类风湿关节炎患者血清LncRNA MEG3、miR-141水平变化及意义

黎志锋，林嘉鸿，罗绮雯，陈国强

佛山市第一人民医院内科，广东佛山 528000

类风湿关节炎（RA）是一种以侵蚀性关节炎为主要临床表现的慢性系统性自身免疫性疾病，基本病理表现以滑膜炎和血管翳形成为主，可逐渐破坏关节软骨和骨结构，最终导致关节畸形甚至功能丧失［1］。我国RA发病率为0.42%，男女患病率约1∶4，残疾和功能受限发生率随着病程延长而升高［2］。非编码RNA 是一类不编码蛋白质的RNA。近年来研究表明，非编码RNA 具有调节软骨发育和维持软骨代谢等作用，在RA 发生发展过程中扮演重要角色［3］。母系表达基因3（MEG3）是首个被发现具备抑癌功能的长链非编码RNA（LncRNA）。近年研究发现，在骨性关节炎（OA）软骨组织中LncRNA MEG3表达下调，并与软骨退化程度呈负相关［4］。微小RNA-141（miR-141）为新近发现的一种miRNA。研究发现，OA 大鼠背根神经节组织中miR-141 表达上调，具有调节疼痛作用［5］。关于 LncRNA MEG3 和miR-141 与 RA 的关系尚不明确。2019 年 5 月—2021 年5 月，我们探讨了RA 患者血清LncRNA MEG3、miR-141水平变化及意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本院2019 年5 月—2021 年5月收治的211例RA 患者。根据病情分为两组：活动期组 109例，男 38例、女 71例，年龄 37～78（58.1 ±6.2）岁，病程0.4～4.8（2.18 ± 0.88）年，首发症状：外周小关节肿胀疼痛57例、负重关节肿胀疼痛52例；缓解期组 102例，男 42例、女 60例，年龄 32～74（58.3± 6.7）岁，病程0.5～4.3（2.20± 0.74）年，首发症状：外周小关节肿胀疼痛53例，负重关节肿胀疼痛49例。纳入标准：①符合《2018 中国类风湿关节炎诊疗指南》［6］诊断标准；②年龄＞18岁；③患者均知情同意且签订知情同意书；④相关临床基线资料及实验室数据完整。排除标准：①有既往治疗史者；②并发重要脏器（心、肝、肾）功能不全者；③合并糖尿病、高血压、脓毒症、血液系统疾病者；④合并其他自身免疫性疾病者；⑤关节严重外伤史者。另选取同期相匹配的72例体检健康者为对照组，男24例、女48例，年龄28～78（56.1 ± 6.5）岁。三组性别、年龄比较差异无统计学意义，活动期组与缓解期组病程和首发症状比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。本研究经医院伦理委员会批准（20190213）。

1.2 血清LncRNA MEG3、miR-141、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）检测 提取受试者空腹静脉血6 mL，离心上清液分为两份各3 mL，并置于特定环境保存待检。其中一份提取血清总RNA，进行qRT-PCR 试验，反应体系：互补 DNA 2 µL；Mix 10µL；ROX 0.4µL；DEPC 水3.6µL；正反向引物各2 µL。LncRNA MEG3 正向引物：5'-GGGCTTCTGGAATGAGCATGCTACTG-3'，反向引物：5'-ACATTCGAGGTCCCCTTCCCACGTAGGCATC-3'，扩增片段长度 127 bp；miR-141 正向引物：5'-GCCTGTAGCTTTTCCTACT-3'，反向引物：5'-CACGGCGGTTCGTCGAGT-3'，扩增片段长度132 bp。反应条件：95 ℃ 15 s、62 ℃ 32 s、73 ℃ 15 s，循环 40 次。分别以 GAPDH 和 U6 做内参校正；2-ΔΔCt法计算血清LncRNA MEG3、miR-141 相对表达量。另一份采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-α、IL-6、MMP-3，试剂盒均由上海谷研实业有限公司提供。比较三组血清 LncRNA MEG3、miR-141、MMP-3、TNF-α、IL-6 水平。

1.3 统计学方法 采用SPSS26.0 统计软件。计数资料以例（%）表示，比较采用χ2检验；计量资料正态分布且方差齐以表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析；采用Pearson法进行相关性分析；多因素Logistic 回归分析RA 发生的影响因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清 LncRNA MEG3、miR-141 水平对 RA 的诊断价值，曲线下面积（AUC）比较采用Z检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组血清LncRNA MEG3、miR-141水平比较 对照组、缓解期组、活动期组血清LncRNA MEG3 水平分别为1.03±0.28、0.80±0.25、0.43±0.17，miR-141 水平分别为 1.37 ± 0.48、1.85 ± 0.55、2.60 ±0.84，对照组、缓解期组、活动期组血清LncRNA MEG3 水平逐渐降低（P均＜0.05），miR-141 水平逐渐提升（P均＜0.05）。

2.2 三组血清MMP-3、TNF-α、IL-6 水平比较 对照组、缓解期组、活动期组血清MMP-3、TNF-α、IL-6水平依次提高（P均＜0.05）。见表1。

表1 三组血清MMP-3、TNF-α、IL-6水平比较（）

表1 三组血清MMP-3、TNF-α、IL-6水平比较（）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与缓解期组比较，#P＜0.05。

组别活动期组缓解期组对照组n 109 102 72 F P IL-6（ng/L）45.96±11.94*#16.90± 5.46*6.46± 1.91 595.098＜0.01 MMP-3（pg/mL）231.75±81.98*#177.14±28.83*138.25±28.60 64.337＜0.01 TNF-α（ng/L）146.87±53.61*#96.13±28.96*61.20±18.35 112.373＜0.01

