早发重度子痫前期患者胎盘组织血清M-CSF、TNF-α表达及临床意义

刘艳云，鄢晓燕

(鄂东医疗集团市妇幼保健院/湖北理工学院附属医院,湖北 黄石 435003)

0 引言

早发型重度子痫前期(pre-eclampsia，PE) 一般认为是指≤28 ～34 周为重度子痫前期，其中孕周不足28 周者达70%，孕周不足20 周甚至不足12 周发生率较低[1-2]。有学者认为：早发型子痫前期与子宫胎盘灌注异常、胎盘组织功能受损有关，被称为胎盘子痫前期；晚发型子痫前期作为母体胎盘滋养细胞侵入、过度炎性在机体的全身性反应，被称为母体PE，具有潜在慢性炎症条件的孕妇中发生频率更高[3]。

有文献报道：血清和胎盘组织中M-CSF 升高，促使巨噬细胞明显增加，滋养细胞凋亡，螺旋小动脉重塑受阻，致胎盘血管内皮缺血缺氧，而使TNF-α 分泌增加，造成内皮细胞损伤及功能紊乱，是子痫前期的发病机制[4]。临床关于M-CSF 与PE 发展机制的研究，取得了重大进展，目前研究对影响早发型重度PE 发展的机制尚不明确，对于胎盘组织中M-CSF 与TNF-α 的相互作用机制与早发型重度PE 发展的研究报道较少，王芝琴等研究认为TNF-α 表达水平可以评估患者疾病病情的严重程度[5]。本研究对早发重度子痫前期胎盘组织中M-CSF、TNF-α 的水平表达及对其相关角度进行研究，分析它们之间的相互协同作用机制，探讨其对胎盘滋养细胞侵入、过度炎性反应的影响，对早发型重度PE 的病理机制与不良妊娠结局发生率的相关性进行分析。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2017年1月至2018年12月住院治疗的子痫前期患者，早发重度PE 组患者91例、晚发重度PE 组患者64例和同意参与研究的正常妊娠孕妇60例为研究对象，两组孕妇均为初产妇，单胎妊娠，年龄21～29 岁，平均（23.5±6.7）岁。依据《妇产科学，第8 版》诊断标准，排除：糖尿病、慢性高血压、肾脏疾病、心血管等孕前相关病史。研究对象围产期保健记录数据（研究对象的年龄、身高、体重和营养状态）比较P>0.05，差异无统计学意义，具备研究条件。本研究通过医院伦理委员会审查备案，征得患者知情同意签署同意书，保护其隐私和匿名权，所有资料仅用于研究。

1.2 方法

准备胎盘组织标本，检验采用免疫组化法，将小鼠抗人TNF-α 单克隆抗体试剂或兔抗人M-CSF单克隆抗体，室内4oC 温下孵育1～2h；加入山羊抗小鼠／兔IgG 用PBS 洗涤3 次后苏木素色剂复染5min，中性树胶固定封片[6]。高倍镜检视野观察M- CSF 的阳性颗粒为棕褐色，它主要在滋养层细胞的细胞质中表达。TNF-α 为棕黄色阳性颗粒，主要在细胞浆或细胞膜内表达，以阳性细胞数与滋养细胞总数评估阳性与染色强度之和的比率；采集10 ml 孕妇空腹静脉血分离血清，用于M-CSF、 TNF-α 等生化指标检测。分析M-CSF 和TNF-α在胎盘组织中的表达关系，与不良妊娠结局发生率的相关性。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0统计软件进行统计处理，M-CSF、TNF-α 阳性表达率采用例的百分比表示；两两比较M-CSF 与TNF-α 在不同PE 组患者胎盘组织阳性表达率，并对相关性进行分析，采用F 检验；比较早发重度子痫前期与晚发重度PE 和正常妊娠孕产妇不良妊娠结局发生率，采用t/χ2检验，当P<0.05 时差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胎盘组织M-CSF、TNF-α 表达比较早发重度PE 组、晚发重度PE 组与正常妊娠组中M-CSF 的表达F=42.47，P<0.01；阳性表达率比较F=97.36，P<0.001； TNF-α 的表达F=64.84，P<0.01；阳性表达率比较F=84.30，P<0.001。见表1。

