TAMs、PRL⁃3和C⁃erbB⁃2与乳腺癌淋巴结转移及预后的相关性

王丽娟 林晓茹 陈云婷 陈露文

乳腺癌的早期诊断及治疗对患者预后有积极影响，了解影响患者预后的危险因素，采取针对性预防措施也是降低患者预后不良的重要手段。以往研究显示，肿瘤微环境的改变与乳腺癌的发生有密切的联系［1］。肿瘤相关巨噬细胞（Tumor⁃asso⁃ciated macrophages，TAMs）占间质细胞的50%以上，是肿瘤微环境中的重要成份，众多研究表明TAMs 与多种恶性肿瘤发生、发展、预后关系密切，多种肿瘤中均存在TAMs 浸润［2］。研究表明，肝再生磷酸酶（Regenerative Phosphatase⁃3 ，PRL⁃3）与肿瘤转移之间存在联系，在胃癌、直肠癌等多种恶性肿瘤中均为高表达，可促进肿瘤细胞增殖、黏附及迁移［3］。人类表皮生长因子受体2（Human epi⁃dermal growth factor receptor 2，C⁃erbB⁃2）属于原癌基因，是目前公认的重要肿瘤标志物［4］。本文将通过分析TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 在乳腺癌中的表达情况，了解其与患者转移、预后的关系，以期为临床对乳腺癌转移、预后评估提供新方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年5月至2020年5月海南省三亚市妇女儿童医院收治的115 例乳腺癌患者术后病理组织作为观察组，均为女性，平均年龄（48.33±5.16）岁。淋巴结转移者46 例，未转移者69 例。纳入标准：①经术后病理检查及影像学检查诊断为乳腺癌，且符合《2020年CSCO 乳腺癌诊疗指南》［5］中的诊断标准；②临床资料完整；③签署知情同意书；④均为首次手术治疗者。排除标准：①合并其他脏器恶性肿瘤者；②入院前曾接受过放疗、新辅助化疗及肿物切除者；③合并免疫性疾病者。同时取观察组患者距肿瘤切缘＞5 cm 处远癌组织作为对照组。本研究经院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 检测方法

TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 均使用免疫组化学检测方法，检测试剂：TAMs 为鼠抗人单克隆CD68 抗体（北京中杉生物技术公司）；PRL⁃3 为一抗PRL⁃3 兔抗人多克隆抗体（北京中杉生物技术公司）；C⁃erbB⁃2 为兔抗人C⁃erbB⁃2 单克隆抗体（福州迈新生物技术开发有限公司），制片完成后以光学显微镜进行观察。

结果判读［6］：TAMs：在细胞膜、细胞浆内可见棕黄色或黄褐色颗粒为阳性；PRL⁃3 细胞质中见黄色或棕黄色颗粒为阳性；C⁃erbB⁃2 以细胞膜出现棕色或细胞膜浆着棕色为阳性。在100 倍镜下观察切片情况，计数时使用高倍镜（×400）。每个视野中计数100 个癌细胞中阳性表达细胞数，总共计数5 个视野，取平均值。

使用半定量积分法对结果进行判读［6］。0 分：无阳性细胞；1 分：阳性细胞数≤25%；2 分：阳性细胞数26%～50%，3 分：阳性细胞数51%～75%，4 分：阳性细胞数≥76%。以细胞着色程度进行评分：0 分：无着色细胞；1 分：细胞着色为淡黄色；2 分：着色为棕黄色；3 分：着色为着色为棕褐色。根据两结果得分计算结果：积分低于3 分为阴性，3 分以上则为阳性。

1.2.2 随访

患者手术治疗后随访12 个月，随访截止至2021年5月31日，了解患者预后情况，根据2020年CSCO 乳腺癌诊疗指南［5］分为预后不良组（高复发风险者）：①腋窝淋巴结≥4 个阳性，②淋巴结1～3 个阳性并伴有其他复发风险，③三阴乳腺癌；预后良好组（低复发风险者）：①淋巴结1～3 个（LumnianA 型），②Ki⁃67 高表达（≤30%），③肿瘤≤2 cm，④年龄≤35 岁。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行统计分析，计量资料采用（）表示，行t检验；计数资料采用n（%）表示，行χ2检验；采用多元Logistic回归分析影响乳腺癌患者预后生存的危险因素，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 表达情况比较

观察组TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 阳性表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图1、表1。

图1 TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2SP 染色图（SP，×400）Figure 1 TAMs，PRL⁃3 and c⁃erbb⁃2sp staining diagram（SP，×400）

表1 两组TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison of the expression of TAMs，PRL⁃3 and C⁃erbB⁃2 between the two groups［n（%）］

