血清人连蛋白在肝硬化患者中的表达及其与肝硬化分级的关联性

陈洲，郭力硕，冉辰辰，赵昌翔

肝硬化是多种慢性肝脏疾病的终末阶段，在中国发病率较高，尤其以病毒性肝炎后肝硬化最为多见[1]。早期肝硬化患者的病死率为1%，进展到失代偿期时可高达57%。此外，肝硬化进展为肝癌的5年累积风险为10%～17%[2]。对肝硬化进行早期诊治具有重要的临床意义。肝组织活检是检测肝硬化的有效手段，但对采样长度和完整门静脉束数量有较高要求，具有诸多局限性。影像学检查安全无创，但存在灵敏度和特异度不高的缺点[2-3]。人连蛋白(Zonulin)是一种47 kDa大小的蛋白，合成于肠道和肝脏内，可参与机体固有免疫应答，调节肠道微生物群平衡[4]。Zonulin在多种疾病中均呈现异常表达，如肾脏疾病、非酒精性脂肪肝、类风湿性关节炎和多发性硬化等[4-5]。已有研究[6]发现，Zonulin是反映肠壁通透性的敏感指标之一，其水平变动可对肠道菌群造成影响 。由于肠道屏障受损、细菌易位与慢性肝脏疾病发生发展密切相关[7]，推测Zonulin可能是一种重要的肝硬化生物学标志物。本研究探讨了肝硬化患者血清Zonulin水平及与肝硬化分级的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 本研究为横断面研究，选取2020年1月—2020年12月本院收治的肝硬化患者164例作为肝硬化组，其中男94例，女70例；年龄26～82(59.01±13.27)岁；平均BMI为(23.01±3.29)kg/m2。纳入标准：(1)符合《中国肝硬化管理指南》[8]中肝硬化的诊断标准；(2)年龄≥18岁；(3)乙型病毒性肝炎所致肝硬化。排除标准：(1)肝癌；(2)脂肪肝；(3)免疫代谢性疾病；(4)胃肠疾病。选取同期体检中心招募的健康受试者80例作为对照组，其中男52例，女28例；年龄24～86(57.23±14.00)岁；平均BMI(22.87±5.23)kg/m2。2组性别、年龄及体质量指数等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 2组研究对象一般资料比较

1.2 血液指标检测方法 采集2组研究对象晨起空腹肘静脉血3 mL，2 500 r/min离心15 min后收集血清，用酶联免疫吸附试验检测血清Zonulin水平，试剂盒购于上海科顺生物科技股份有限公司，货号：1795。用美国贝克曼DXI800自动化学发光免疫分析仪检测AFP水平；美国贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪检测ALB和TBIL水平；用德国BE全自动凝血分析仪检测凝血酶原时间(PT)。

1.3 肝硬化的Child-Pugh分级和CT形态分级 Child-Pugh分级标准包括腹水、肝性脑病、血清胆红素、血清白蛋白和凝血酶原时间，根据5个指标的严重程度分别记以1分，2分和3分，并将计分进行相加。以总分5～6分为A级；7～9分为B级；≥10分为C级[9]。

用美国GE公司64排螺旋CT 680对肝硬化患者进行CT形态检查，根据CT表现进行如下分级：Ⅰ级：肝密度均匀、形态整齐，CT值≥55 HU；脾脏不大，脾指数<300，无门脉高压征；Ⅱ级：肝密度稍不均匀，肝边缘尚属光滑，CT值<55 HU，肝容积略有缩小，尤其以方叶为明显，脾脏略有增大，脾指数300～600，门脉高压征(2～3种)；Ⅲ级：肝密度不均匀，边缘不光滑，肝形态异常，肝裂变宽，脾脏指数>600，有少量腹腔积液，明显的门脉高压征(3～4种)；Ⅳ级：肝密度不均匀，边缘不规整，呈锯齿状，肝裂增宽>2 cm，大量腹腔积液，明显的门脉高压征(4种以上)[10]。