2.3 RA 患 者 血 清 LncRNA MEG3、miR-141 与MMP-3、TNF-α、IL-6 水平的相关性 Pearson 相关性分析结果显示，RA 患者血清LncRNA MEG3与 miR-141、MMP-3、TNF-α、IL-6 水平呈负相关（r分别为-0.478、-0.374、-0.370、-0.541，P均＜0.05），miR-141 与 MMP-3、TNF-α、IL-6 水平呈正相关（r分别为0.387、0.356、0.368，P均＜0.05）。

2.4 影响RA 发生的多因素Logistic 回归分析结果 高血清 MMP-3、TNF-α、IL-6、miR-141 水平为RA 发生的独立危险因素（P均＜0.05），高 LncRNA MEG3 水平为独立保护因素（P＜0.05）。见表2。

表2 影响RA发生的多因素Logistic回归分析结果

2.5 血清 LncRNA MEG3、miR-141 水平对 RA 的诊断价值 ROC曲线显示，LncRNA MEG3+miR-141诊断RA的AUC大于LncRNA MEG3、miR-141单独诊断（Z分别为2.752、3.843，P均＜0.05）。见表3。

表3 血清LncRNA MEG3、miR-141水平对RA的诊断价值

3 讨论

RA 好发于手、足、腕等小关节，呈对称性分布，不仅能引起关节肿胀、畸形、脱位，还可累及其他器官，并发抑郁症、恶性肿瘤、心血管疾病、肺部疾病等。RA 基础病理改变为关节软骨和骨组织破坏，MMP-3 为一种锌钙依赖酶，可通过分解基质黏附蛋白、Ⅸ型胶原、聚集蛋白聚糖等细胞外基质参与骨关节和骨组织破坏，与RA患者关节损伤状况和预后密切相关［7］。目前，多数学者认为与巨噬细胞和T淋巴细胞释放大量炎性因子破坏骨关节为主要发病机制，其中TNF-α和IL-6是两个关键炎性因子［8］。

LncRNA MEG3 位于人染色体14q32，在多种肿瘤中通过调控启动子超甲基化和基因缺失等功能发挥抑癌作用［9］。CHEN 等［10］研究发现，OA 中LncRNA MEG3 表达下调，使用 IL-1β 提升 LncRNA MEG3 表达后可诱发软骨细胞增殖，抑制凋亡，延缓软骨细胞-细胞外基质降解。本研究结果显示，对照组、缓解期组、活动期组血清LncRNA MEG3 水平逐渐降低，进一步分析发现，高血清LncRNA MEG3水平为RA 发生独立保护因素，说明LncRNA MEG3能反映RA发生发展，但其作用尚不明确。本研究结果显示，对照组、缓解期组、活动期组血清MMP-3、TNF-α、IL-6 水平依次提高，符合 RA 病情发展。XU等［11］研究报道，胃癌中 LncRNA MEG3 表达下调，MMP-3 表达上调。本研究结果显示，RA 患者血清LncRNA MEG3与MMP-3、TNF-α、IL-6水平呈负相关，推测 LncRNA MEG3 可能通过抑制 MMP-3、TNF-α、IL-6表达发挥RA保护作用。

miR-141 位于人染色体12p13.31，既往研究报道其作为癌基因或抑癌基因调节不同信号转导通路，参与多种肿瘤中增殖、分化、迁移等功能［12］。转化生长因子-β（TGF-β）是多功能多肽生长因子，能调节骨、软骨细胞增殖、分化及细胞外基质合成，与RA 发展密切相关［13］。TIAN 等［14］研究显示，股骨头坏死小鼠组织中miR-141表达上调，抑制miR-141表达能通过上调TGF-β2表达提升骨细胞活性。胡玲等［5］研究结果显示，miR-141 参与了 OA 关节疼痛病理变化调节。本研究结果显示，对照组、缓解期组、活动期组血清miR-141 水平逐渐提升，高血清miR-141水平为RA 发生独立危险因素，说明高血清miR-141 水平参与 RA 发生发展。RA 中 TNF-α 能诱导MMP-3 表达，共同参与病情进展［15］。VERMA 等［16］研究发现，中风小鼠脑组织中miR-141 表达上调，抑制miR-141 表达可上调TGF-β1、胰岛素生长因子-1表达，下调TNF-α、IL-6表达，缩小梗死面积。本研究结果显示，RA 患者血清 miR-141 与 MMP-3、TNF-α、IL-6 水平呈正相关，提示miR-141 可能通过上调MMP-3、TNF-α、IL-6表达参与骨关节损伤。

LI 等［17］研 究 报 道 ，RA 软 骨 细 胞 中 LncRNA MEG3表达下调，miR-141表达上调。本研究结果显示，RA 患者血清 LncRNA MEG3 与 miR-141 水平呈负相关，提示二者可能存在相互作用，共同参与RA发生发展。ROC 曲线分析结果显示，LncRNA MEG3、miR-141诊断RA的AUC均大于0.80，说明二者均对RA 具有良好诊断价值，联合诊断AUC显著增大，说明联合诊断能更好评估RA 发生和病情发展。

综上所述，RA 患者血清LncRNA MEG3 水平降低，miR-141 水平提升，可能通过相互作用调控炎性反应，与RA 病情发展密切相关，二者联合检测有助于评估RA发生和病情发展。