影响枸橼酸莫沙必利片溶出度检测结果的因素探讨

＊李思敏 吴愫青

（珠海市食品药品检验所 广东 519090）

枸橼酸莫沙必利是一种消化道促动力药，通过兴奋胃肠道胆碱能中间神经元及肌间神经丛的5-HT4受体，促进乙酰胆碱的释放，从而增强胃肠道运动，改善患者的功能性消化不良伴有胃灼热、嗳气、恶心、呕吐、早饱、上腹胀等胃肠道症状[1]，治疗的同时不影响胃酸的分泌,无锥体外系反应和腹泻等副作用，耐受性良好[2]，临床上得到广泛应用。产品在生产、流通、使用环节的监管过程中，由于枸橼酸莫沙必利的水溶性小，溶出度结果偏低甚至不合格是检验中常见的问题，因此溶出度的结果也就成为影响枸橼酸莫沙必利片质量的关键因素。本文从影响枸橼酸莫沙必利片溶出量的3个不同处理方式着手考察溶出度实验结果，并对得出的数据进行分析，筛选出最佳的溶出度检测方案，为评定和控制枸橼酸莫沙必利片的质量提供科学依据。

1.材料

(1)试药及试剂

枸橼酸莫沙必利片（批号：210703，福建某有限公司生产）；枸橼酸莫沙必利对照品（批号：100656-201903，中国食品药品检定研究院，含量94.2%）；甲醇、乙腈（色谱纯，默克生命科学技术有限公司）；磷酸氢二钾、无水磷酸氢二钠、枸橼酸钠、盐酸为分析纯，实验用水为超纯水。

(2)仪器

超纯水系统（默克生命科学技术有限公司）；溶媒脱气机（美国Distek）；智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；智能溶出试验仪和Agilent 1260高效液相色谱仪（安捷伦科技中国有限公司）。

2.实验过程及结果

(1)供试品溶液的制备及测定

照《中国药典》2020年版[3]溶出度与释放度测定法（通则0931第二法），以磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml为溶出介质，转速为50r/min，经45min时，取溶液10ml滤过，作为供试品溶液[4]。精密量取10μl注入液相色谱仪，照2.3.1方法测定，记录色谱图。

(2)对照品溶液的制备及测定

精密称取枸橼酸莫沙必利对照品15mg，置50ml容量瓶中，加2.3.1的流动相适量，超声使溶解，放冷，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液1ml，置50ml容量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取10μl注入液相色谱仪，照2.3.1方法测定，记录色谱图。

(3)高效液相色谱条件与系统适用性

①色谱条件。色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6×150mm，5μm）；流动相：乙腈-甲醇-枸橼酸盐缓冲液（取枸橼酸钠8.82g，加水800ml使溶解，用稀盐酸调节pH值至3.3，加水稀释至1000ml）（7:9:24）；测定波长：274nm；进样体积：10μl。

②系统适用性。根据对照品溶液与供试品溶液的色谱图，见图1及图2，色谱图峰形良好，根据图2枸橼酸莫沙必利供试品的色谱图数据，莫沙必利峰的保留时间约为9min（保留时间=9.66min），理论塔板数按莫沙必利峰计不低于4000（理论塔板数=4113），对称因子应不大于2.0（对称因子=1.32），均符合系统适用性要求，系统适应性良好。

图1 枸橼酸莫沙必利对照品液相色谱图

图2 枸橼酸莫沙必利供试品液相色谱图

(4)不同因素对溶出量的考察结果

①采用不同品牌溶出度试验仪的溶出度结果比较

照《中国药典》2020版四部溶出度与释放度测定法（通则0931第二法）测定，随机取本品12片，分别置于两台不同品牌溶出度试验仪的6个溶出杯中，以经溶媒脱气机脱气处理的37℃磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml为溶出介质，转速为50r/min，依法操作，在45min取出溶液10ml，用聚醚砜0.45μm微孔滤膜过滤，弃去2ml初滤液后，取续滤液作为供试品溶液。精密量取10μl注入液相色谱仪，照2.3.1方法测定，记录色谱图。结果按外标法以峰面积计算每片溶出量，限度为标示量的80%。其溶出量见表1。

表1实验数据显示，弃去2ml初滤液的试验条件下，两台仪器的测定结果皆不合格，而且测定结果相近，天津市天大天发科技有限公司（以下简称天大天发）的溶出度仪较安捷伦科技中国有限公司（以下简称安捷伦）的溶出度仪测定结果略高，提示在此试验条件下，不同品牌溶出度仪对最终结果的影响可以忽略。

表1 不同品牌溶出度试验仪的溶出度结果

②溶出液采取不同处理方法的溶出度结果比较

考虑到微孔滤膜的吸附作用，我们设计了2种溶出液的处理方法，即离心法、微孔滤膜过滤法进行比较。随机取本品6片，置于天大溶出度试验仪的6个溶出杯中，以经溶媒脱气机脱气处理的37℃磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml为溶出介质，转速为50r/min，依法操作，在45min取出溶液10ml，各2份，其中1份用3000r/min离心5min后取上清液；另1份用聚醚砜0.45μm的微孔滤膜过滤，弃去初滤液8ml，收集续滤液，各精密量取10μl注入液相色谱仪，照2.3.1方法测定，结果以色谱峰面积按外标法计算，限度为标示量的80%，重复该实验3次，实验结果见表2。