2 结果

2.1 2组研究对象血清学指标比较 肝硬化组AFP、TBIL和PT水平高于对照组，Zonulin和ALB水平低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 2组研究对象血清学指标比较

2.2 不同肝硬化分级的患者间血清Zonulin水平比较 随着Child-Pugh分级增高，肝硬化患者血清Zonulin水平逐渐下降。见表3。随着CT形态分级增高，肝硬化患者血清Zonulin水平逐渐下降。见表4。

表3 不同Child-Pugh分级的肝硬化患者间血清Zonulin水平比较

表4 不同CT形态分级的肝硬化患者间血清Zonulin水平比较

2.3 血清Zonulin与AFP、TBIL、PT、ALB水平的相关性分析 血清Zonulin水平与AFP、TBIL和PT呈负相关(P<0.05)，与ALB呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 血清Zonulin水平与AFP、TBIL、PT、ALB水平的相关性分析

2.4 血清Zonulin诊断肝硬化的ROC曲线 血清Zonulin诊断肝硬化的ROC曲线下面积为0.782(95%CI：0.721～0.823)，最佳截断值为38.69 ng/mL，约登指数为(0.515)，灵敏度和特异度分别为78.25%和73.21%。见图1。

图1 血清Zonulin诊断肝硬化的ROC曲线

3 讨论

肝硬化作为临床常见病，严重影响患者生活质量。寻找早期诊断肝硬化的生物学标志物对改善肝硬化预后有重要意义。紧密连接是组成肠道屏障的重要结构之一，其结构改变可以导致肠道通透性增加,引起细菌易位、水电解质紊乱等。Zonulin是一种调节紧密连接通透性的活性蛋白，是肠壁通透性增加的敏感指标，其表达水平异常与肠道菌群失调有关[11-14]。慢性乙型肝炎后肝硬化患者存在肠道菌群失调，菌群的丰富度和多样性均降低，失代偿期患者的肠道菌群变化更为明显[15]。推测Zonulin与肝炎后肝硬化的发生密切相关。已有研究[16-17]发现，慢性乙型肝炎患者血清Zonulin表达水平下降。但是Zonulin与肝硬化关联性的报道较少。本研究结果发现，肝硬化患者血清Zonulin表达水平明显低于健康人，另外血清Zonulin水平与AFP、TBIL和PT呈负相关，与ALB呈正相关，提示Zonulin可能参与了肝硬化的发病。

ROC曲线常用于分析某指标诊断疾病的价值，本研究发现当Zonulin临界值取38.69 ng/mL时，约登指数最大(0.515)，此时诊断的灵敏度和特异度分别为78.25%和73.21%，提示血清Zonulin水平对肝硬化有一定辅助诊断价值，未来可探讨Zonulin联合其他临床检测指标对肝硬化的诊断价值。

ALB、TBIL和PT是用于判断肝功能Child-Pugh分级的常用指标。分级越高ALB水平越低，TBI和PT增高[18]。本研究发现，血清Zonulin水平与TBIL和PT呈负相关，而与ALB呈正相关，提示Zonulin水平随着肝组织损伤的加重而逐渐下降。此外，对不同Child-Pugh分级的肝硬化患者间血清Zonulin水平进行比较发现，随着Child-Pugh分级增高，患者血清Zonulin水平逐渐下降。由于CT能够直观反映肝脏的形态学改变，显示侧支循环血管的部位及形态，探查腹腔积液，故在肝脏疾病诊断中的应用较为广泛，CT形态学分级对肝硬化的诊断有一定参考意义[19]。本研究对不同CT形态分级的肝硬化患者间血清Zonulin水平进行比较发现，随着CT形态分级增高，患者血清Zonulin水平逐渐下降。提示Zonulin对肝硬化病情严重程度的评估有一定价值。

综上，本研究结果提示，肝硬化患者血清Zonulin水平明显低于健康人，血清Zonulin水平与肝硬化严重程度有关，Zonulin联合CT形态分级有助于肝硬化的预后评估。