2.2 M-CSF 与TNF-α 在胎盘组织中的相关性分析 M-CSF 与TNF-α 在子痫前期患者胎盘组织阳性表达r=47.01，P<0.001，相互之间表达关系存在正相关。见表2。

表2 M-CSF 与TNF-α 在胎盘组织阳性表达的相关性分析

3 讨论

2.3 早发重度PE 组与其它妊娠组不良妊娠发生率比较P<0.01，差异有统计学意义，说明早发重度PE M-CSF、TNF-α 表达程度与不良妊娠结局的发生率高度相关。见表3。

表3 早发重度PE 组与其他妊娠组不良妊娠结局发生率比较[n(%)]

子痫前期的病理机理变化十分复杂，有研究认为胎盘组织滋养细胞侵润能力不足，使母体子宫螺旋动脉的转运功能异常，导致子宫胎盘灌注不良[12]，所以过度的炎症反应致使机体组织内皮细胞活化功能障碍，是子痫前期主要病理生理特征，是导致PE 发病及影响其严重程度的主要因素。

M-CSF 是由子宫胎盘组织内膜、蜕膜产生和分泌的，滋养细胞侵袭不足及血管转化不良影响其分泌量，其主要生物学活性表现为IgA 介导的吞噬作用、细胞毒性（ADCC）效应增强及细胞表面粘附分子表达水平[8]，有研究检测子痫前期M-CSF 在PE 血清和胎盘组织的表达水平明显增高，以致胎盘缺血、缺氧，引起先兆子痫。研究发现，由于M-CSF 异常增生，巨噬细胞的表达和蜕膜的树突状细胞浸润，使血管重塑过程产生胎盘缺血缺氧，逐步改变整个生理进程[9]。

TNF-α 作为一种由胎盘组织绒毛中产生单核因子，参与胎盘内皮细胞凋亡过程，作用于机体诱导促炎性细胞因子增加，在白细胞介素-6(Interleukin-6)、白 介 素-8(Interleukin-8) 和趋化蛋白(Chemotactic protein) 的作用下，促使血管细胞粘附分子和内皮细胞活化标志物细胞间粘附分子的表达增强，TNF-α 通过NF-KB 信号通路诱导M-CSF 的分泌异常导致早发型重度PE。TNF-α 释放机制，认为其作用于血管细胞促使炎性细胞因子的异常增生，是发生不良妊娠结局的重要因素，研究证实TNF-α 通过NF-KB 信号通路诱导M-CSF 的分泌异常导致早发型重度PE，且早发型重度PE 比较晚发型重度PE 不良妊娠发生率影响更大[10]。TNF-α 与子痫前期的严重程度相关，而M-CSF 可能刺激其靶细胞释放TNF-α、IL-1 等炎性细胞通过孕妇血液循环，致使大量坏死滋养细胞进入母体，导致机体内皮细胞异常增生，炎性细胞的毒性反应是引起孕妇的围产期疾病发生的重要因素[11]。妊娠期高血压是早发型重度子痫前期并发症，内皮细胞损伤致使血栓素分泌增加，而使血压恶性增高，32 周以下早发型重度PE 是高围生期新生儿死亡率和不良妊娠结局的重要时段。一般认为重度PE 患者24hpro 定量超过5g 需要终止妊娠, 笔者认为可根据孕妇的孕周、临床症状等综合考虑, 在不超过5 g 的情况时,采取积极的期待治疗措施, 尽量延长孕妇的孕周, 改善新生儿的预后, 而当24 h 尿蛋白定量>5 g 且妊娠>34 周时,为了降低不良妊娠结局发生,可选择终止妊娠[12]。

本研究结果显示：早发重度PE 组与晚发重度PE 组和正常妊娠组中M-CSF、TNF-α 表达水平比较P<0.01，有统计学意义；M-CSF 的阳性表达率和TNF-α 的阳性表达率比较P<0.001，相关分析PE胎盘组织M-CSF 和TNF-α 阳性表达呈明显的正相关系（r=47.01，P<0.001）；早发型重度子痫前期不良妊娠结局发生率均高于晚发重度PE 组与正常妊娠P<0.05，差异有统计学意义。

早发型子痫前期孕妇胎盘中M-CSF 和TNF-α的表达水平，提示早发型重度 PE 的胎盘损害程度，相关性分析显示它们之间呈正相关，协同参与了早发重度 PE 的发生发展，说明两者可能在早发型重度PE 的发病机制中存在相互作用。随着早发重度 PE 的发生发展，对胎盘的损害程度加重，不良妊娠发生率P<0.05，差异有统计学意义。因此进一步研究M-CSF 和TNF-α 在子痫前期孕妇胎盘中的表达关系，为早发重度子痫前期的预防和治疗提供理论依据具有重要的临床意义。