法薏苡仁与《中国药典》收载的炮制品对比研究

杨焕林，王 琪，杨 明，钟凌云，刘 博，吴云山，陆兔林，刘明贵，曾翠金，柯 瑞，徐葱茏，付建武*

(1.江西景德中药股份有限公司，江西 乐平 333302；2.景德镇市市场监督管理综合检验检测中心，江西 景德镇 333000；3.江西中医药大学 药学院，江西 南昌 330004；4.广州中医药大学附属第二医院，广东省中医药科学院，广东 广州 510006；5.南京中医药大学 药学院，江苏 南京 210023)

薏苡仁，始载于《神农本草经》，列为上品，是禾本科植物薏米(Coixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.) Stapf)的干燥成熟种仁，性凉，味甘、淡，具有利水渗湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结的功能[1-2]。现2020年版《中国药典》薏苡仁项下仅收载了薏苡仁和麸炒薏苡仁2个炮制品种[2]。法薏苡仁为薏苡仁采用樟帮特色炮制方法制备而成，目前仅收录在江西、广东、贵州等几个省份的中药饮片炮制规范[4-8]。法薏苡仁由薏苡仁生品经浸制、蒸制、炒制等多种方法炮制而得，其性由凉转微温，更适合儿童、老人以及某些特殊病症人群，且炮制后，法薏苡仁的利水祛湿、健脾止泻的功效显著优于目前其他的薏苡仁炮制品种[3]。但法薏苡仁炮制前后质量差异对比目前尚未见文献报道，本研究通过比较薏苡仁、麸炒薏苡仁和法薏苡仁中甘油三油酸酯含量与特征图谱中7个共有峰成分相对含量的差异，为体现薏苡仁古法炮制作用优势及中医临床应用提供实验依据。

1 材料与仪器

1.1 仪器

液相色谱 Agilent 1260 Infinity II液相色谱仪(Agilent Technologies，Inc，CA，USA)，Agilent 1260 蒸发光散射(ELSD)检测器(Agilent Technologies，Inc，CA，USA)，电子天平(MT104E，Sartorius，Germany)，超声清洗仪(8510E-MT，Bransonic，BRANSON ULTRASONICS CORPORATION，USA)。

1.2 试剂与药品

甘油三油酸酯对照品购自上海源叶生物科技有限公司(批号：S16M10I88463，纯度>99%)；甲醇为HPLC级(默克股份两合公司，4L)；水为超纯水(默克密理博有限公司，ELIX超纯水系统)。

编号“10～13”样品购于不同厂家(原药材源于不同产地)，其他薏苡仁炮制品由江西景德中药股份有限公司提供，见表1。

表1 不同薏苡仁炮制品

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB-C8柱(4.6 mm×150 mm，2.7 μm)；流动相：甲醇；洗脱方式：等度洗脱；流速：0.3 mL/min；柱温：30 ℃。蒸发光散射检测器参数：漂移管温度40 ℃，气体压力3.4 bar，Gain 11，Filter 10 s。

2.2 对照品溶液的制备

取甘油三油酸酯对照品39.682 5 mg，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理(90 W，45 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，制得每1 mL含甘油三油酸酯1.587 3 mg的对照品溶液，备用。

2.3 供试品溶液的制备

取样品粉末(过三号筛)约0.2 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入二氯甲烷10 mL，称定重量，超声处理(90 W，45 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失重量，摇匀，离心，取上清液。重复超声处理提取3次，合并滤液，摇匀，离心，取上清液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液，备用。

2.4 测定法

分别精密吸取对照品溶液1 μL、4 μL，供试品溶液2～3 μL，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱峰峰面积，用外标两点法对数方程计算甘油三油酸酯含量，即得。

2.5 精密度试验

按“2.1”项下色谱条件，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2 μL，分别连续进样6次，记录色谱峰峰面积，计算得甘油三油酸酯峰面积RSD分别为0.93%、1.29%，均小于2%。结果表明该仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

将“2.3”项下供试品溶液，在室温条件下放置0、1、2、4、8、12 h后测定，按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液2 μL进样1次，记录色谱峰峰面积，计算得甘油三油酸酯峰面积RSD为1.71%，小于2%。结果表明供试品溶液在室温下放置12 h内稳定性良好。

2.7 线性范围考察

精密移取上述“2.2”项下甘油三油酸酯对照品溶液适量，稀释成6个不同浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液2 μL，每个浓度的线性溶液各进样2次，记录色谱峰峰面积。以甘油三油酸酯浓度对数值为横坐标(X)，相应平均峰面积对数值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程，得Y=1.693 4X+4.602 4，相关系数为0.999 5。结果表明，甘油三油酸酯在0.050 1～0.401 0 mg/mL范围内浓度对数与峰面积对数呈良好线性关系。

