原发性高血压病人Salusin-β、miRNA-375与免疫因子的相关性分析

赵茜茜，王 珅，卢相琴，杨 婷

原发性高血压是临床常见的心血管疾病，主要由环境因素、遗传因素共同导致的多基因遗传性疾病，发病机制复杂，且随着病情不断进展。临床研究显示，原发性高血压会对心脏、肾脏、大脑造成损伤，同时也是脑卒中、动脉粥样硬化等血管性疾病发生的重要危险因素[1-2]。有研究显示，原发性高血压约占高血压病人的90%，原发性高血压是高血压急症的多发群体，引发心肌梗死、高血压脑病等一系列危险疾病，对病人生命健康造成威胁[3]。近年来，随着全球范围内原发性高血压发病率升高，引发的心脑血管病病死率升高，对人类生存质量及生命健康造成影响，并造成较重的经济负担[4-5]。随着对疾病的不断深入研究发现，原发性高血压发生、发展与免疫反应及相关因子水平有关[5]。本研究对原发性高血压病人Salusin-β、miRNA-375、免疫因子水平进行检测，同时分析相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年11月—2020年11月我院收治的原发性高血压病人77例，作为观察组；另选取同时间于我院体检健康者77名，作为对照组。观察组，男39例，女38例；年龄40～69(54.5±12.3)岁；病程2～5(3.5±1.2)年。对照组，男40名，女37名；年龄41～67(54.1±10.9)岁。两组性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有研究对象对本研究知情同意，并获得我院伦理委员会批准。纳入标准：观察组病人均符合《中国高血压防治指南》内原发性高血压诊疗标准[6]；年龄18～70岁。排除标准：一般资料不全；继发性高血压；合并高脂血症、肥胖、糖尿病、脑血管等其他慢性疾病；合并心、肺、肝、肾等重要脏器功能不全；合并恶性肿瘤；合并严重器质性疾病；患有肺炎、尿道感染等急性感染性疾病；精神疾病及认知障碍；长期嗜烟、嗜酒及滥用药物。

1.2 标本采集 抽取所有研究对象空腹静脉血6 mL，于室温下，以3 000 r/min离心10 min，分离上清液至无RNA酶的EP管中，-70 ℃保存，待用。

1.3 观察指标

1.3.1 酶联免疫吸附法检测Salusin-β、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素10(IL-10)水平 取50 mmol/L碳酸盐包缓冲液对抗原进行稀释，在聚苯乙烯反应孔内加入使用50 mmol/L碳酸盐包缓冲液稀释后抗原，加盖处理之后存放24 h置于4 ℃冰箱内，次日进行3次洗涤，之后抛干，将稀释液(pH值为7.4，0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液)待测标本0.1 mL放入每个孔，同时放入阳性和阴性对照标本，置于42 ℃环境中60 min，移除液体，3次洗涤后抛干，在每个孔中放Salusin-β、hs-CRP、IL-10抗体0.1 mL，存放60 min，移除液体后。进行3次洗涤并抛干，在每个孔中放入低物液(0.1 mol/L Na2HPO4，0.05 mol/L枸橼酸)，混匀之后置入0.1 mL邻苯二胺，进行20 min遮光，再次置入2 mol/L H2SO40.05 mL放置在每个孔内，终止反应。使用酶标仪检测A450值检测Salusin-β、hs-CRP、IL-10。

1.3.2 散射比浊法检测免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平 提取IgA、IgM、IgG、TNF-α血清样品在凝固过程中发生变化的散射光检测，在光探检测器为90°直角的单色光源中向血清样本加入凝血激活剂，在样品凝块过程中，散射光强度缓慢增加，血清样本完全凝固后，光探测器发生变化，送到检测器上处理并描出凝固曲线后检测IgA、IgM、IgG、TNF-α水平。

1.3.3 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-375表达 首先提取miRNA-375细胞总RNA，对提取总RNA的纯度、含量进行检测，之后逆转，逆转录处理后获得cDNA，获得cDNA后使用Primer5.0软件设计引物，2-△△Ct方法计算，内参U6。设置反转录反应条件：25 ℃ 10 min，40 ℃ 60 min，85 ℃ 5 min；设置扩增条件：94 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，35个循环，采用2-△△Ct计算miRNA-375表达量。

2 结 果

2.1 对照组和观察组血清Salusin-β水平、miRNA-375表达比较 与对照组比较，观察组Salusin-β水平、miRNA-375表达升高，差异有统计学意义(P<0.001)。详见表1。

表1 对照组和观察组血清Salusin-β水平、miRNA-375表达比较(±s)

2.2 对照组和观察组免疫因子水平比较 与对照组比较，观察组IgA、IgG水平升高，IgM水平降低，差异有统计学意义(P<0.001)。详见表2。

表2 对照组和观察组免疫因子水平比较(±s) 单位：g/L

2.3 对照组和观察组血清细胞因子水平比较 与对照组比较，观察组hs-CRP、TNF-α平升高，IL-1水平降低，差异有统计学意义(P<0.001)。详见表3。

表3 对照组和观察组血清细胞因子水平比较(±s)

2.4 不同高血压分级病人血清Salusin-β水平、miRNA-375表达比较 与1级高血压病人比较，2级、3级高血压病人Salusin-β水平、miRNA-375表达升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与2级高血压病人比较，1级高血压病人Salusin-β水平、miRNA-375表达较低，3级高血压病人Salusin-β水平、miRNA-375表达升高，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

