终末期肾脏病血液透析患者血清LncRNA CASC15 LncRNA MALAT1表达及临床意义

费冰茹， 周 惠， 王苏雨， 庄 凌

(南京医科大学附属淮安第一医院, 江苏 淮安 223000)

慢性肾脏病(Chronic kidney disease，CKD)在全球属于发病率高、死亡率高、疾病负担高的慢性疾病，对公共卫生系统产生较大负担[1]。当慢性肾脏病患者代谢产物和毒素无法排出时可进展至终末期肾脏病(End-stage renal disease，ESRD)阶段，虽然腹膜透析或血液透析治疗在一定程度上可延长患者预期寿命，但是目前仍缺乏有效的生物标志物，用于病情及预后的评估[2,3]。长链非编码RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)是一类长度超过200bp的非编码RNA，近年来研究[4,5]不断阐明了LncRNA参与遗传性疾病、肿瘤、肝、肾疾病调控过程。目前研究[6]发现LncRNA存在多个细胞来源，在不同疾病中发挥多样化生物调控作用，其中LncRNA CASC15被发现参与肾脏足细胞损伤过程，而敲低LncRNA MALAT1 则与急性肾损伤缓解有关；对接受血液透析治疗的终末期肾脏病患者而言，其血清中LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达改变及其临床意义尚不明确，本研究对此进行探讨，现将结果报道如下。

1 对象与方法

1.1研究对象:选择本院2019年1月至2020年12月开始规律透析治疗终末期肾脏病患者为研究组。纳入标准：①以CKD-MDRD公式计算估算的肾小球滤过率(Estimated glomerular filtration rate，eGFR)，符合KDIGO标准中CKD5期诊断。②首次在本院行血液透析且入院时病情稳定。③临床资料完整。④>18周岁。排除标准：①合并恶性肿瘤。②合并严重感染性疾病。③透析治疗史。④未完成随访。经筛选共纳入终末期肾脏病患者62例，按照1∶1比例随机选择本院首次开始透析治疗的CKD Ⅲ～Ⅳ期患者62例为对照组，研究组和对照组性别、年龄、原发疾病比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究纳入对象均签署知情同意书且研究设计严格遵循《赫尔辛基宣言》。

1.2临床资料:①通过电子病历系统获取所有患者性别、年龄和原发疾病情况。②研究组均在首次开始透析前1d抽血，采用SYSMEX五分类全自动血球计数仪(日本希森美康)和Cobas c800全自动生化分析仪(美国罗氏公司)对血液标本中血肌酐(Serum creatinine，SCr)、尿酸(uric acid，UA)、eGFR、总胆固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、尿素氮(Urea Nitrogen，BUN)、血红蛋白、C反应蛋白(C reactive protein，CRP)、血钙和血磷含量进行检测。

1.3血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达检测:研究组、对照组均在首次开始透析前1d抽取外周静脉血3mL，常规分离血清后以Trizol法(日本TAKARA公司)提取外周血总RNA，以NanoDrop2000超微量分光光度计分析RNA纯度及浓度，合格标本并按照逆转录试剂盒说明书规定步骤将其逆转录为cDNA，保存于-80℃备用。按照文献[7,8]中所用LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1引物序列合成相关引物，并使用GAPDH作为内参基因，引物合成由南京金斯瑞生物公司合成。以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Quantitive Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)基于SYBR Green法扩增目的序列，反应体系为25μL，反应条件设置为：预变性95℃ 3min，95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 36s，35个循环结束后，以2-ΔΔct法计算LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1相对表达量，根据计算结果中位数，将研究组患者分为LncRNA CASC15高表达组、LncRNA CASC15低表达组、LncRNA MALAT1高表达组、LncRNA MALAT1低表达组。

1.4随访:所有患者均在首次开始进入血液透析之日起接受随访，随访间隔为3个月，随访终点为随访达到1年或患者全因死亡，统计所有尿毒症患者开始血液透析1年可能导致患者死亡的临床终点事件，包括心血管事件(心力衰竭、严重心律失常、心肌梗死)、脑血管意外、严重感染、消化道出血和放弃治疗情况。

2 结 果

2.1两组一般资料比较:研究组血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达显著高于对照组，差异具有统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组血清LncRNA CASC15和LncRNA MALAT1表达比较