2.8 重复性试验

取法薏苡仁样品粉末6份，每份0.2 g，精密称定，按“2.3”项下操作制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液2 μL，各进样2次，记录色谱峰峰面积，计算得法薏苡仁中甘油三油酸酯含量的RSD值为2.55%，小于3%。结果表明，本含量测定方法重复性良好。

2.9 加样回收试验

取甘油三油酸酯对照品适量，精密称定，加入适量甲醇，超声处理(90 W，45 kHz)使溶解，加甲醇定容，制成每mL含甘油三油酸酯0.5 mg的对照品储备液。精密吸取1 mL对照品储备液，精密加入色谱级甲醇，涡旋3 min，混匀，制成每1 mL含甘油三油酸酯0.132 mg的对照品溶液。

精密称取已知含量的法薏仁样品粉末9份，每份100 mg，精密称定，每3份为一组，每组分别按已知样品甘油三油酸酯含量的80%、100%、120%的比例加入一定量的甘油三油酸酯对照品溶液，摇匀，余按“2.3”项下操作制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，各进样2次，记录色谱峰峰面积并计算其回收率，见表2。测得回收率均在92%～105%限度范围内，平均回收率为99.66%，且其RSD值为1.96%，小于2 %。结果表明此方法准确度良好。

表2 加样回收率实验结果

2.10 不同薏苡仁炮制品甘油三油酸酯含量测定[9]

取不同薏苡仁炮制品样品，粉碎，过三号筛，按“2.3”项下操作制备成供试液，按“2.1”项下色谱条件，各进样2次，记录色谱峰峰面积并计算甘油三油酸酯含量，结果见表3。

表3 不同薏苡仁炮制品中甘油三油酸酯含量

结果表明，法薏苡仁的甘油三油酸酯含量最高；薏苡仁的甘油三油酸酯含量均大于0.50%，麸炒薏苡仁的甘油三油酸酯含量均大于0.40%，都符合2020年版《中国药典》规定标准。

2.11 不同薏苡仁炮制品共有峰成分的相对含量测定

在同一色谱条件，比较特征图谱下7个共有峰成分相对含量的变化，分别计算不同薏苡仁炮制品共有成分的相对含量，结果见图1、图2和表4。

注：A：峰1；B：峰2；C：峰3；D：峰4；E：峰5；F：峰6；G：甘油三油酸酯。图1 不同薏苡仁炮制品共有成分

图2 不同薏苡仁炮制品中共有峰相对含量变化

表4 7个共有峰成分的相对含量(%)

结果表明，不同薏苡仁炮制品中，峰1、峰3和峰5的相对含量变化显著，这种变化对疗效的影响值得进一步深入研究。

3 讨论

3.1 不同薏苡仁炮制品甘油三油酸酯含量

薏苡仁抗肿瘤主要成分是薏苡仁油中的甘油三酯类成分，包括甘油三油酸酯、甘油三亚油酸酯、1，2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1，2-油酸-3-棕榈酸甘油酯等[10]，其中甘油三油酸酯为2020年版《中国药典》中薏苡仁和麸炒薏苡仁质量评价的指标成分[2]。

本研究结果表明，同一地区(贵州)产的薏苡仁药材，甘油三油酸酯含量虽有一定的差异，但被炮制成法薏苡仁后，其检测出的甘油三油酸酯含量差异不大，均大于1.8%，含量最高且质量稳定。麸炒之后，甘油三油酸酯含量变化不大，说明麸炒并不会对薏苡仁的炮制以及成分发生根本性改变。本次收集的市面上麸炒薏苡仁的甘油三油酸酯含量参差不齐，但都不超过0.9%，远低于法薏苡仁。

3.2 不同薏苡仁炮制品共有成分的相对含量

从不同炮制品薏苡仁共有峰成分的相对含量结果分析，薏苡仁炮制成法薏苡仁后，共有成分的相对含量变化明显，峰1、峰3的相对含量明显升高，峰5的相对含量明显降低，峰2、峰4、峰6和甘油三油酸酯的相对含量变化不大。法薏苡仁与麸炒薏苡仁相比，法薏苡仁的峰1和甘油三油酸酯的相对含量明显较高。这意味着薏苡仁炮制品中峰1、峰3和峰5的相对含量发生改变可能是法薏苡仁药效显著增强的成分基础，法薏苡仁具有更强的利水祛湿、健脾止泻功效，则很有可能与峰1相对含量的升高有关。

4 结论

本研究结果显示，相比于生薏苡仁和麸炒薏苡仁，法薏苡仁的甘油三油酸酯含量更高，抗肿瘤效果更佳；薏苡仁炮制品中7个共有峰成分的相对含量，尤其是峰1、峰3、峰5的相对含量，可能是法薏苡仁健脾祛湿药效显著增强的成分基础。薏苡仁炮制品中7个共有成分的检识、以及相对含量的变化对疗效的确切影响和作用机制有待于进一步深入发掘及研究。