表4 不同分级高血压病人血清Salusin-β水平、miRNA-375表达比较(±s)

2.5 Salusin-β、miRNA-375与原发性高血压病人免疫因子的相关性分析 Salusin-β与IgA呈正相关(r=0.608，P<0.001)，Salusin-β与IgM呈负相关(r=-0.523，P<0.001)，Salusin-β与IgG呈正相关(r=0.598，P<0.001)；miRNA-375与IgA呈正相关(r=0.621，P<0.001)，miRNA-375与IgM呈负相关(r=-0.701，P<0.001)，miRNA-375与IgG呈正相关(r=0.519，P<0.001)。详见图1、图2。

图1 Salusin-β水平与原发性高血压病人免疫因子相关性分析的散点图

图2 miRNA-375水平与原发性高血压病人免疫因子相关性分析的散点图

3 讨 论

高血压是以动脉压升高为特征的疾病，是伴有心、肾、血管、脑等器官功能性或器质性改变的全身性疾病，分为原发性高血压和继发性高血压，其中原发性高血压发病率约占高血压的90%[7-8]。流行病学研究显示，老年人为原发性高血压主要发病人群，我国60岁以上人群发病率高达60%，原发性高血压临床表现以耳鸣、头胀、头晕等为主，若不及时进行有效干预，造成心血管结构和功能变化，并引发高血压脑病、冠心病、心力衰竭等各种疾病[9-10]。随着社会经济发展、生活节奏加快、精神压力紧绷等多种因素影响，导致高血压发病率呈逐年升高趋势，同时各种心血管疾病病死率随之升高。对人类生活质量及生命健康造成威胁。因此，及时预防及控制高血压具有重要的意义[11]。

相关研究显示，血管内皮细胞损伤及局部炎症反应与高血压、心血管疾病的发生、发展关系密切，同时造成血栓形成并增加血管紧张性[12]。Salusin-β作为内源性心血管调节肽，在促进心肌细胞生长、血管平滑肌细胞增殖及血管内皮细胞炎症反应中发挥着重要作用。相关研究表明，Salusin-β可促进机体炎性因子释放，加重血管内皮细胞受损程度，从而诱发冠心病等[13]。另有研究显示，中枢Salusin-β有助于激活交感神经，促进精氨酸加压释放，导致血压升高。Salusin-β具有调节血压的作用，通过检测原发性高血压病人Salusin-β水平，可较好地预测高血压急症发生[14]。本研究结果显示，Salusin-β水平随高血压分级增加而升高，证实Salusin-β水平变化与原发病高血压病人病情发展具有密切联系，可作为生物学标志物应用于原发性高血压病人的早期预估，具有重要的临床应用价值。

人体内广泛存在的内源性非编码RNA为微小核糖核酸，在多种基因转录及表达中均有参与[15]。miRNA-375是一种在胰岛细胞中特异性表达的miRNA，成熟的miRNA作用于靶基因以发挥其功能。相关研究显示，miRNA-375通过对充足胰岛素样生长因子1产生调节作用，导致细胞膜内侧肌动蛋白丝组成的网状结构发生改变，促进胰岛素小泡和细胞膜融合，从而释放胰岛素。相关研究显示，miRNA-375表达水平在维持人体葡萄糖稳态方面发挥着重要的作用[16-17]。本研究结果显示，miRNA-375参与原发性高血压的发生、发展。以miRNA-375为靶点设计小分子物质拮抗miRNA-375作用，可为临床原发性高血压提供药物治疗的新靶点。

免疫球蛋白在原发性高血压发生、发展过程中发挥着重要作用。相关研究显示，原发性高血压病人T细胞功能异常，导致辅助介导B细胞活化分泌亢进，从而导致免疫球蛋白水平紊乱[18]。相关研究显示，原发性高血病人IgA水平升高，而IgM水平降低，可能是由于疾病发展过程中炎症消耗所致。原发性高血压病人IgG存在异常表达，IgG形成抗原抗体复合物，沉积血管基底层，造成血管内皮损伤发生[19]。本研究结果显示，免疫球蛋白IgA、IgM、IgG均参与原发性高血压发生、发展过程，提示其可能参与原发性高血压功能及结构改变等病理过程。

原发性高血压以全身动脉血管的慢性炎症反应为特征，多种细胞因子在高血压发生、发展及转归中发挥着重要作用。相关研究显示，hs-CRP作为系统炎症反应的标志物因子与高血压有关，可能是导致高血压发生、发展的独立危险因素[20]。IL-10作为细胞因子中极少存在的抑制性细胞因子，具有限制及终止炎症作用；可有效抑制炎症细胞产生白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)等多种炎性因子[21]。TNF-α作为具有多种生物活性的多肽炎性因子，通过细胞毒作用对血管内皮结构直接造成破坏，并对舒张功能造成影响。有研究显示，TNF-α可诱导IL-1分泌，导致血管壁重塑，是促进原发性高血压发展的重要危险因素[22]。本研究结果显示，原发性高血压病人炎性因子水平存在异常表达。提示炎性因子可有效评估病人病情，有利于原发性高血压诊断及预后评估，具有较高的临床应用价值。

综上所述，Salusin-β、miRNA-375及免疫因子对原发性高血压病人的诊断及干预具有重要的临床意义，且Salusin-β、miRNA-375及免疫因子在原发性高血压中具有相关性，可为临床原发性高血压的诊断提供一定参考依据。