表2 溶出液不同处理方法的溶出度结果

表2实验数据显示，经两种方式处理后测得溶出量皆合格，两种方法所得结果基本相近，离心条件下所得溶出量略高，考虑到药典通则的溶出度与释放度测定法中要求溶出液需用适当的微孔滤膜滤过，因此采用离心法测定枸橼酸莫沙必利片溶出量，只是作为微孔滤膜对枸橼酸莫沙必利吸附作用的一个证明。下一步我们还是考虑采用微孔滤膜滤过样品溶出液的方法测定溶出量。在此基础上，我们设计了实验方案用于排除滤膜吸附的影响。

③滤膜吸附的影响实验

A.两种材质微孔滤膜对枸橼酸莫沙必利吸附的比较

随机取本品6片置于溶出度试验仪的6个溶出杯中，分别置于天大天发溶出度试验仪的6个溶出杯中，以经溶媒脱气机脱气处理的37℃磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml为溶出介质,转速为50r/min，依法操作，在45min取出供试品溶液10ml各2份，分别用尼龙和聚醚砜两种材质的0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液3ml，收集续滤液。各精密量取10μl注入液相色谱仪,照2.3.1项下方法测定，结果以色谱峰面积按外标法计算，限度为标示量的80%，其溶出量见表3。

表3 不同材质微孔滤膜对枸橼酸莫沙必利吸附的溶出度结果

表3试验数据显示，采用不同材质微孔滤膜处理后的枸橼酸莫沙必利片溶出度结果皆不合格，聚醚砜材质的微孔滤膜的测定结果较尼龙材质的微孔滤膜测定结果略高，说明在这种实验条件下，不同材质滤膜对溶出量影响不大。

B.滤膜吸附曲线

基于以上原因，通过综合考虑滤膜的吸附饱和性，我们采取以下方案进行研究，弃去不同体积的初滤液后收集续滤液进样，绘制体积和最终溶出结果的吸附曲线，从而选择最佳方案。具体做法如下：随机取本品6片置于溶出度试验仪的6个溶出杯中，分别置于天大天发溶出度试验仪的6个溶出杯中，以经溶媒脱气机脱气处理的37℃磷酸盐缓冲液（pH6.8）900ml为溶出介质,转速为50r/min，依法操作，在45min取出供试品溶液15ml各5份,分别用聚醚砜0.45μm微孔滤膜弃去初滤液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml的续滤液[5]收集续滤液。各精密量取10μl注入液相色谱仪,照2.3.1方法测定，结果以色谱峰面积按外标法计算，限度为标示量的80%，重复该试验3次，3次溶出度检测结果见表4、表5及表6，3次试验溶出度检测结果见表7，根据表7结果绘制的吸附曲线见图3。

表4 第1次滤膜吸附曲线结果

表5 第2次滤膜吸附曲线结果

表6 第3次滤膜吸附曲线结果

表7 3次滤膜吸附曲线试验平均值

图3 滤膜吸附曲线

吸附曲线显示，经聚醚砜微孔滤膜过滤弃去初滤液2ml、4ml、6ml的续滤液溶出量均不合格，RSD为82.2%，但是，随着弃去初滤液体积的增加，溶出量呈上升趋势，说明滤膜对枸橼酸莫沙必利有一定的吸附，而弃去初滤液8ml、10ml的续滤液测量结果合格且RSD为2.2%，而且在这2个弃去初滤液体积条件下，吸附曲线呈平缓趋势，进一步说明滤膜对枸橼酸莫沙必利的吸附一定体积后达到饱和状态，所以，实验证明，为保证溶出度检查的准确性，至少需弃去初滤液8ml。

3.讨论

由于溶出介质中的气体会影响药品的溶出量，本次实验使用的溶出介质是经溶媒脱气机脱气处理的37℃磷酸盐缓冲液（pH6.8）。本次实验我们先用实验数据对影响枸橼酸莫沙比利片溶出度检测结果的因素进行分析，包括采用不同品牌溶出度试验仪的溶出度结果比较、溶出液采取不同处理方法的溶出度结果比较以及滤膜吸附的影响实验。发现在磷酸盐缓冲液（pH6.8）中，微孔滤膜对枸橼酸莫沙必利有一定的吸附，从而得出微孔滤膜的吸附作用对检测结果的影响最大，并进一步考察如何排除滤膜吸附的影响，考察结果为：弃去初滤液8ml的续滤液的检验结果最佳。因此为保证溶出度检查的准确性，所得供试品溶液至少需弃去初滤液8ml，尽量避免实验过程中频繁更换微孔滤膜导致溶出度结果偏低。由于枸橼酸莫沙必利不溶于水，不同生产厂家的处方、工艺以及采用的不同溶出度测定方法等因素都影响其最终的溶出量，我们的实验希望给大家进一步的考察提供参考。