任锋：丁型病毒性肝炎

本刊记者:陈词

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任锋：首都医科大学附属北京佑安医院教授/研究员，博士生导师，博士后合作导师。入选北京市优秀人才，北京市十百千卫生人才“百”层次人才，北京卫生系统技术人才学科骨干；美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）访问学者；主持国家“13.5”课题，国家自然科学基金面上项目、北京市自然科学基金、北京市科委临床特色研究、首都卫生发展科研专项重点攻关项目等20余项课题，参加国家 “12.5”、“11.5”等重大专项以及973等科研项目研究。

记者问：丁型肝炎病毒特点是什么？

任锋教授：丁型肝炎（丁肝）是由丁型肝炎病毒（HDV）感染引起的一种病毒性肝炎。HDV是一种缺陷病毒，利用乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）进入肝细胞。因此，HDV可与HBV联合或重叠感染。与单独慢乙肝患者相比，HDV/HBV重叠感染的肝脏疾病更为严重并且进展更快，约90%会进展为慢性肝炎，发生肝衰竭、肝硬化和肝癌等不良结局风险显著增加。丁型肝炎病毒颗粒直径大小为35～37nm，外层由脂质双层和HBV表面抗原组成，核内包含有HDV抗原和HDV RNA基因组结合的核蛋白体，是目前所知唯一具有共价闭合环状负链RNA基因组的病毒，基因组长度1.7kb。HDV是一种缺陷病毒，需要利用乙型肝炎病毒表面抗原进入肝细胞。因此，HDV的感染方式可分为与HBV共同感染或重叠感染。

记者问：目前丁型肝炎病毒感染的现状如何？

任锋教授：HDV感染和危害长期以来被低估甚至忽视。在中国最新一项荟萃分析表明：抗－HDV阳性患者在慢性乙肝患者中的流行率为2.1%，在普通人群中流行率为0.4%。一些流行病学家认为，由于我们长期忽视HDV感染以及造成的严重后果，导致了HDV的诊断没有受到足够的重视。而在其他国家，也仅在小部分的HBV患者中进行了研究，目前掌握的数据还不够充分。此外，由于实验室检测方法仅局限于HDV抗体检测，少有HDV RNA的检测，容易造成检测结果不准确。所以，在世界范围内，HBsAg阳性患者的HDV感染率均需要更进一步的研究和明确。

记者问：乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒联合或者重叠感染的后果如何？

任锋教授：与单独慢性乙肝相比，HDV重叠感染增加疾病的死亡率以及终末性肝病（肝硬化、肝细胞癌和肝衰竭）的发生率，并且HDV重叠感染加快肝硬化和肝细胞癌疾病进程。

记者问：目前丁型肝炎病毒感染率为什么被低估？

任锋教授：我们长期忽视HDV感染以及其造成的严重后果，导致了HDV诊断没有受到临床大夫足够的重视，例如2019年和2020年，全国法定传染病疫情报告显示，HDV病例的报告病例数仅有352例和187例，这与流行率估算结果存在很大差距。只有通过高性能的HDV诊断方法，才能对HDV的感染率展开全面的调查。因此，HDV 感染检测方法的局限性是丁型肝炎病毒感染被显著低估的重要原因之一。

记者问：目前丁型肝炎病毒的实验室检测方法有哪些？

任锋教授：目前，一般通过检测HDV抗原（HDV-Ag）、HDV抗体（HDV-Ab）和HDV RNA来诊断HDV感染。肝脏活检时，HDVAg可通过免疫荧光和免疫组织化学法等方法检测到，但是目前的应用比较少；ELISA方法检测HDV抗体是实验室常用的检测手段，IgM被认为是HDV感染中具有代表性的标志物之一，而且其清除效率与疾病的疗效紧密相关；IgG会在HDV感染后持续存在。HDV RNA 是当前诊断HDV感染的“金标准”，HDV RNA的定量测定可用于监测抗病毒治疗的应答，RT-PCR方法对HDV RNA是实验室常用的检测手段。

记者问：目前丁型肝炎病毒的实验室检测方法的不足是什么？

任锋教授：ELISA方法检测HDV抗体时受到许多因素的影响：一方面，急性HDV 感染时，HDV抗体存在时间很短很难检出，所以HDV抗体阴性不能否定丁型肝炎的发生；而慢性HDV感染时，血液中的HDV抗体和抗原形成免疫复合物，会对检测结果造成影响。另一方面，HDV IgG与肝细胞受损和炎症活动密切相关，因此联合血清HDV RNA的检测结果才能确HDV抗体的阳性结果。尽管RTPCR检测具有快速、方便、特异等优点，但是，由于HDV RNA 中GC含量和互补性高，给HDV扩增带来了巨大的技术挑战，而且HDV的高度遗传变异性也使得需要精心设计其引物和探针。由于HDV RNA的广泛遗传变异性，迄今为止尚无完全标准化的PCR检测技术。

记者问：如何改进丁型肝炎病毒的实验室检测方法呢？

任锋教授：丁肝的检测主要包括抗原检测，抗体的检测和病毒核酸的检测三个方面：

1、ELISA方法检测HDV病毒抗原：存在窗口期短，灵敏度特异度较差的缺点。

2、HDV病毒抗体的检测包括IgG 型和IgM型。ELISA试剂盒通常使用间接法检测抗HDV-IgG，但是容易出现假阳性结果，不同厂家的试剂盒质量参差不齐，通常用于临床HDV感染的初步筛查。ELISA检测抗HDV-IgM通常使用捕获法，抗HDV-IgM反映了患者体内HDV感染的情况，也可以用来指导HDV抗病毒治疗。但是目前检测试剂盒的准确性仍然需要进一步提高。

3、HDV RNA检测是诊断丁肝感染的金标准。目前RT-PCR检测灵敏度可以达到103拷贝/微升，巢式PCR 检测下限可以达到10拷贝/微升。但是由于HDV基因组高度可变性，给引物的设计带来了巨大的挑战。目前尚无统一的标准，不同实验室的结果也不具有可比性。

记者问：你们实验室在丁型肝炎病毒的精准检测方法方面有什么新进展？

任锋教授：针对于HDV的检测，我们课题组分别从抗体、核酸两个方面对检测方法进行了探索与改进：

1、抗体检测：目前 ELISA试剂盒普遍使用酶催化底物的显色反应，存在灵敏度不高，特异性不强的缺点。我们课题组对HDV抗原重新表达，纯化，将其固定于固相载体，并且进一步与纳米酶显色技术相结合，进一步提高检测的灵敏性和稳定性。

2、核酸检测：首先，基于微滴数字PCR技术，建立了可以绝对定量HDV患者体内HDV RNA水平的ddPCR技术检测方法，检测下限可低至单个拷贝。其次，我们使用最新的CRISPR/Cas13a检测技术建立了对HDV RNA进行精准、快速的检测方法，检测下限分别低至10拷贝/微升和100拷贝/微升。

相信经过我们的努力，在不远的将来我们的研究成果可以投入HDV的临床应用检测，更有利于HDV感染的早期筛查，为更多的临床医生和患者提供帮助。