2.2研究组LncRNA CASC15高表达和低表达临床资料比较:LncRNA CASC15高表达组和LncRNA CASC15低表达组性别、年龄、原发病、UA、TC、TG、CRP、血钙和血磷比较差异无统计学意义(P>0.05)，LncRNA CASC15高表达组SCr、BUN高于LncRNA CASC15低表达组，eGFR、血红蛋白低于LncRNA CASC15低表达组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 研究组LncRNA CASC15高表达和低表达临床资料比较

2.3研究组LncRNA MALAT1高表达和低表达临床资料比较:研究组LncRNA MALAT1高表达和LncRNA MALAT1低表达组性别、年龄、原发疾病、TC、TG、BUN、CRP、血钙和血磷水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；LncRNA MALAT1高表达SCr、UA、BUN高于LncRNA MALAT1低表达组，eGFR、血红蛋白低于低表达组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

2.4不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达水平发生终点事件比较:不同LncRNA CASC15表达水平尿毒症患者发生心血管事件、全因死亡率差异具有统计学意义(P<0.05)，不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达水平放弃治疗(全因死亡)比较差异具有统计学意义(P<0.05)，不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达水平分组脑血管意外、严重感染和消化道出血发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表4、表5。

表5 不同LncRNA MALAT1表达水平发生终点事件比较

3 讨 论

由于地区经济水平差异、患者情况差异等诸多因素影响，终末期肾脏病患者进入血液透析时机存在较大差异。糖尿病肾病已成为终末期肾脏病患者进入血液透析的首要病因，其原因可能与合并糖尿病患者来院复查次数较多，相关检查较多，易于发现肾功能改变有关。目前临床中针对终末期肾脏病患者发生各类临床终点时间的危险因素已有较多报道，但尚缺乏有效的生物标记物反映患者整体性功能状态并对其预后进行准确预测。

LncRNA CASC15在既往报道中主要被发现参与急性肾损伤、膀胱癌、肝细胞癌等恶性肿瘤病理发展过程，与LncRNA CASC15相比LncRNA MALAT1与肾相关疾病关系已有较多报道：Liu等[7]研究发现lncRNA MALAT1参与梗阻性肾病肾组织细胞纤维化进程；Zhou等[8]研究结果中，LncRNA MALAT1在糖尿病肾病患者中高表达，与肌酐等传统实验室指标联合检测可提高糖尿病肾病诊断价值；本研究结果显示研究组血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达显著高于对照组，说明与CKD3～4期患者相比，CKD5期患者LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1呈显著上调，可能与CKD3～4进展至CKD5期有一定关联；本研究进一步分析首次终末期肾脏病开始血液透析前LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1与临床资料关系，结果显示二者均与SCr、BUN、eGFR、血红蛋白等终末期肾脏病患者肾功能指标及营养功能指标相关，在UA指标上存在一定差异。说明LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1可能参与了终末期肾脏病患者肾功能恶化进程，但不同LncRNA 影响肾功能指标差异可能与指标有关或与病例数较少有关还需进一步研究。

包括心力衰竭、严重心律失常、心肌梗死等在内的心血管事件是导致终末期肾脏病患者血液透析期间死亡的重要原因之一，在本研究统计结果中心血管事件相较其他临床终点事件发生率也较高。本研究比较结果发现不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达水平发生心血管事件和放弃治疗(全因死亡)存在显著差异，说明LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表达对终末期肾脏病血液透析患者预后有一定影响，而脑血管意外、严重感染和消化道出血发生率无差异，可能与本研究纳入患者病例数较少有关。足细胞是肾小球上“章鱼样”高度特异性细胞，是肾小球滤过屏障的重要组成部分，足细胞损伤是导致CKD患者病理进展的重要机制，Qin等[9]研究显示LncRNA CASC15在糖尿病诱导的慢性肾功能衰竭中可通过下调miR-34c表达的方式促进足细胞凋亡过程，LncRNA MALAT1则可通过调控ERK/MAPK信号通路对糖尿病大鼠微血管病变和糖尿病肾病产生促进作用[10]，据此研究结果推测，LncRNA CASC15和LncRNA MALAT1可能分别通过影响足细胞凋亡和微血管病变途径影响终末期肾脏病患者心血管并发症和预后。

综上所述，本研究分析结果发现LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1在终末期肾脏病血液透析患者血清中显著上调，与患者临床参数和透析临床终点时间密切相关，有望成为治疗靶点进行深入研究，但本研究为单中心研究，随访过程中无法对所有变量完全控制，所得结论还需更大样本的前瞻性研究检验和完善。