性[26]。上述研究均证实Oct4在恶性肿瘤中的预后中有潜在的预测价值。本研究结果显示，Oct4在肺腺癌中高表达，而肺腺癌也是实体恶性肿瘤的一种，与该研究结果一致，进一步证实了Oct4与恶性肿瘤的关系。

综上所述，本研究通过对不同分化程度肺腺癌组织的检测和分析，证实转录因子Oct4在肺腺癌组织中呈阳性高表达，与肺腺癌的组织分化程度、淋巴转移相关。在今后的研究中，需要进一步扩大患者样本量，深入探索，对本次的研究结果进行论证，揭示Oct4与肺腺癌预后之间的相关性，拓展Oct4在肺腺癌中的临床意义。