2.2 有无淋巴结转移者TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2表达情况比较

转移组TAMs、PRL⁃3及C⁃erbB⁃2阳性表达率明显高于无转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 有无淋巴结转移者TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 表达情况比较［n（%）］Table 2 Comparison of TAMs，PRL⁃3 and C⁃erbB⁃2 expression with or without lymph node metastasis［n（%）］

2.3 影响乳腺癌预后不良的因素分析

115 例患者随访12 个月后预后良好88 例（预后良好组），预后不良27 例（预后不良组）。预后不良组淋巴结转移者、病理分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、TAMs阳性、PRL⁃3 阳性、C⁃erbB⁃2 阳性占比明显高于预后良好组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.4 影响乳腺癌患者预后不良危险因素分析

赋予值见表3，Logistic回归模型分析得病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、TAMs、PRL⁃3及C⁃erbB⁃2 为影响乳腺癌预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。见表4。

表3 影响乳腺癌预后不良的因素分析［n（%）］Table 3 Analysis of factors affecting the poor prognosis of breast cancer［n（%）］

表4 影响乳腺癌患者预后不良危险因素分析Table 4 Analysis of risk factors affecting the prognosis of breast cancer patients

3 讨论

TAMs 为肿瘤间质细胞的重要一员，所占比例可达50%～80%，其可通过直接或间接的方式促进肿瘤发生与进展［7］。研究显示TAMs 可促进肿瘤细胞分裂、血管生成、诱导肿瘤浸润、参与免疫抑制与逃逸，其生物学功能与肿瘤发生密切相关，可促进肿瘤进展，与肿瘤预后不良存在密切联系［8］。也有研究发现，肿瘤间质内TAMs 高表达的乳腺癌患者疾病进展快、易发生转移，预后较差，且肿瘤血管生成与TAMs 之间关系密切，与患者微血管密度成正相关［9］。本研究结果提示TAMs 在乳腺癌进展过程中发挥着重要的作用，可能与TAMs可促进肿瘤血管生成、加速肿瘤发展有关。

PRL⁃3 为酪氨酸蛋白磷酸酶家族中的一员，其在肿瘤中生物活性高，在心肌细胞、骨骼肌、胰腺组织中有不同程度表达，在肺部、脑、肾等组织中低表达［10］。以往研究显示PRL⁃3 在正常胃粘膜组织中表达阴性，在胃癌组织中阳性率高，且与胃癌患者淋巴结转移情况密切相关［11］。也有报道显示，PRL⁃3 可促进肿瘤相关性巨噬细胞分泌，从而诱导结肠癌细胞转移，影响患者预后情况［12］。本研究中，PRL⁃3 在癌组织中高表达，淋巴结转移者表达亦高于未转移者，PRL⁃3 高表达为乳腺癌患者预后的相关因素，说明PRL⁃3 在乳腺癌发生、转移的过程中可能发挥了一定的作用。结合以往文献分析，可能与以下几点有关：①PRL⁃3 可刺激血管内皮生长因子及其相关受体的过高表达，诱导肿瘤生长、侵袭和转移；②PRL⁃3 可正向调控P13K 细胞通路诱导肿瘤侵袭和转移；③促使PRL⁃3 信号转导途径激活，进而发挥调控肿瘤细胞活动性和侵袭性；④介导细胞外调节蛋白激酶信号传导通路的作用，可刺激肿瘤血管的生成，进一步加快肿瘤的生长和成熟，同时可诱导淋巴结转移和远处转移［13］。

C⁃erbB⁃2是目前公认与乳腺癌发生、发展之间有密切联系的原癌基因，对细胞生长、增殖、分化具有调控作用；其产物的过度表达往往提示肿瘤恶性程度高，预后情况不佳。目前研究发现C⁃erbB⁃2 在乳腺癌组织中的表达程度结果差异较大，最低阳性表达为20%，最高可达70%，本组中C⁃erbB⁃2 在乳腺癌组织阳性表达率为67.82%，与大部分研究结果相符［14］。有学者认为C⁃erbB⁃2表达与乳腺癌临床分期、病理类型、分化程度等存在相关性，C⁃erbB⁃2 表达情况与乳腺癌患者淋巴结转移情况为正相关，C⁃erbB⁃2 阳性表达者出现转移、复发机率高，总生存期短［15］。本研究中，C⁃erbB⁃2 在癌组织、有淋巴结转移者中表达明显高于癌旁组织以及无淋巴结转移者，且与患者预后存在一定联系，说明C⁃erbB⁃2 表达与乳腺癌淋巴结转移之间密切相关，C⁃erbB⁃2 过度表达的乳腺癌具有更强的侵袭力与转移能力，此类患者预后情况也较差。

综上所述，TAMs、PRL⁃3 及C⁃erbB⁃2 过度表达与乳腺癌淋巴结转移可能存在一定的联系，对乳腺癌患者预后评估有参考价值。